32.Қышқыл бояуыштарды қалай түсінесіз? 6 страница

33)Целоидинге сің діру ж/е қ ұ ю. Целлоидин сұ йық тығ ын дайындау. Тілінділерді целлоидиндеу. Сызба тү рінде кө рсетің із? Целлоидинге сің діру жә не қ ұ ю. Целлоидин сұ йық тығ ын дайындау. Нағ ыз целоидин дегеніміз коллоидты нитроклетчатканың жоғ арғ ы сорты, ол қ алайыдан жасалғ ан ыдыста желатин тә різді, жартылай мө лдір тү сті тү рінде сатылады. Бұ л пластинкаларды қ олданар алдында ұ сақ тап, сү згіш қ ағ аздар арасында t=+37°+40° қ ұ рғ атып, абсолютті спиртке спирт эфир (1: 1) қ осып, сұ йық тық жасау керек: бірінші ө лшемі қ оюлығ ы ара балындай, (8-10%), ал екінші глицерин қ оюлығ ындай (4-5%) сұ йық тық жасалады. Ол ү шін қ ою целлоидин сұ йық тығ ына (8-10%), абсолютті спирт жә не эфир қ осу керек (1: 1). Целлоидиннің еруі ө те кө п уақ ыт алады, сол ү шін оны бірінші абсолютті спиртте бө рттіріп алып (24 сағ ат), содан кейін эфир қ осса еруі тездетіледі. Целлоидин дайындағ анда абсолютті спиртпен бірдей 96°, жә не 2% карболқ ышқ ылымен (96° спиртте дайындалғ ан) қ олдануғ а болады. Тілінділерді целлоидиндеу. Бұ л ә дісті мезенхимды ағ залар мен кесу уақ ытында ү гітіліп кететін ағ заларғ а (трахея, тері т. б. ) қ олдануғ а болады. Ағ за тілімдерін сусыздандыру кү штілігі жоғ арылай тү сетін спирттерде ө теді, содан соң 96° спирт-эфир (1: 1) қ оспасына ұ зақ тығ ы 6-24 сағ аттай салып қ ояды. Сызба тү рінде кө рсету:

	Ағ за тілінділерін ағ ынды суда жуу	24 сағ ат
	Кү ші ө се тү сетін спирттерде сусыздандыру	12-24 сағ ат
	2 ө лшем абсолютті спирт	12-24 сағ ат
	Спирт-эфирде (1: 1)	4-20 сағ ат
	2% целоидин сұ йығ ында	2-6 кү н
	4-6% целоидинде	2-6 кү н
	Қ ою 8-10%-тік целоидинде	2-7 кү н

Целоидин сің іп болғ ан соң тілінділерді хлороформ арқ ылы тығ ыздандырып, келесі кезең де 70° спирт қ ұ йып, сол спирттің ішінде сақ тауғ а болады. Целоидиндеу кестесі.

1. Бекіту	1. Формалин 10-15%	24 сағ ат
	2. Спирт формалин	24 сағ ат
	3. Карнуа сұ йық тығ ы	2-4 сағ ат
	4. Спирт 96°-100°	12-24 сағ ат
	5. Ценкер-формол	8-12-24 сағ ат
	6. Орта сұ йық тығ ы	24-48 сағ ат
	7. Рего сұ йық тығ ы	24-48 сағ ат
	8. Ағ ынды суда жуу	24-48 сағ ат
2. Сусыздандыру	2. 1. Спирт 96°	24 сағ ат
	2. 2. 96°, 100° карбольды спирт	24 сағ ат
3. Целоидин қ ұ ю	3. 1. Спирт-эфир қ оспасы	6-24 сағ ат
	3. 2. 4-5% целлоидин	2-4 кү н
	3. 3. 10% целлоидин	1-2 кү н
	3. 4. Целлоидинде тығ ыздаты целлоидинды кесекшелерді қ адыпқ а жабыстырып 70° спиртте сақ тау	2-3 кү н

Екі сызбадағ ы уақ ыттың ә ртү рлі болуы ағ за тілінділерінің кө леміне жә не дененің ағ засына байланысты болғ андық тан, уақ ытты тә жірибе жолымен таң дау дұ рыс. Целлоидин-парафинге сің діру. Бұ л ә дістің бірнеше тү рлері болады, жуу мен сусыздандыру жұ мыстары стандартты болып келеді. Ал спирт-эфирден кейін кесекшелердің сің іруі 1-3 кү н 2% целлоидинмен тең мө лшерлі кастор майы бар қ оспада жү реді. Келесі кезең де ә рбір сағ ат сайын 3 рет хлороформды ауыстырып отырып, ағ за тілінділерінен кастор майын жою. Одан кейін кесекшеге парафин сің іру жә не қ ұ ю стандартты ә діс бойынша жү ргізіледі.

