№ 4 Основні принципи класифікації мікробів. 9 страница

№ 80 Реакція зв'язування комплементу. Механізм. Компоненти. Застосування.

Реакція зв'язування комплементу (РСК) заключается в тому, що при відповідності один одному антигени і антитіла утворюють іммунний комплекс, до якого через Fc-фрагмент антитіл приєднується комплемент (С), т. Е. Відбувається зв'язування комплементу комплексом антиген антитіло. Якщо ж комплекс антиген-антитіло не утвориться, то комплемент залишається вільним.

Специфічну взаємодію АГ і AT супроводжується адсорбціей (зв'язуванням) комплементу. Оскільки процес связиванія комплементу не виявляється візуально, Ж. Борде і О. Жангу запропонували використовувати в якості індикатора гемолитическую систему (еритроцити барана + гемолітична сироватка), которая показує, фіксований чи комплемент комплексом АГ-АТ. Якщо АГ і AT відповідають один одному, т. Е. Утворився імунний комплекс, то комплемент зв'язується цим комплексом і гемоліза не відбувається. Якщо AT не відповідає АГ, то комплекс не утворюється і комплемент, залишаючись вільним, з'єднується з другої системою і викликає гемоліз.

Компоненти. Реакція зв'язування комплементу (РСК) відноситься до слож-ним серологічним реакціям. Для її проведення необхідні 5 інгредієнтів, а саме: АГ, AT і комплемент (перша система), еритроцити барана і гемолітична сироватка (друга система).

Антигеном для РСК можуть бути культури різних убитих мікроорганізмів, їх лізати, компоненти бактерій, патологіческі змінених і нормальних органів, тканинних ліпідів, віруси і вірусосодержащіе матеріали.

В якості комплементу використовують свіжу або суху сиворотку морської свинки.

Механізм. РСК проводять в дві фази: 1-а фаза - інкубація суміші, що містить три компоненти антиген + антитіло + комплемент; 2-я фаза (індікаторная) - виявлення в суміші вільного комплементу шляхом додавання до неї гемолітіческой системи, що складається з еритроцитів барана, і гемолітичної сироватки, содержащей антитіла до них. У 1-й фазі реакції при утворенні комплексу антиген-антітело відбувається зв'язування їм комплементу, і тоді у 2-й фазі гемоліз сенсібілізірованних антитілами еритроцитів не відбудеться; реакція позитивна. Якщо антиген і антітело не відповідають один одному (в ісследуемом зразку немає антигену або антитіла), комплемент залишається вільним і в 2-й фазі приєднається до комплексу еритроцит - ан-тіерітроцітарное антитіло, викликаючи гемоліз; реакція негативна.

Застосування. РСК застосовують для діагностики багатьох інфекційних хвороб, зокрема сіфіліса (реакція Вассермана).

№ 81 Реакция нейтрализации токсина антитоксином. Ме­ханизм. Способы постановки, применение.

В основі цієї реакції лежить здатність специфічної ан-тітоксіческой сироватки нейтралізувати екзотоксин.

Антитіла імунної сироватки здатні нейтралізувати шкідливу дію мікробів або їх токсинів на чувствітельние клітини і тканини, що пов'язано з блокадою мікробних антигенів антитілами, т. Е. Їх нейтралізацією.

Реакцію нейтралізації (РН) проводять шляхом введення суміші антиген-антитіло тваринам або в чутливі тест-об'єкти (культуру клітин, ембріони). За відсутності у тварин і тест-об'єктів шкідливого дії мікроорганізмов або їх антигенів, токсинів говорять про нейтралізующем дії імунної сироватки і, отже, про спеціфічності взаємодії комплексу антиген-антитіло.

Для проведенія реакції досліджуваний матеріал, в якому передбачається наявність екзотоксину, змішують з антитоксической сироваткою, витримують в термостаті і вводять тваринам (морським свінкам, мишам). Контрольним тваринам вводять фільтрат досліджуються-емого матеріалу, що не оброблений сироваткою. У тому випадку, якщо відбудеться нейтралізація екзотоксину антитоксической сивороткой, тварини дослідної групи залишаться живими. Контрольние тварини загинуть в результаті дії екзотоксину.

№ 79 Реакція преципітації. Механізм. Компоненти. Способи постановки. Застосування.

Реакція преципітації (РП) - це формірованіе і осадження комплексу розчинної молекулярного антигену з антитілами у вигляді помутніння, званого преципітатом. Він утворюється при змішуванні антигенів і антитіл в еквівалентних колічествах; надлишок одного з них знижує рівень освіти імунного комплексу.

