СЕМЕНА 13 страница

⇐ ПредыдущаяСтр 13 из 31Следующая ⇒

до метки, постепенно помешивая.

Установку титра проводят так же, как в случае раствора едкого

натра (0, 1 моль/л) в смеси метилового спирта и бензола. Титр

раствора устанавливают каждый раз перед применением.

Примечание. Установку титра проводят в тщательно закрытых

сосудах для титрования. Титрование лучше проводить в атмосфере

инертного газа.

Раствор гидроокиси тетраэтиламмония (0, 1 моль/л)

1 мл раствора содержит 0, 014726 г гидроокиси тетраэтиламмония.

Приготовление. 30 г йодида тетраэтиламмония растворяют в 200

мл метилового спирта и встряхивают в течение часа с 25 г тонко

измельченной окиси серебра в склянке с притертой пробкой. По

окончании встряхивания центрифугируют несколько миллилитров смеси

и раствор испытывают на присутствие йодид-ионов (проба с нитратом

серебра в азотнокислой среде). В случае образования осадка йодида

серебра к основному раствору прибавляют еще 5 г окиси серебра и

снова встряхивают 30 мин. По окончании реакции осадок йодида

серебра отфильтровывают через стеклянный фильтр N 4. Реакционную

колбу споласкивают тремя порциями по 50 мл сухого бензола,

бензольный раствор фильтруют через тот же фильтр и прибавляют к

фильтрату. Затем фильтрат помещают в мерную колбу вместимостью 1 л

и доводят объем раствора бензолом до метки. Раствор хранят в

склянке, снабженной поглотительной трубкой, заполненной натронной

известью или аскаритом для предохранения раствора от влаги воздуха

и углекислоты.

Установка титра. Около 0, 1 г (точная навеска) бензойной

кислоты растворяют в смеси 5 мл метилового спирта и 20 мл ацетона,

нейтрализованных непосредственно перед титрованием по тимоловому

синему в метиловом спирте, и титруют приготовленным раствором

гидроокиси тетраэтиламмония до получения отчетливого синего

окрашивания или потенциометрически со стеклянным электродом.

Поправочный коэффициент вычисляют по первому способу, где Т =

0, 01221.

Примечание. Установку титра проводят в тщательно закрытых

сосудах для титрования. Титрование лучше проводить в атмосфере

инертного газа.

Индикаторы

Диметиловый желтый

п-Диметиламиноазобензол (ч. д. а. )

С14Н15N3 М. м. 225, 30

Желтый кристаллический порошок или желтые пластинки.

Практически нерастворим в воде, растворим в 95% спирте, бензоле,

хлороформе, эфире, разведенных минеральных кислотах.

Переход окраски от оранжево - красной к желтой в пределах рН

от 2, 9 до 4, 0.

Раствор индикатора. 0, 1 г растертого индикатора растворяют в

95% спирте и доводят объем раствора 95% спиртом до 100 мл.

Раствор индикатора в бензоле. 0, 1 г индикатора растворяют в

бензоле и доводят объем раствора бензолом до 100 мл.

Кристаллический фиолетовый

Гексаметил-п-розанилин - хлорид (ч. д. а. )

С25Н30СlN3 М. м. 408, 0

Бронзовые блестящие кристаллы или кристаллический порошок

темно - зеленого цвета. Растворим в воде, 95% спирте и ледяной

уксусной кислоте.

Переход окраски при неводном титровании от фиолетовой

(щелочная) через сине - зеленую (нейтральная) к желтовато -

зеленой (кислая).

Раствор индикатора в ледяной уксусной кислоте. 0, 1 г

индикатора растворяют в ледяной уксусной кислоте и доводят объем

раствора той же кислотой до 100 мл.

Метиловый красный

4-Диметиламино-2-карбоксиазобензол (ч. д. а. )

С15Н15N3О2 М. м. 269, 29

Блестящие красно - фиолетовые кристаллы или красно - бурый

кристаллический порошок. Мало растворим в воде, трудно растворим в

95% спирте, легко - в кипящем 95% спирте, растворим в растворах

едких и углекислых щелочей.

Переход окраски от красной к желтой в пределах рН от 4, 2 до

6, 3.

Растворы индикатора. 1. 0, 1 г растертого индикатора растворяют

в 60 мл 95% спирта и доводят объем тем же спиртом до 100 мл.

2. 0, 1 г индикатора растворяют в ступке с 7, 4 мл раствора

едкого натра (0, 05 моль/л) и после его растворения доводят объем

раствора свежепрокипяченной и охлажденной водой до 250 мл.