34)Буферлі ерітінділерді қ алай дайындау керек екенін тү сің дірің із? Организм клеткаларындағ ы ферменттердің қ атысуымен жү ретін химиялық процестер, кейбір жағ дайларды керек етеді, оның ішінде ортаның рН маң ызды орын алады. Бұ рыннан белгілі алынғ ан ерітіндінің қ ышқ ылдығ ы Н+ ионының қ оюлығ ына байланысты, ал оның сілтілігі ОН- ионының қ оюлығ ына байланысты екендігі бұ рыннан белгілі жағ дай. Тұ рақ ты температурада тү зілген оң теріс иондардың – кө лемі де тұ рақ ты келеді. Бір кө рсеткішті біліп алып, екіншісін анық тауғ а болады. Осығ ан орай, химияда ерітіндіге қ ышқ ылды жә не сілтіні белгілеуге сутектік кө рсеткіш арқ ылы рН, теріс белгімен алынғ ан логарифмде Н+ ионын кү шімен белгілеуге ұ сынды. Тү рлі ферменттер ө зінің белсенділігін кө рсету ү шін рН-ң ә р белгісін керек етеді. Сілтілі фосфатазағ а қ олайлы рН 9, 0 болса, қ ышқ ыл фосфатазағ а сә йкес рН 5, 0 болады. Гистохимиямен ферменттердің белсенділігін кө рсеті ү шін жақ сы жағ дай жасау керек, ол ү шін жетілдіру ортасында берілген ферменттерге қ олайлы рН белгісі сақ талу қ ажет. Бұ л жағ дайды жетілдіру ортасында буферлі қ осылысты берілген рН белгісімен бірге енгізумен орындалады. Кө птеп таралғ ан буферлі ерітінді болып фосфатты, ацетатты жә не трис буфер саналады. Буферлі қ осылысты жасау ү шін мынаны еске алу қ ажет: ерітінді кү шінің реактивтігін анық тау ү шін молярлы жә не нормальды деген тү сінік қ олданылады. Ерітінді молярлығ ы (М) – 1 литр ерітінді қ ұ рамындағ ы заттардың грамм – моль мө лшері. Берілген заттағ ы грамм-моль молекулалық салмағ ы, граммен белгіленген. Нормальды (N) – 1 литр ерітіндідегі грамм-эквивалентті мө лшері. Грамм-эквивалент – берілген зат мө лшері, берілген реакциядағ ы 1 грамм сутегідегі химиялық тепе-тең дігі. Сондық тан: Қ ышқ ылдарғ а: М (грамм молекула) М, N=(NН2SО4 = ), Н- мө лшері 2. Сілтілерге: М (грамм молекула) М, N=(Nва(ОН)2 = ), ОН тобының мө лшері 2. Тұ здарғ а: М (грамм молекула) М, N=NfеСl3= ). Металл санының саны жә не оның валенттілігі 3. Фосфатты буфер (рН6, 0-8, 0). Ерітінділер: А –0, 2 МКН2РО4 (13, 6 г тұ з 1 литр дистильденген суда). 100 мл буфер алу керек рН-қ а А жә не Б ерітінділерін 3-ші кестеді кө рсеткендей қ ұ ю қ ажет. Ацетатты буфер (рН 3, 6 – 5, 6). Ерітінділер А – 0, 2 М КН2РО4 (13, 6 г тұ з 1 литр дистилденген суда); Б – 0, 2 М Nа2НРО4 (31, 2 г Nа 2НРО4 х 22Н2О 1 литр дистилденген суда). Ацетатты буфер (рН 3, 6-5, 6). Ерітінділер А – 0, 5 N СН3СООН (30 мл мұ зды сірке қ ышқ ылына 970 мл дистилденген сумен толтыру); Б – 0, 5 NСН3СООН (61 грамм тұ зды 1 л дистилденген суда, еріту). Ерітіндіге А жә не Б мө лшері 4-ші