РП ставлять у пробірках (реакція кольцепреціпітаціі), в гелях, поживних середовищах та ін. Широке распространеніе отримали різновиди РП в напіврідкому гелі агару або агарози: подвійна іммунодіффузія по Оухтерлоні, радіальна іммунодіффузія, іммуноелектрофорез та ін.

Механізм. Проводиться з прозорими коллоіднимі розчинними антигенами, екстрагований з патологіческого матеріалу, об'єктів зовнішнього середовища або чистих культур бактерій. В реакції використовують прозорі діагностіческіе преципитирующие сироватки з високими титрами антітел. За титр преципитирующих сироватки приймають те найбільше розведення антигену, яке при взаємодії з іммунной сироваткою викликає утворення видимого преципитата - помутніння.

Реакція кольцепреціпітаціі ставиться у вузьких пробірках (діаметр 0, 5 см), в які вносять по 0, 2-0, 3 мл преціпіті-рующей сироватки. Потім пастерівською піпеткою повільно нашаровуються 0, 1-0, 2 мл розчину антигену. Пробірки обережно перекладають в'вертікальное становище. Облік реакції проводять через 1-2 хв. У разі позитивної реакції на кордоні між сироваткою і досліджуваним антигеном з'являється преціпітат у вигляді белого кольца. В контрольных пробирках преци­питат не образуется.

№ 82 Реакція імунофлюоресценції. Механізм, компоненти, застосування.

Імунофлюоресцентний метод (РІФ, реакція імунофлюоресценції, реакція Кунса) - метод виявлення специфічних Аг за допомогою Ат, кон'югованих з флюорохромом. Володіє високою чутливістю і специфічністю.

Застосовується для експрес-діагностики інфекційних захворювань (ідентифікація збудника в досліджуваному матеріалі), а також для визначення Ат і поверхневих рецепторів і маркерів лейкоцитів (иммунофенотипирование) та ін. Клітин.

Виявлення бактеріальних і вірусних антигенів в інфекціонних матеріалах, тканинах тварин і культурах клітин за допомогою флуоресцентних антитіл (сироваток) отримало широке застосування в діагностичній практиці. Приготування флюоресцирующих сироваток засноване на способності деяких флюорохромів (наприклад, ізотіоціанати флюоресцеіна) вступати в хімічний зв'язок з сироватковими білками, не порушуючи їх імунологічної специфічності.

Розрізняють три різновиди методу: прямий, непрямий, з комплементом. Прямий метод РІФ заснований на тому, що антигени тканин чи мікроби, оброблені імунними сироватками з антитілами, міченими флюорохромами, здатні світитися в УФ-променях люмінесцентного мікроскопа. Бактерії в мазку, оброблені такий люминесцирующей сироваткою, світяться по периферії клітини у вигляді облямівки зеленого кольору.

Непрямий метод РІФ полягає у виявленні комплексу антиген - антитіло за допомогою антіглобуліновой (проти антитіла) сироватки, міченої флюорохромом. Для цього мазки з суспензії мікробів обробляють антитілами антимікробної кролячій діагностичної сироватки. Потім антитіла, не пов'язаних антигенами мікробів, відмивають, а що залишилися на мікроби антитіла виявляють, обробляючи мазок антіглобуліновой (антикроличьих) сироваткою, міченої флюорохромами. В результаті утворюється комплекс мікроб + антимікробні кролячі антитіла + антикроличьих антитіла, мічені флюорохромом. Цей комплекс спостерігають в люмінесцентному мікроскопі, як і при прямому методі.

Механізм. На предметному склі готують мазок з досліджуваного ма-теріалу, фіксують на полум'ї і обробляють імунної кролячої сироваткою, що містить антитіла проти антигенів збудника. Для утворення комплексу антиген - антитіло препарат поміщають у вологу камеру і інкубують при 37 ° С протягом 15 хв, після чого ретельно промивають ізотоніческім розчином хлориду натрію для видалення не связавшіхся з антигеном антитіл. Потім на препарат наносять флюоресцірующую антіглобуліновой сироватку проти глобулінів кроліка, витримують протягом 15 хв при 37 ° С, а потім препарат ретельно промивають фізіологічним розчином хлориду натрію. В результаті зв'язування флюоресцирующей антіглобуліновой сироватки з фіксованими на антигене специфічними анти тілами утворюються світяться комплекси антиген - антитіло, які виявляються при люмінесцентної мікроскопії.

№ 83 Імуноферментний аналіз, імуноблотинг. Механізм, компоненти, застосування.