Метиловый оранжевый

4-Диметиламиноазобензол-4'-сульфонат натрия

С14Н14N3NaО3S М. м. 327, 34

Кристаллический порошок оранжевого, иногда с коричневатым

оттенком цвета. Трудно растворим в воде, легко - в горячей воде;

практически нерастворим в 95% спирте.

Переход окраски от красной через оранжевую к желтой в пределах

рН от 3, 0 до 4, 4.

Раствор индикатора. 0, 1 г растертого индикатора растворяют в

воде и доводят объем раствора водой до 100 мл.

Насыщенный раствор индикатора в ацетоне. К 0, 025 г индикатора

прибавляют 100 мл ацетона и время от времени встряхивают, через

один час фильтруют.

Метиловый фиолетовый

смесь тетра-, пента- и гексаметил-п-розанилин - хлоридов

с преобладанием пентаметил-п-розанилин - хлорида (ч. д. а. )

С24Н28СlN3 М. м. 393, 96

Темно - зеленый порошок с металлическим блеском. Растворим в

воде и 95% спирте.

Переход окраски от желтой к зеленой в пределах рН от 0, 1 до

1, 5 и от зеленой к фиолетовой в пределах рН от 1, 5 до 3, 2.

Раствор индикатора. 0, 1 г индикатора растворяют в воде и

доводят объем раствора водой до 100 мл.

Раствор индикатора в ледяной уксусной кислоте. 0, 1 г

индикатора растворяют в ледяной уксусной кислоте и доводят объем

раствора той же кислотой до 100 мл. Раствор применяют

свежеприготовленным.

Тимоловый синий

Тимолосульфофталеин (ч. д. а. )

С27Н30О5S М. м. 466, 6

Коричневый кристаллический порошок. Трудно растворим в воде с

образованием раствора, окрашенного в желтый цвет, переходящий при

нагревании в красный. Растворим в 95% спирте, эфире и ледяной

уксусной кислоте, легко растворим в разведенных растворах щелочей

с образованием растворов темно - синего цвета.

Переход окраски от красной к желтой в пределах рН от 1, 2 до

2, 8 и от желтой к синей в пределах рН от 8, 0 до 9, 6.

Раствор индикатора. 0, 1 г индикатора растирают в ступке с 4, 3

мл раствора едкого натра (0, 05 моль/л) и после его растворения

доводят объем раствора свежепрокипяченной и охлажденной водой до

200 мл.

Раствор индикатора в метиловом спирте. 0, 3 г индикатора

растворяют в метиловом спирте и доводят объем раствора метиловым

спиртом до 100 мл.

Раствор индикатора в диметилформамиде. 1 г тимолового синего

растворяют в диметилформамиде и доводят объем раствора

диметилформамидом до 100 мл.

Тропеолин 00

4-(Фениламино)-азобензол-4'-сульфонат калия (ч. д. а. )

С18Н14КN3О3S М. м. 391, 50

Коричневато - желтый с золотистым оттенком кристаллический

порошок. Растворим в воде и 95% спирте.

Переход окраски от красной к желтой в пределах рН от 1, 3 до

3, 2.

Раствор индикатора. 0, 1 г растертого индикатора растворяют в

воде при нагревании на водяной бане и после охлаждения доводят

объем раствора водой до 100 мл.

Раствор индикатора в метиловом спирте. К 0, 2 г индикатора

прибавляют 100 мл метилового спирта и время от времени взбалтывают

(около 1 ч), после чего фильтруют.

Бромтимоловый синий

Дибромтимолсульфофталеин (ч. д. а. )

С27Н28Вr2О5 М. м. 624, 4

Белый мелкокристаллический порошок. Очень мало растворим в

воде, легко - в 95% спирте, эфире, растворах едких и углекислых

щелочей и растворе аммиака.

Переход окраски от желтой через зеленую к синей в пределах рН

от 6, 0 до 7, 6.

Растворы индикатора. 1. 0, 1 г растертого индикатора растворяют

в 20 мл теплого 95% спирта и после охлаждения доводят объем

раствора водой до 100 мл.

2. 0, 1 г индикатора растирают в ступке с 3, 2 мл раствора

едкого натра (0, 05 моль/л) и после его растворения доводят

свежепрокипяченной охлажденной водой до 250 мл.

3. 1 г бромтимолового синего растворяют в диметилформамиде и

доводят объем раствора диметилформамидом до 100 мл.