кестеде кө рсетілгендей қ ұ ю. Трис – буфер (рН 7, 2-9, 0). Ерітіндіге А – 0, 2 М трис (оксиметил) аминометан (24, 3 грамм тұ з 1 л дистилденген суда); Б – 0, 1 NНСl. Ерітіндіге А жә не Б мө лшері 5-ші кестеде кө рсетілгендей қ ұ йып, 100 мл-ге дейін дистилденген сумен толтыру. Бастапқ ы ерітінділер жә не буферлі қ оспалардың ө зі де ұ зақ уақ ыт сақ талады. Қ ателеспеу ү шін қ олдану алдында буферлі ерітінділердегі дайындалғ ан рН-ты тексеру қ ажет. Жуық тап тексеру индикаторлы қ ағ аз арқ ылы, ал анығ ырақ тексеру арнайы аспап – потенциометр (рН – метр) кө мегі арқ ылы жү зеге асады

35)Нуклеин қ ышқ ылдарын гистохимиялық бө ліп алу тә сілін кө рсетің із? НУКЛЕИН Қ ЫШҚ ЫЛДАРДЫ БӨ ЛІП АЛУ. РНҚ -ның ДНҚ -дан ерекшелігі ә рқ ашанда жалғ ыз тізбекті тү рде болады. Ереже бойынша, ДНҚ клетка ядросында орналасады, митохондрия мен пластидетерде де аздап кездеседі. РНҚ негізінен кө бінесе, микросомды фракциядағ ы кү йінде болады (эндоплазматикалық ретикулуммен байланысты Паллада тү йіршіктері). Нуклеин қ ышқ ылдарын гистохимиялық бө ліп алу кезінде келесідей принциптер қ олданылады: 1)УФ-сә улесін жұ ту арқ ылы пуриндік жә не пиримидиндік негіздерді бө ліп алу; 2)Кө мірсулы компоненттерді бө ліп алу; 3)Фосфор қ ышқ ылын бө ліп алу; 4)Базофильдің бө лінуі; 4)Арнайы маманданғ ан ферменттік жә не химиялық экстрация ә дісі арқ ылы бө ліп алу. УФ-сә улесін жұ ту арқ ылы пуриндік жә не пиримидиндік негіздерді бө ліп алу. Сандық жә не сапалық ДНҚ мен РНҚ -ны бө ліп алу ү шін, УК-сә улесін жұ ту ә дісі арқ ылы қ олданылуғ а негізделген, пуриндік жә не пиримидиндік негіздердің гетероциклдік сақ ина негізінде УК-сә уле ұ зындығ ы 260 нм толқ ында жұ тылады. Бұ л қ иын да кө п ең бекті қ ажет ететін ә діс болып табылады. Бірақ оның кө мегі арқ ылы, бірден ДНҚ мен РНҚ ның дифференциалды бө ліп алуды жү ргізуге болмайды. Кө мірсулы компоненттерді бө ліп алу реакциясы. Фельген реакциясы. Бұ л ә діс ә лсіз гидролиздің нә тижесінде ө ң делетін препаратта 1н. HСl ә сер етуі арқ ылы C_1-дезоксирибоза атомымен байланысты пуриндік негіздердің ыдырауына негізделген. Соғ ан қ арамастан қ алыптасқ ан реакцияғ а тү скіш альдегидті топтар Шифф реактивімен қ ышқ ылғ а тө зімді қ ызылда –қ ызыл-кү лгін тү сті бояғ ыштар береді. Гидролиз жағ дайын нақ ты қ адағ алау кезінде дезоксирибозаның фосфатты кө пірі бұ зылмайды, барлық байланыстар қ ышқ ылдық қ асиеті мен ерімеу процесін сақ тап қ алады. Қ ышқ ылдық гидролиз нә тижесінде РНҚ рибозасынан альдегидтердің қ алыптасуы болмайды, бұ л кезде практикалық тұ рғ ыдан алғ анда, кесіндідегі РНҚ толығ ымен шайылып кетеді. Фельген реакциясы бойынша