Імуноферментний аналіз або метод - виявлення антігенов за допомогою відповідних їм антитіл, кон'югованих з ферментом-міткою (пероксидазою хрону, бета-галактозидази або лужною фосфатазою). Після з'єднання антигену з меченной ферментом імунною сироваткою в суміш додають субстрат / хромоген. Субстрат розщеплюється ферментом і змінюється колір продукту реакції - інтенсивністю забарвлення прямо пропорційна кількості связавшіхся молекул антигену і антитіл. ІФА застосовують для діагностики вірусних, бактеріальних і паразитарних болезней, зокрема для діагностики ВІЛ-інфекцій, гепатіта В та ін., А також визначення гормонів, ферментів, лекарственних препаратів та інших біологічно активних веществ, що містяться в досліджуваному матеріалі в мінорних концентраціях (1010-1012 г / л).

Твердофазних ІФА - варіант тесту, коли один з компонентов імунної реакції (антиген або антитіло) сорбирован на твердому носії, напр., В лунках планшеток з полістиролу. Компоненти виявляють додаванням мічених антитіл або антігенов. При позитивному результаті змінюється колір хромогена. Щоразу після додавання чергового компонента з лунок видаляють Незв'язана реагенти шляхом промивання,

I. При визначенні антитіл (лівий малюнок) в лунки планшеток з сорбованих антигеном послідовно додають сиворотку крові хворого, антіглобуліновой сироватку, меченную ферментом, і субстрат / хромоген для ферменту.

II. При визначенні антигену (правий малюнок) в лунки з сорби-рова антитілами вносять антиген (напр., Сироватку крові з шуканим антигеном), додають діагностичну сиворотку проти нього і вторинні антитіла (проти діагностіческой сироватки), мічені ферментом, а потім субстрат / хромоген для ферменту.

Конкурентний ІФА для визначення антигенів: шуканий антиген і мічений ферментом антиген конкурують один з одним за зв'язування обмеженої кількості антитіл імунної сироватки.

Інший тест - Конкурентний ІФА для визначення антитіл: шукані антітела і мічені ферментом антитіла конкурують один з другом за антигени, сорбованих на твердій фазі.

Імуноблотинг - високочувствітельний метод виявлення білків, заснований на поєднанні електрофорезу та ІФА або РІА. Імуноблотинг іспользуют як діагностичний метод при ВІЛ-інфекції та ін.

Антигени збудника розділяють з допомогою електрофореза в поліакриламідному гелі, потім переносять їх з гелю на активовану папір або нітроцелюлозну мембрану і виявляють за допомогою ІФА. Фірми випускають такі смужки з «блот» антігенов. На ці смужки наносять сироватку хворого. Потім, після інкубації, відмивають від несвязавшихся антитіл больного і наносять сироватку проти імуноглобулінів человека, мічену ферментом. Утворився на смужці комплекс [антиген + антитіло хворого + антитіло проти Ig людини] виявляють додаванням хромогенного субстрату, що змінює забарвлення під дією ферменту.

№ 85 Діагностикуми. Отримання, застосування.

У діагностичних цілях при виявленні антитіл в сиворотке крові хворих, реконвалесцентів і бактеріоносітелей використовуються серологічні реакції.

Для постановки таких реакцій застосовуються діагностикуми - препарати, що містять суспензію знешкоджених мікроорганізмов або певні антигени.

Необхідність використання діагностикумів для серологіческіх реакцій пов'язана не тільки з явним їх преімуществом перед живими культурами мікробів (безпека в работе), але ще й тому, що для приготування діагностикумів підбираються штами мікроорганізмів з високою чувствітельностью до антитіл і здатністю тривало сохранять антигенні властивості.

Для інактивації мікроорганізмів при приготуванні діагностикумів найчастіше використовуються хімічні вещества, особливо формалін, який є найкращим консервантом. Убиті нагріванням мікроби гірше зберігають антигенні властивості і застосовуються рідко.

В серологічних реакціях (реакції аглютинації, реакціі пасивної гемаглютинації, реакції зв'язування комплемента, реакції гальмування гемаглютинації) для виявлення специфічних антитіл застосовуються: бактеріальні, еритроцитарні та вірусні діагностикуми.

Бактеріальні діагностикуми можуть містити інактивовану мікробну суспензію або окремі антигенні компоненти бактерій: О, Н або Vi-антигени і використовуються в реакціях аглютинації.