Нейтральный красный

2-Метил-3-амино-7-диметиламинофеназоний - хлорид (ч. д. а. )

С15H17ClN4 М. м. 288, 78

Блестящий черно - зеленый порошок. Легко растворим в воде.

Переход окраски от красной к желтой в пределах рН от 6, 8 до

8, 0.

Раствор индикатора. 0, 1 г растертого индикатора растворяют в

воде и доводят объем раствора водой до 100 мл.

Раствор индикатора в ледяной уксусной кислоте. 0, 1 г

индикатора растворяют в ледяной уксусной кислоте и доводят объем

раствора той же кислотой до 100 мл.

Реактивы

Ацетон (ч. д. а. )

СН3СОСН3 М. м. 58, 08

Прозрачная бесцветная, легко воспламеняющаяся жидкость с

характерным запахом. Содержание основного вещества не менее 99, 5%.

Температура кипения от 55, 5 до 56, 6 град. С. Максимальное

содержание примесей 0, 001%. Плотность от 0, 7900 до 0, 7915.

В колбу вместимостью 25 мл наливают 10 мл испытуемого ацетона

и помещают в водяную баню с температурой 15 град. С. Когда

температура ацетона станет равной 15 град. С, прибавляют 0, 2 мл

свежеприготовленного раствора перманганата калия (0, 001 моль/л) и

перемешивают. В течение 30 мин должно сохраниться розовое

окрашивание.

Смесь 25 мл ацетона с 25 мл воды должна оставаться прозрачной

в течение 30 мин.

Ацетон, применяемый в качестве среды при титровании раствором

хлорной кислоты, должен отвечать следующим дополнительным

требованиям: на титрование 30 мл ацетона должно расходоваться не

более 0, 1 мл раствора хлорной кислоты (0, 1 моль/л). В случае

титрования с метиловым оранжевым в присутствии ацетата окисной

ртути после прибавления последней к ацетону не должно появляться

желтое окрашивание.

Диметилсульфоксид (х. ч. )

(СН3)2SО М. м. 78, 13

Прозрачная бесцветная маслянистая жидкость, гигроскопична.

Растворим в воде, 95% спирте, эфире, ацетоне. Температура кипения

189 град. С. Плотность от 1, 100 до 1, 103. Показатель преломления

1, 4783. Температура затвердевания от 17 до 18, 5 град. С.

Диметилформамид (х. ч. )

НСОN(СН3)2 М. м. 73, 10

Бесцветная прозрачная жидкость с характерным запахом.

Смешивается с водой, 95% спиртом, бензолом, хлороформом.

Содержание основного вещества не менее 99, 9%. Температура кипения

от 152, 5 до 154 град. С. Плотность от 0, 9470 до 0, 9490. Содержание

воды не более 0, 05%. Диметиламина не более 0, 002%. Муравьиной

кислоты не более 0, 002%. Нелетучий остаток не более 0, 003%.

При титровании 10 мл диметилформамида переход окраски

индикатора происходит от прибавления одной капли титранта.

2, 4-Динитрофенилгидразин

С6Н3(NО2)NН2 М. м. 198, 14

Красный кристаллический порошок. Практически нерастворим в

воде, мало растворим в 95% спирте, эфире, растворим в разбавленных

кислотах. Температура плавления от 190 до 198 град. С.

Сульфатная зола не более 0, 2%. Потеря в массе при высушивании

не более 0, 2%.

2, 4-Динитрофенилгидразина раствор

1, 5 г 2, 4-динитрофенилгидразина растворяют в 20 мл 50% серной

кислоты, разводят водой до 100 мл и фильтруют. Раствор должен быть

свежеприготовленным.

Дифенилгуанидин

(C6H5NH)2C=NH М. м. 217, 27

Бесцветные кристаллы, мало растворим в воде и эфире, растворим

в бензоле. Температура плавления от 147 до 148 град. С.

Дихлорэтан (ч. д. а. )

С2Н4Сl2 М. м. 98, 96

Прозрачная бесцветная жидкость, несмешивающаяся с водой.

Температурные пределы при 760 мм рт. ст., в которых должно

отгоняться 95% препарата, от 83 до 84 град. С. Плотность от 1, 2520

до 1, 2535. Нелетучий остаток не более 0, 002%. Свободный хлор не

более 0, 001%.

В две пробирки из бесцветного стекла, предварительно промытые

концентрированной серной кислотой, наливают по 5 мл той же серной

кислоты. В одну пробирку прибавляют 5 мл испытуемого дихлорэтана и

встряхивают. Полученная окраска не должна превышать окраску серной

кислоты.