дұ рыс жұ ргізу кезінде РНҚ толығ ымен боялмайды. Бос альдегидтік топтар (плазмали) бақ ылау тә жірибесінде Шифф реактивімен ө ң деу кезінде жә не тұ з қ ышқ ылды гидролиз нә тижесінде бө ліп алуғ а болады. Бұ л процесс кезінде гидролиз нә тижесінде босағ ан пентозаның альдегидті топтарын ажыратуғ аболады. « Плазмалендік реакция» деп аталатын шындық тек мұ здатылғ ан кесінділерде ғ ана кездеседі. Фельген реакциясының нә тижесі ол пайдаланылатын қ ң деуіш қ оспаларғ а жә не гидролиз процесінің ұ зақ тығ ына байланысты. Ө те ұ зақ уақ ытағ ы гидролиз С₃жә не С₅эфирлік фосфатты қ оспалардың ыдырауына жә не содан кейін еритін нуклеотидитердің қ алыптасуына ә келеді. 2. БАО пайдалану арқ ылы флуорохромирлеу. Бұ л Фельген бойынша модифицирленген реакциясында, парарозанилиннің орнына флуорохром БАО [бис-(4-аминофенил)-1, 3, 4-оксадиазол] пайдаланылады. Гидролиз процесін тү рлі температурада жә не тү рлі НCl концентрациясында жү ргізуге болады. Клетка ядросы мен цитоплазмасының арасындағ ы жоғ ары контрасты жетістіктер мен сапалы зерттеу ү шін, 1 н. НCl +60^оС температурадағ ы гидролиз кө мегі арқ ылы қ олдануғ а болады. Флуорохромирлеу ү шін БАО орнына концентрациясы 0, 2% тік аурамин О пайдаланылады. 3. Фельген реакциясы– кү міс – метенамин. Гидролизден кейін 1М лимон қ ышқ ылында гидролиз уақ тысында, кесіндіде метанамин-кү міс ерітіндісінде анық қ ара тү спен боялғ ан ДНҚ дамиды. Жақ сы нә тиже ә деттегі тұ з қ ышқ ылды гидролизде +60^оС та болады. 4. Турчини ә дісі. Бұ л ә дісте жұ мсақ немесе ә лсіз гидролизден кейін 1н. HCl арқ ылы метилтриоксифлуореномен жү реді. Осығ ан қ арамастан, ніклейн қ ышқ ылдарының кө мірсулы компоненттері флуреононамен ә сер ету арқ ылы боялғ ан (ДНҚ – кү лгін, РНҚ – сары қ ызғ ылт байланыстар тү зеді. Фосфор қ ышқ ылын бө ліп алу реакциясы. 1. Қ ышқ ылды гидролиз арқ ылы фосфор қ ышқ ылын гистохимиялық бө ліп алу. Бұ л Фосфатиты ДНҚ топтарын, молибдат аммониясы бар қ ышқ ылдық гидролиз кө мегі арқ ылы бө ліп алуғ а негізделген ә діс. Фосфомолибдат аммониінің тұ нбасы реакцияның екінші этапында бензидиннен молибден кө гіне дейін қ алпына келеді. Реакция нә тижесіндегі дамитын диффузды кө к бояу анық локализация қ алыптастыруғ а мү мкіндік бермейді. 2. Негізгі бояуыштармен фосфор қ ышқ ылын бө ліп алу. Негізгі бояуыштар кері зақ ымдалғ ан фосфатты топтармен бір немесе бірнеше тандаулы тү стер береді. Соғ ан қ арамастан, нуклейн қ ышқ ылдарын бояу ә дістерінің біреуі де абсолютті мамандалғ ан болып саналмайды, сол себептен бө лінетін қ ышқ ылдық топтар нуклейн қ ышқ ылына жататындығ ын анық тайтын бақ ылау реакцияларын жү ргізу керек.