Еритроцитарні діагностикуми являють собою еритроцити (оброблені таніном або формаліном) з адсорбірованнимі на них антигенами, витягнутими з бактерій, і застосовуються в РПГА (реакції пасивної гемаглютинації). У тому випадку, коли РПГА використовується для виявленія антигену у виділеннях хворих, в тканинах та ін., При-міняють «антитільної діагностикуми», т. Е. Еритроцити, сен-сібілізірованние антитілами.

Вірусні діагностикуми - препарати, що містять інактірованние віруссодержащего рідини (культуральні, з курячих ембріонів або організму тварин, заражених відповідним вірусом), застосовуються в РСК (реакції зв'язування комплементу), реакції гальмування гемаглютинації (РГГА) і реакції нейтралізації.

В даний час в лабораторіях використовуються следующіе діагноста куми.

1. Бактеріальний діагностикум сальмонел тифу. Пріменяется в реакції аглютинації для виявлення антитіл у сироватці хворих.

2. Сальмонельозна О-діагностикуми містять О-антигени різних груп сальмонел (інактивованих 15% -ним розчином гліцерину). Застосовуються для виявлення О-аптітел при сальмонельозних інфекціях в реакції агглютінаціі з сироваткою хворих.

3. Сальмонельозна Н-монодіагностікуми. Іспользуются в реакції аглютинації для визначення захворювання в минулому (анамнестична реакція аглютинації) і рідше з діагностичною метою.

4. Vi - черевнотифозний діагностикумів. Застосовується в реакції аглютинації при виявленні брюшнотіфозного бактерионосительства.

5. Єдиний бруцеллезний діагностикум - суспензія бруцел (інактивованих фенолом), підфарбована метиленовим синім. Застосовується для визначення антитіл у сироватках крові хворих на бруцельоз людей і тварин в реакціях аглютинації Райта і Хеддльсона.

6. Еритроцитарний сальмонельозний О-діагностикум - суспензія еритроцитів з адсорбованими на них О-антигенами різних груп сальмонел. Використовується для постановки РПГА з сироваткою хворого при уточненні клінічного діагнозу сальмонеллееной інфекції.

7. Еритроцитарний Vi-діагностикум - еритроцити, Сенс-білізірованние очищеним Vi-антігеіом S. typhi, пріменяется в РПГА при виявленні черевнотифозними бактеріоносітельства.

8. Грипозний діагностикум являє собою аллантоісную рідина інфікованих вірусом грипу (типів А, В) курячих ембріонів і інактивовану мертіолат або формаліном. Діагностикуми необхідні при постановці РГГА з парними сироватками хворих для уточнення клініческого діагнозу і циркулюючого типу вірусу грипу.

9. Діагностикум вірусу кліщового енцефаліту отримують з суспензії мозку білих мишей, заражених вірусом клещевого енцефаліту. Суспензію піддають центріфугірованію (для освітлення) і інактивують хімічними веществамі.

Діагностикум використовується в РГГА і РЗК з сироваткою хворих при діагностиці захворювання.

№ 87 Методи приготування і застосування агглютінірующіх, адсорбованих сироваток.

У діагностиці інфекційних хвороб широко пріменяются імунні реакції при ідентифікації збудника: при встановленні родовий, видовий і типовий приналежності мікроба (вірусу). Для постановки таких реакцій необхідні специфічні діагностичні сироватки, які в завісімості від змісту відповідних антитіл називаються агглютинирующие, преципитирующие, гемолітіческіе, противірусні.

Агглютинирующие сироватки. Агглютинируют сироватку отримують імунізацією Кроликів (внутрішньовенно, підшкірно або внутрішньочеревно) суспензією убитих бактерій, починаючи з дози 200 млн., Потім 500 млн., 1 млрд., 2 млрд., Мікробних тіл в 1 мл, з інтервалами 5 днів. Через 7-8 днів після останньої імунізації беруть кров і визначають титр антитіл. Титром агглютінірующей сироватки називається те максімальное розведення сироватки, при якому відбувається аглютинація з соответствующім мікроорганізмом.

Агглютинирующие сироватки застосовуються при ідентіфікаціі мікроба в розгорнутої реакції аглютинації. Якщо досліджуваний мікроорганізм аглютинується сироваткою до титру або до половини значення титру, його можна вважати належним до того виду, назва якого вказано на етикетці ампули.

Неадсорбованими агглютинирующие сироватки обладают високим титром - до 1: 12800 - 1: 25600.

Недоліком таких сироваток є те, що вони способни давати групові реакції аглютинації, так як вони містять антитіла до бактерій, що має спільні антигени в межах сімейства, групи і роду.