Дихлорэтан, применяемый для неводного титрования, проверяют на

устойчивость к бихромату калия: смесь 5 мл дихлорэтана с 25 мл

раствора бихромата калия (0, 0167 моль/л) и 12, 5 мл разведенной

серной кислоты кипятят с обратным холодильником 15 мин. После

охлаждения прибавляют 10 мл раствора йодида калия и выделившийся

йод титруют раствором тиосульфата натрия (0, 1 моль/л). На 5 мл

дихлорэтана должно расходоваться не более 1 мл раствора

тиосульфата натрия (0, 1 моль/л).

Калия гидрофталат (ч. д. а. )

КНС6Н4(СОО)2 М. м. 204, 23

Бесцветные кристаллы или мелкокристаллический порошок.

Растворим в воде, мало растворим в 95% спирте. Содержание калия

гидрофталата от 99, 8 до 100, 2%. рН 5% водного раствора 4 +/-0, 1.

Метилэтилкетон (ч. )

СН3СОС2Н5 М. м. 72, 11

Бесцветная прозрачная жидкость, растворима в воде, смешивается

во всех соотношениях с 95% спиртом, эфиром, хлороформом, бензолом.

Температура кипения от 79 до 80, 5 град. С. Нелетучий остаток не

более 0, 002%.

Муравьиная кислота (ч. д. а. )

НСООН М. м. 46, 03

Бесцветная прозрачная жидкость с резким запахом, смешивается с

водой во всех соотношениях. Растворима в 95% спирте и эфире.

Содержание основного вещества не менее 99, 7%. Температура кипения

от 100 до 101 град. С. Температура кристаллизации не ниже 7, 5

град. С. Плотность от 1, 22 до 1, 221. Содержание уксусной кислоты

не более 0, 05% щавелевой - не более 0, 005%. Нелетучий остаток не

более 0, 002 %.

Нитрометан (ч. )

СH3NO2 М. м. 61, 04

Прозрачная бесцветная жидкость со своеобразным запахом,

напоминающим горький миндаль. Смешивается с 95% спиртом и эфиром,

мало растворим в воде. Температура кипения 101 град. С. Плотность

от 1, 130 до 1, 132. Показатель преломления от 1, 382 до 1, 383. При

нагревании нитрометана выше 100 град. С под давлением, особенно в

присутствии окисляющих веществ, следует соблюдать осторожность,

так как иногда при этом происходит взрыв.

Пиридин (ч. д. а. )

С6Н5N М. м. 79, 10

Бесцветная подвижная жидкость с характерным запахом,

гигроскопична. Смешивается во всех соотношениях с водой, 95%

спиртом, эфиром, хлороформом. Легко воспламеняется. Содержание

пиридина 99, 0%. Температура кипения от 114 до 116 град. С.

Плотность от 0, 982 до 0, 985. Содержание воды не более 0, 1%.

Высушивание пиридина проводят следующим образом. К 1 л

пиридина прибавляют 50 г сульфата натрия, предварительно

высушенного при температуре от 100 до 110 град. С и охлаждавшегося

в эксикаторе. После 10-минутного встряхивания и настаивания

фильтруют в перегонную колбу и перегоняют. Сохраняют в склянках с

притертыми пробками в защищенном от света месте.

Ртути окисной ацетат (ч. д. а. )

Нg(CH3COO)2 M. м. 318, 68

Бесцветные кристаллы, легко растворимые в воде, растворимые в

95% спирте и уксусной кислоте. Ядовит.

Содержание ртути окисной ацетата не менее 97, 0%.

Около 0, 5 г препарата (точная навеска) растворяют в 50 мл

воды, прибавляют 5 мл разведенной азотной кислоты и титруют

раствором роданида аммония (0, 1 моль/л) до перехода светло -

зеленого окрашивания в желтоватое (индикатор - железоаммониевые

квасцы).

1 мл раствора роданида аммония (0, 1 моль/л) соответствует

0, 01593 г Нg(СН3СОО)2.

Остаток после прокаливания не более 0, 02%. Хлоридов не более

0, 013%, сульфатов не более 0, 005%. Железа не более 0, 001%.

Ртути окисной ацетата раствор

5 г ацетата окисной ртути помещают в мерную колбу вместимостью

100 мл и растворяют в теплой ледяной уксусной кислоте. После

охлаждения объем раствора доводят ледяной уксусной кислотой до

метки. Сохраняют в склянках оранжевого стекла в защищенном от

света месте.