36)Кө мірсуларды гистохимиялық бө ліп алу тә сілін кө рсетің із? РНҚ -ның ДНҚ -дан ерекшелігі ә рқ ашанда жалғ ыз тізбекті тү рде болады. Ереже бойынша, ДНҚ клетка ядросында орналасады, митохондрия мен пластидетерде де аздап кездеседі. РНҚ негізінен кө бінесе, микросомды фракциядағ ы кү йінде болады (эндоплазматикалық ретикулуммен байланысты Паллада тү йіршіктері). Нуклейн қ ышқ ылдарын гистохимиялық бө ліп алу кезінде келесідей принциптер қ олданылады: УФ-сә улесін жұ ту арқ ылы пуриндік жә не пиримидиндік негіздерді бө ліп алу; Кө мірсулы компоненттерді бө ліп алу; Фосфор қ ышқ ылын бө ліп алу; Базофильдің бө лінуі; Арнайы маманданғ ан ферменттік жә не химиялық экстрация ә дісі арқ ылы бө ліп алу. Кө мірсулы компоненттерді бө ліп алу реакциясы Фельген реакциясы. Бұ л ә діс ә лсіз гидролиздің нә тижесінде ө ң делетін препаратта 1н. HСl ә сер етуі арқ ылы C_1-дезоксирибоза атомымен байланысты пуриндік негіздердің ыдырауына негізделген. Соғ ан қ арамастан қ алыптасқ ан реакцияғ а тү скіш альдегидті топтар Шифф реактивімен қ ышқ ылғ а тө зімді қ ызылда –қ ызыл-кү лгін тү сті бояғ ыштар береді. Гидролиз жағ дайын нақ ты қ адағ алау кезінде дезоксирибозаның фосфатты кө пірі бұ зылмайды, барлық байланыстар қ ышқ ылдық қ асиеті мен ерімеу процесін сақ тап қ алады. Қ ышқ ылдық гидролиз нә тижесінде РНҚ рибозасынан альдегидтердің қ алыптасуы болмайды, бұ л кезде практикалық тұ рғ ыдан алғ анда, кесіндідегі РНҚ толығ ымен шайылып кетеді. Фельген реакциясы бойынша дұ рыс жұ ргізу кезінде РНҚ толығ ымен боялмайды. Бос альдегидтік топтар (плазмали) бақ ылау тә жірибесінде Шифф реактивімен ө ң деу кезінде жә не тұ з қ ышқ ылды гидролиз нә тижесінде бө ліп алуғ а болады. Бұ л процесс кезінде гидролиз нә тижесінде босағ ан пентозаның альдегидті топтарын ажыратуғ аболады. « Плазмалендік реакция» деп аталатын шындық тек мұ здатылғ ан кесінділерде ғ ана кездеседі. Фельген реакциясының нә тижесі ол пайдаланылатын қ ң деуіш қ оспаларғ а жә не гидролиз процесінің ұ зақ тығ ына байланысты. Ө те ұ зақ уақ ытағ ы гидролиз С₃жә не С₅эфирлік фосфатты қ оспалардың ыдырауына жә не содан кейін еритін нуклеотидитердің қ алыптасуына ә келеді. Тү рлі ө ң деуіш қ оспалар ү шін гидролиз процесінің ұ зақ тығ ы келесі кестеде кө рсетілген:

Нейтральды формалин	8 мин.
Карнуа	8 мин.
80%-тік этанол	5 мин.
Формалин – этанол – уксус қ ышқ ылы	7 мин.