Тому в даний час більшість агглютінірующіх сироваток випускаються адсорбція, монорецепторними і адсорбованими полівалентними, содержащімі тільки типові або видові антитіла і соответствующімі або певного типу або виду мікроорганізму. Ці сироватки не підлягають розведенню.

Для отримання таких сироваток нріменяют метод Кастелляні - метод адсорбції, який полягає в тому, що при насиченні агглютинируют сироватки родственнимі гетерогенними бактеріями відбувається адсорбція группон антитіл, а специфічні антитіла залишаються в сиворотке. В залежності від повноти виснаження групових агглютінінов можна отримати монорецепторні сироватки - сивороткі, що мають антитіла тільки до одного рецептора-антигену або адсорбовані, полівалентні, що дають реакції агглютінаціі з двома - трьома спорідненими бактеріями, імеющімі загальний антиген, в щодо якого проводилася адсорбція.

Адсорбовані сироватки застосовують при ідентіфікаціі виділених збудників в реакції аглютинації на склі (пластинчастий метод).

Агглютинирующие сироватки найбільш широко пріменяются при діагностиці захворювань, що викликаються бактеріями родини Enferobacferiaceae. Так, при ідентифікації ешерихій використовуються полівалентні і типові ОК-сироватки; при диференціації сальмонел - набір сироваток: агглютінірующая адсорбована полівалентна сальмонельозна О-сироватка (груп А, В, С, Д, Е) - для визначення приналежності до роду Salmonella, при позитивному результате - визначають окремо з кожною сироваткою (входя щей в суміш) серологическую групу і на закінчення определяется серологічний тип виділеного збудника з моно-рецепторними Н-сироватками сальмонел, що входять в дану групу.

№ 88 Вакцини. Визначення. Сучасна класифікація вакцин. Вимоги, що пред'являються до сучасних вакцинних препаратів.

Вакцина - медичний препарат, призначений для створення імунітету до інфекційних хвороб.

Класифікації вакцин:

1. Жівие вакцини - препарати, діючим початком в яких є ослаблені тим чи іншим способом, що втратили свою вірулентність, але зберегли специфічну антигенность штами патогенних бактерій. Прикладом таких вакцин є БЦЖ і вакцина проти натуральної віспи людини, в якості якої використовується непатогенних для людини вірус віспи корів.

2. Інактівірованние (убиті) вакцини - препарати, як діючого початку включають вбиті хімічним або фізичним способом культури патогенних вірусів чи бактерій, (клітинні, віріони) або ж витягнуті з патогенних мікробів комплекси антигенів, що містять у своєму складі проективні антигени (субклітинні, субвіріонні вакцини). В препарати іноді додають консерванти і ад'юванти.

Молекулярні вакцини - в них антиген знаходиться в молекулярній формі або навіть у вигляді фрагментів його молекул, що визначають специфічність т. Е. У вигляді епітопів, детермінант.

Корпускулярні вакцини - містять у своєму складі протективний антиген

3. Анатоксіни відносяться до числа найбільш ефективних препаратів. Принцип отримання - токсин відповідної бактерії в молекулярному вигляді перетворюють на нетоксичну, але зберегла свою антигенну специфічність форму шляхом впливу 0. 4% формальдегіду при 37t протягом 3-4 тижнів, далі анатоксин концентрують, очищають, додають ад'юванти.

4. Сінтетіческіе вакцини. Молекули епітопів самі по собі не мають високу імуногенність для підвищення їх антигенних властивостей ці молекули зшиваються з полімерним крупномолекулярні нешкідливим речовиною, іноді додають ад'юванти.

5. Ассоціірованние вакцини - препарати, що включають кілька різнорідних антигенів.

Вимоги, що пред'являються до сучасних вакцин:

імуногенність;

Низька реактогенність (алергенність);

Не повинні володіти тератогенністю, онкогенні;

Штами, з яких приготовлена вакцина, повинні бути генетично стабільні;

Тривалий термін зберігання;

Технологічність виробництва;

Простота і доступність у застосуванні.

№ 89 Живі вакцини. отримання, застосування. Переваги і недоліки.

Живі вакцини - препарати, діючим початком в яких є ослаблені тим чи іншим способом, що втратили свою вірулентність, але зберегли специфічну антигенность штами патогенних бактерій.

Аттенуація (ослаблення) можлива шляхом впливу на штам хімічних (мутагени) і фізичних (температура) факторів або за допомогою тривалих пасажів через нечутливий організм. Так само в якості живих вакцин використовуються дівергентние штами (непатогенні для людини), що мають спільні протективного антигени з патогенними для людини мікробами. Прикладом такої вакцини є БЦЖ і вакцина проти натуральної віспи.