Буэну-Аллен бойынша пикриндік қ ышқ ыл ерітіндісі	22 мин.
Ценкер	5 мин.
Ньюкомер (ө сімдік ұ лпасы)	10 мин.
Ньюкомер (жануар ұ лпасы)	20 мин.

2. БАО пайдалану арқ ылы флуорохромирлеу Бұ л Фельген бойынша модифицирленген реакциясында, парарозанилиннің орнына флуорохром БАО [бис-(4-аминофенил)-1, 3, 4-оксадиазол] пайдаланылады. Гидролиз процесін тү рлі температурада жә не тү рлі НCl концентрациясында жү ргізуге болады. Клетка ядросы мен цитоплазмасының арасындағ ы жоғ ары контрасты жетістіктер мен сапалы зерттеу ү шін, 1 н. НCl +60^оС температурадағ ы гидролиз кө мегі арқ ылы қ олдануғ а болады. Флуорохромирлеу ү шін БАО орнына концентрациясы 0, 2% тік аурамин О пайдаланылады. 3. Фельген реакциясы– кү міс – метенамин. Гидролизден кейін 1М лимон қ ышқ ылында гидролиз уақ тысында, кесіндіде метанамин-кү міс ерітіндісінде анық қ ара тү спен боялғ ан ДНҚ дамиды. Жақ сы нә тиже ә деттегі тұ з қ ышқ ылды гидролизде +60^оС та болады 4. Турчини ә дісі. Бұ л ә дісте жұ мсақ немесе ә лсіз гидролизден кейін 1н. HCl арқ ылы метилтриоксифлуореномен жү реді. Осығ ан қ арамастан, ніклейн қ ышқ ылдарының кө мірсулы компоненттері флуреононамен ә сер ету арқ ылы боялғ ан (ДНҚ – кү лгін, РНҚ – сары қ ызғ ылт байланыстар тү зеді.

37)Ерітіндіні дайындау ә дісі. Шифф реактивін дайындау ә дісін атап берің із? Шифф реактиві. 1 г фуксин негізін 200 мл қ айнатылғ ан дистилденген суда ерітеді, жә не оны тү тікше ерітіндімен мезгіл-мезгіл араластырып, 5 минут қ айнатады. Содан кейін 50°-қ а дейін суытып, ерітіндіні сү зеді. 20 мл 1 NНСl ерітіндісін қ осады да, 25°-қ а дейін салқ ындатады, содан кейін 1 гр натрий бисульфитін немесе (Nа2 S2О5), калий бисульфитін (К2 S 2О5), қ осады да қ араң ғ ы жерге қ ояды, 18-24 сағ аттан кейін ерітіндіге 2 гр белсендірілген кө мірді сеуіп, 1 минуттай араластырады, сү зеді жә не 0-4°-та қ араң ғ ы жерде сақ тайды. Шифф реактиві тү ссіз немесе ашық сары тү сті болады. Тұ з қ ышқ ылының бір нормальды ерітіндісі 1NНСl 10 мл байытылғ ан тұ з қ ышқ ылына 90 мл дистилденген су қ осады. Ерітіндіні узақ уақ ыт сақ тауғ а болады. Кесіндіні жууғ а арналғ ан кү кірт қ ышқ ылды су 10% 5 мл калий бисульфитіне (К2S2О5) 1 N 5 мл НСl ерітіндісін жә не 100 мл дистилденген су қ осады. Калий бисульфитті ерітіндісін 7 кү н ішінде қ олдана беруге болады, кү кірт қ ышқ ылды суды қ олдану алдында ғ ана дайындап, бір рет қ ана қ олданады. Ә діс: -Қ алың дығ ы 5-7 мкр парафинді кесіндіні парафинсіздендіру жә не суғ а дейін жақ ындату. -1N НСl тез шаю. -60° 1N НСl (Су моншасына) салу 6 минутқ а. -1N салқ ын НСl-да тез шаю, содан кейін дистилденген суда шаю. -Шифф реактивінде 40-60 мин ұ стау. -Сү згіш қ ағ азбен қ ұ рғ атып, ү ш ө лшемді жаң а дайындалғ ан кү кірт қ ышқ ылы суының ә рқ айсысында 1-2 мин шаю. -Қ ұ быр суында 10 минутқ а дейін жуу. -Қ ұ рғ ату, ағ арту жә не бальзамғ а отырғ ызу. Нә тижесі. Ядродағ ы ДНК-сы бар аймақ тар қ ызыл-пурпурлы тү ске боялады (цитоплазмасы ашық жасыл). Шифф-йодты қ ышқ ыл реакциясы (ШИК – реакциясы). Полисахаридті қ ұ рама қ ұ райтын заттың гистологиялық негізінде, Шифф-йодты қ ышқ ыл реакциясы (ШИК – реакциясы) жатады. Осы реакцияның кө мегімен гликогенді, мукопротеидті, гликопротеидті, гликолепидті (бө ліп) табуғ а болады. Жұ мысшы ерітінді. 1. Шифф реактиві. 2. Кү кіртті су. 200 мл дистилденген суғ а 4 мл байытылғ ан НСl қ осу. 25 мл дистилденген суғ а 4 гр сусыз натрий сульфитін еріту. Екі ерітіндіні қ осу. 3. Периодат ерітіндісі: 1 гр периодат калийді 100 мл дистилденген суда немесе 2, 5 гр периодат натрийде еріту. Ә діс: -Қ алың дығ ы 5-7 мкр парафинді кесіндіні парафинсіздендіру жә не суғ а дейін жақ ындату. -5-10 минутқ а йод қ ышқ ылына батыру. -Дистилденген судың 3 ө лшемінде мұ қ ият жуу –3-5 минут. -10-20 минут Шифф реактивіне орналастыру. -Жаң а дайындалғ ан кү кірт суының ү ш ө лшемінде ө ң деу. 10 минут қ ұ быр суында жуып, дистилденген суда шаю. -Сү згіш қ ағ азбен қ ұ рғ ату. 2 ө лшем абсолютті спирттерден 1 минуттан ө ткізу. -2 ө лшем ксилолдан 1 минуттан ө ткізу. -Бальзамғ а отырғ ызу. Нә тижесі. Полисахаридті зат пурпурлы-ақ шыл кө к-қ ызыл тү ске боялғ ан. Бейтарап мукополисахарид ә детте –пурпур қ ызыл, гликоген-қ аралауболады.

38)Ферменттерді гистохимиялық бө ліп алудағ ы негізгі пинциптерін атаң ыз? Ең алғ ашқ ы кезден-ақ , гидролитикалық ферменттерді гистохимиялық бө ліп алу ү шін ө ң деуге суық ацетон немесе этанолды алғ ын, себебі бұ л екі сұ йық тық та ферменттердің біршама ғ ана инактивациясын тудырады. Келесі парафинге қ ұ ю кезінде сің ірілу процесі қ ұ ю температурасына қ арағ анда ферменттің активтілігіне аз дең гейде ә сер етеді. Гистохимиялық бө лінетін активтілік кейбір гидролитикалық ферменттерде, ә сіресе фосфотаза қ ұ ю кезіндегі температура +50⁰С-тан тө мен болмағ анда, парафинге сің ірілу 30 мин (вакуумғ а қ ұ ю кезі) уақ ытта ө теді. Гидролитикалық ферменттердің активтілігінің қ анағ аттанарлық тай сақ талуы - 7, 5 % - тік сахароза қ осылатын, забуференді формалин (4%) қ оспасында ғ ана болады, содан кейін сахароза мен гуммиарабиком қ оспасында ө ң деледі. Цитохромоксидаза активтілігінің жақ сы сақ талуы тек мұ здату-қ ұ рғ атылу ө ң деу ә дісінде ғ ана болады. Сукцинатдегидрогеназа суық ацетонда да жақ сы реттеледі. Еритін жә не байланысқ ан дегидрогеназаларды формальдегидтің тө мен концентрациясында (0, 7-2%) қ ң деу кезінде реттеуге болады. Еритін дегидрогеназалардың реттелуі сонымен қ атар жалғ астырылмайтын ө ң деу кезінде глутаральдегидтің забуференді ертінідісінің кө мегімен жү зеге асуы мү мкін. Ферменттерді ультраструктуралық зерттеулер кезінде ө ң деу ү шін моно- жә не диальдегидтердің маң ызы ө те зор. Біршама инактивирлеу қ асиет глиоаксальда болады, оксиадипинальдегид немесе адипинальдегид болса, онда 6%-дық глутаральдегид ө ткір инактивация тудырады. Осылайша, глутаральдегидтің кө мегі арқ ылы қ ұ рылымының жақ сы сақ талуы ферменттік активтілік шығ ынымен сипатталды. Глутаральдегид концентрациясын 1, 5 - 3%-ғ а дейін тө мендету арқ ылы инактивация дең гейін азайтуғ а болады. Моноальдегидтер–метакролеин, кротанальдегид жә не акролеин - электронды-гистохимиялық дең гейдегі феорментативтік активтілікті бө ліп алу кезінде ә сер етуі онша маң ызды емес.