Можливе отримання живих вакцин генно-інженерним способом. Принцип отримання таких вакцин зводиться до створення непатогенних для людини рекмбінантних штамів, що несуть протективного антигени патогенних мікробів і здатних при введенні в орг. людини розмножуватися і створювати імунітет. Такі вакцини називають векторними.

Незалежно від того, які штами включені в вакцини, бактерії отримують шляхом вирощування на штучних поживних середовищах, культурах клітин або курячих ембріонах. У живу вакцину, як правило, додають стабілізатор, після чого піддають Ліофільні висушування.

У зв'язку з тим, що живі вакцини здатні викликати вакцин інфекцію (живі аттенуіровані мікроби розмножуються в організмі, викликаючи запальний процес проходить без клінічних проявів), вони завжди викликають перебудову імунобіологічного статусу організму і утворення специфічних антитіл. Це так само може бути недоліком, т. К. Живі вакцини частіше викликають алергічні реакції.

Вакцини даного типу, як правило, вводяться одноразово.

Приклади: сібіреязвенная вакцина, чумна вакцина, бруцеллезнимі вакцина, БЦЖ вакцина, оспенная дермальная вакцина.

№ 92 Молекулярні вакцини. Анатоксини. Одержання, очистка, титрування. Застосування.

Молекулярні вакцини - в них антиген знаходиться в молекулярній формі або навіть у вигляді фрагментів його молекул, що визначають специфічність т. Е. У вигляді епітопів, детермінант.

У процесі культивування природних патогенних мікробів можна отримати протективний антиген, який синтезується цими бактеріями токсин потім перетворюється в анатоксин, який зберігає специфічну антигенность і імуногенність. Анатоксини є одним з видів молекулярних вакцин. Анатоксини - препарати, отримані з бактеріальних екзотоксинів, повністю позбавлені своїх токсичних властивостей, але зберегли антигенні й імуногенні властивості. Отримання: токсигенні бактерії вирощують на рідких середовищах, фільтрують за допомогою бактеріальних фільтрів для видалення мікробних тіл, до фільтрату додають 0, 4% формаліну і витримують в термостаті при 30-40t на 4 тижні до повного зникнення токсичних властивостей, перевіряють на стерильність, токсигенность і імуногенність. Ці препарати називаються нативними анатоксин, в даний час майже не використовуються, т. К. Містять велику кількість баластних речовин, що несприятливо впливають на організм. Анатоксини піддаю фізичної та хімічної очистки, адсорбують на ад'ювантом. Такі препарати називаються адсорбованими високоочищеними концентрованими анатоксинами.

Титрування анатоксинів в реакції фоллікуляціі виробляють за стандартною фоллікулірующей атітоксіческой сироватці, в якій відома кількість антитоксичних одиниць. 1 антигенная одиниця анатоксину позначається Lf, це та кількість анатоксину, яке вступає в реакцію фоллікуляціі з 1 одиницею дифтерійного анатоксину.

Анатоксини застосовуються для профілактики і рідше, для лікування токсінеміческіх інфекцій дифтерія, газова гангрена, ботулізм, правець). Так само анатоксини застосовуються для отримання антитоксических сироваток шляхом гипериммунизации тварин.

Приклади препаратів: АКДС, АДС, адсорбований стафілококовий анатоксин, ботуліністіческого анатоксин, анатоксини з екзотоксинів збудників газових інфекцій.

№ 94 Генно-інженерні вакцини. Принципи отримання, застосування.

Генно-інженерні вакцини - це препарати, отримані за допомогою біотехнології, яка по суті зводитися до генетичної рекомбінації.

Для початку отримують ген, який повинен бути вбудований в геном реципієнта. Невеликі гени можуть бути отримані методом хімічного синтезу. Для цього розшифровується число і послідовність амінокислот у білковій молекулі речовини, потім за цими даними дізнаються черговість нуклеотидів в гені, далі йде синтез гена хімічним шляхом.

Великі структури, які досить складно синтезувати виходять шляхом виділення (клонування), прицільного вищепленію цих генетичних утворень за допомогою рестриктаз.

Отриманий одним із способів цільової ген за допомогою ферментів зшивається з іншим геном, який використовується в якості вектора для вбудовування гібридного гена в клітину. Вектором можуть служити плазміди, бактеріофаги, віруси людини і тварин. Експрессіруемий ген вбудовується в бактеріальну або тваринну клітину, яка починає синтезувати невластиве їй раніше речовина, кодуються експерссіруемим геном.

В якості реципієнтів експрессіруемого гена найчастіше використовується E. coli, B. subtilis, псевдомонади, дріжджі, віруси. деякі штами здатні переключатися на синтез чужорідного речовини до 50% своїх синтетичних можливостей - ці штам називаються суперпродуцентів.

Іноді до генно-інженерним вакцинам додається ад'ювант.

Прикладами таких вакцин служать вакцина проти гепатиту В (Енджерікс), сифілісу, холери, бруцельозу, грипу, сказу.

Є певні складності в розробці та застосуванні:

- Тривалий час до генно-інженерним препаратам ставилися насторожено.

- На розробку технології для отримання вакцини витрачаються значні кошти

- При отриманні препаратів даними способом виникає питання про ідентичність отриманого матеріалу природному речовині.

№ 95 Імунні сироватки. Класифікація. Одержання, очистка. Застосування.

Імунні сироватки: імунологічні препарати на основі антитіл.

1. Антітоксіческіе - сироватки проти дифтерії, правця, ботулізму, газової гангрени, тобто сивороткі, що містять як антитіл антитоксини, які нейтралізують специфічні токсини.

2. Антібактеріальние - сироватки, що містять аглютиніни, преціпітіни, комплементсвязивающіе антитіла до возбудітелям черевного тифу, дизентерії, чуми, коклюшу.

3. Протівовірусние сироватки (корева, гріппозная, антирабическая) містять вируснейтрализующие, комплементсвязивающіе противірусні антитіла.

Імунні сироватки отримують шляхом гіперіммунізаціі тварин (лошаді) специфічним антигеном (анатоксином, бактеріальними або вірусними культурами і їх антигенами) з последующім, в період максимального антителообразования, виділенням з крові імунної сироватки. Імунні сивороткі, отримані від тварин, називають гетерогенними, так як вони містять чужорідний-ні для людини сироваткові білки.

Для отримання гомологічних нечужеродних імунних сироваток використовують сивороткі перехворіли людей (корева, оспенная сироватки) або спеціально імунізованих людей-донорів (протиправцева, протівоботулініческая), що містять антитіла до ряду збудників інфекційних хвороб внаслідок вакцінаціі або перенесеного захворювання.

Нативні імунні сироватки містять непотрібні білки (альбумін), з цих сироваток виділяють і піддають очищенню специфічні білки-імуноглобуліни. Методи очищення: осадження спиртом, ацетоном на холоді, обробка ферментами.

Імунні сироватки створюють пасивний специфічний імунітет відразу після введення. Застосовують з лікувальною і профілактичною метою. Для лікування токсінеміческіх інфекцій (правець, ботулізм, дифтерія, газова гангрена), а також для леченія бактеріальних і вірусних інфекцій (кір, краснуха, чума, сибірка). З лікувальною метою сироваткові препарати в / м. Профілактично: в / м особам, які мали контакт з хворим, для створення пасивного імунітету.

№ 96 Антитоксичні сироватки. Одержання, очистка, тітрованіе. Застосування. Ускладнення при використанні і їх предупрежденіе.

Антитоксичні гетерогенні сироватки виходять шляхом гипериммунизации різних тварин. Вони називаються гетерогенними тому містять чужорідні для людини сироваткові білки. Більш кращим є застосування гомологічних антитоксических сироваток, для отримання яких використовується сироватка перехворіли людей (корева, паротідная), або спеціально імунізованих донорів (протиправцева, протівоботуліністіческая), сироватка з плацентарної а так само абортивній крові, що містять антитіла до ряду збудників інфекційних хвороб внаслідок вакцинації або перенесеного захворювання.

Для очищення і концентрування антитоксических сироваток використовують методи: осадження спиртом або ацетоном на холоді, обробка ферментами, аффинная хроматографія, ультрафільтрація.

Активність імунних антитоксических сироваток виражають у антитоксических одиницях, тобто тим найменшим кол-вом антитіл, яке викликає видиму або регистрируемую відповідним способом реакцію з певним кол-вом специфічного антигену. активність антитоксичної протиправцевої сироватки та відповідного Ig виражається в антитоксичних одиницях.

Антитоксичні сироватки застосовуються для лікування токсінеміческіх інфекцій (правець, ботулізм, дифтерія, газова гангрена).

Після введення антитоксичних сироваток можливі ускладнення у вигляді анафілактичного шоку і сироваткової хвороби, тому перед введенням препаратів ставлять алергічну пробу на чутливість до них пацієнта, а вводять їх дрібно, по Безредке.