39)Ферменттерді жартылай мембранағ а ендіру ә дісі мен бө ліп алуды қ алай тү сің есіз? Ең алғ ашқ ы кезден-ақ , гидролитикалық ферменттерді гистохимиялық бө ліп алу ү шін ө ң деуге суық ацетон немесе этанолды алғ ын, себебі бұ л екі сұ йық тық та ферменттердің біршама ғ ана инактивациясын тудырады. Келесі парафинге қ ұ ю кезінде сің ірілу процесі қ ұ ю температурасына қ арағ анда ферменттің активтілігіне аз дең гейде ә сер етеді. Гистохимиялық бө лінетін активтілік кейбір гидрол/қ ферменттерде, ә сіресе фосфотаза қ ұ ю кезіндегі температура +50⁰С-тан тө мен болмағ анда, парафинге сің ірілу 30 мин (вакуумғ а қ ұ ю кезі) уақ ытта ө теді. Гидролит/қ ферменттердің активтілігінің қ анағ аттанарлық тай сақ талуы - 7, 5 % - тік сахароза қ осылатын, забуференді формалин (4%) қ оспасында ғ ана болады, содан кейін сахароза мен гуммиарабиком қ оспасында ө ң деледі. Цитохромоксидаза активтілігінің жақ сы сақ талуы тек мұ здату-қ ұ рғ атылу ө ң деу ә дісінде ғ ана болады. Сукцинатдегидрогеназа суық ацетонда да жақ сы реттеледі. Еритін ж/е байл/н дегидрогеназаларды формальдегидтің тө мен концентрациясында (0, 7-2%) қ ң деу кезінде реттеуге болады. Еритін дегидрогеназалардың реттелуі сонымен қ атар жалғ астырылмайтын ө ң деу кезінде глутаральдегидтің забуференді ертінідісінің кө мегімен жү зеге асуы мү мкін. Ферменттерді ультраструктуралық зерттеулер кезінде ө ң деу ү шін моно- жә не диальдегидтердің маң ызы ө те зор. Біршама инактивирлеу қ асиет глиоаксальда болады, оксиадипинальдегид немесе адипинальдегид болса, онда 6%-дық глутаральдегид ө ткір инактивация тудырады. Осылайша, глутаральдегидтің кө мегі арқ ылы қ ұ рылымының жақ сы сақ талуы ферменттік активтілік шығ ынымен сипатталды. Глутаральдегид концентрациясын 1, 5 - 3%-ғ а дейін тө мендету арқ ылы инактивация дең гейін азайтуғ а болады. Моноальдегидтер–метакролеин, кротанальдегид жә не акролеин - электронды-гистохимиялық дең гейдегі феорментативтік активтілікті бө ліп алу кезінде ә сер етуі онша маң ызды емес.

⇐ Предыдущая 1 2 3 4 567 Следующая ⇒