№ 97 Препарати імуноглобулінів. Одержання, очистка, по-казания до застосування.

Нативні імунні сироватки містять непотрібні білки (альбумін), з цих сироваток виділяють і піддають очищенню специфічні білки-імуноглобуліни.

Імуноглобуліни, імунні сироватки поділяють на:

1. Антітоксіческіе - сироватки проти дифтерії, правця, ботулізму, газової гангрени, тобто сивороткі, що містять як антитіл антитоксини, які нейтралізують специфічні токсини.

2. Антібактеріальние - сироватки, що містять аглютиніни, преціпітіни, комплементсвязивающіе антитіла до возбудітелям черевного тифу, дизентерії, чуми, коклюшу.

3. Протівовірусние сироватки (корева, гріппозная, антирабическая) містять вируснейтрализующие, комплементсвязивающіе противірусні антитіла.

Методи очищення: осадження спиртом, ацетоном на холоді, обробка ферментами, аффинная хроматографія, ультрафільтрація.

Активність імуноглобулінів виражають у антитоксических одиницях, в титрах вируснейтрализующие, гемагглютінірующей, агглютинируют активності, тобто тим найменшою кількістю антитіл, яке викликає видиму реакцію з певною кількістю специфічного антигену.

Імуноглобуліни створюють пасивний специфічний імунітет відразу після введення. Застосовують з лікувальною і профілактичною метою. Для лікування токсінеміческіх інфекцій (правець, ботулізм, дифтерія, газова гангрена), а також для леченія бактеріальних і вірусних інфекцій (кір, краснуха, чума, сибірка). З лікувальною метою сироваткові препарати в / м. Профілактично: в / м особам, які мали контакт з хворим, для створення пасивного імунітету.

При необхідності екстреного створення імунітету, для лікування розвивається інфекції застосовують імуноглобуліни, що містять готові антитіла.

№ 99 Інтерферони. Природа, способи отримання. Застосування.

Інтерферони - глікопротеїни, що виробляються клітинами у відповідь на вірусну інфекцію та інші стимули. Блокіруют репродукцію вірусу в інших клітинах і беруть участь у взаємодії клітин імунної системи. Розрізняють дві серологіческіе групи інтерферонів: I тип - ІФН-α і ІФН -β; II тип - ІФН-. γ Інтерферони I типу надають протівовірусние і протипухлинні ефекти, в той час як інтерферон II типу регулює специфічний імунну відповідь і неспеціфіческую резистентність.

α - інтерферон (лейкоцитарний) продукується лейкоцитами, обробленими вірусами та іншими агентами. β -інтерферон (фібробластний) продукується фібробластами, обробленими вірусами.

ІФН I типу, зв'язуючись із здоровими клітинами, захищає їх від вірусів. Антивірусну дію ІФН I типу може обумовлюватися і тим, що він здатний угнетать клітинну проліферацію, перешкоджаючи синтезу амінокіслот.

ІФН-γ продукується Т-лімфоцитами і NK. Стимулює активність Т- і В-лімфоцитів, моноцітов / макрофагів і нейтрофілів. Індукує апоптоз активованих макрофагів, кератиноцитов, гепатоцитів, клітин кісткового мозку, ендотеліоцитів і пригнічує апоптоз периферичних моноцитів і герпес-інфікованих нейронів.

Генно-інженерний лейкоцитарний інтерферон отримують в прокариотических системах (кишкової палички). Біотехнологія отримання лейкоцитарного інтерферону включає наступні етапи: 1) обработка лейкоцитарної маси індукторами інтерферону; 2) виділення з оброблених клітин суміші іРНК; 3) отримання сумарних комплементарних ДНК за допомогою зворотної транскриптази; 4) вбудовування кДНК в плазміду кишкової палички та її клонування; 5) відбір клонів, що містять гени інтерферону; 6) включення в плазміду сильного промотора для успішної транскрипції гена; 7) експресія гена інтерферону, тобто синтез відповідного білка; 8) руйнування прокаріотів клітин і очищення інтерферону за допомогою афінної хроматографії.

Інтерферони застосовуються для профілактікі і лікування ряду вірусних інфекцій. Їх ефект визначається дозой препарату, однак високі дози інтерферону надають токсичну дію. Інтерферони широко застосовуються при грипі та інших гострих респіраторних захворюваннях. Препарат ефективний на ранніх стадіях заболеванія, застосовується місцево. Інтерферони надають терапевтичну дію при гепатиті В, герпесі, а також при злоякісних ново-утвореннях.

© helpiks.su При использовании или копировании материалов прямая ссылка на сайт обязательна.