Спирт метиловый, очищенный от карбонилсодержащих примесей

1 л метилового спирта нагревают три часа с 10 г

2, 4-динитрофенилгидразина и 2 мл концентрированной

хлористоводородной кислоты с обратным холодильником на кипящей

водяной бане. Затем метиловый спирт два раза перегоняют на

колонке, собирая фракцию, кипящую при 64, 5 град. С.

Примечание. Проверка на отсутствие альдегидов: к 25 мл

метилового спирта в колбе вместимостью 300 мл прибавляют

75 мл раствора 2, 4-динитрофенилгидразина, нагревают на водяной

бане с обратным холодильником 24 ч, спирт отгоняют, разводят до

200 мл 2% раствором серной кислоты и оставляют на 24 ч. Не должны

образовываться кристаллы.

Тетраэтиламмоний - йодид (ч. )

(C2H5)4 NI M. м. 257, 16

Белые прозрачные кристаллы без запаха. Легко растворим в воде,

трудно растворим в 95% спирте. Водные растворы имеют нейтральную

реакцию. Температура разложения 250 град. С.

Уксусная кислота ледяная (х. ч. )

СН3СООН М. м. 60, 05

Температура кипения от 118 до 119 град. С.

Содержание уксусной кислоты не менее 99, 8%.

В коническую колбу вместимостью 100 мл с притертой пробкой

наливают 10 мл воды, прибавляют около 2 г (точная навеска)

испытуемой уксусной кислоты и титруют раствором едкого натра (1

моль/л) до слабо - розового окрашивания (индикатор -

фенолфталеин).

1 мл раствора едкого натра (1 моль/л) соответствует 0, 06005 г

СН3СООН.

Нелетучий остаток не более 0, 001%. Хлоридов не более 0, 0002%.

Сульфатов не более 0, 0003%. Тяжелых металлов не более 0, 0002%.

Железа не более 0, 0002%.

2 мл испытуемой кислоты (с точностью до 0, 1 мл) помещают в

колбу, прибавляют 10 мл воды и 0, 1 мл раствора перманганата калия

(0, 1 моль/л). Розовое окрашивание должно сохраняться в течение 30

мин.

Ледяная уксусная кислота, применяемая в качестве растворителя

при неводном титровании, должна выдерживать следующее

дополнительное испытание.

10 мл испытуемой кислоты (с точностью до 0, 1 мл) помещают в

колбу, прибавляют 10 мл концентрированной серной кислоты, смесь

охлаждают до температуры 5 град. С, прибавляют 1 мл 5% раствора

бихромата калия и перемешивают. Одновременно готовят контрольный

раствор, для чего в колбу прибавляют 10 мл воды, 10 мл

концентрированной серной кислоты, 1 мл 5% раствора бихромата калия

и перемешивают. Испытуемый и контрольный растворы оставляют на 30

мин. Затем к обоим растворам прибавляют по 50 мл воды,

перемешивают и охлаждают до комнатной температуры. По охлаждении к

растворам прибавляют по 2 г йодида калия и выделившийся йод

титруют раствором тиосульфата натрия (0, 1 моль/л) до

обесцвечивания раствора.

Разность между количеством тиосульфата натрия, пошедшего на

титрование испытуемого и контрольного растворов, не должна быть

более 0, 4 мл.

Уксусный ангидрид (ч. д. а. )

(СН3СО)2О М. м. 102, 09

Бесцветная прозрачная жидкость с резким запахом. В водных

растворах быстро гидролизуется, образуя уксусную кислоту.

Содержание уксусного ангидрида не менее 99, 0%. Температура кипения

от 138 до 141 град. С. Плотность от 1, 0790 до 1, 0820. Хлоридов не

более 0, 0001%. Сульфатов не более 0, 0005%. Тяжелых металлов не

более 0, 0001%. Нелетучий остаток не более 0, 002%.

Хлорная кислота, 72% и 57% водные растворы (х. ч. )

НСlО4 М. м. 100, 46

Бесцветная или со слабым желтоватым оттенком прозрачная

жидкость. Плотность около 1, 7 и 1, 5 соответственно. Хлоридов не

более 0, 0002%. Сульфатов не более 0, 001%. Железа не более

0, 00015%. Окислителей не более 0, 00025%. Тяжелых металлов не более

0, 001%.

Около 2, 5 г хлорной кислоты (точная навеска) растворяют в

мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят объем раствора водой до

метки. 10 мл полученного раствора разбавляют 100 мл воды и титруют

раствором едкого натра (0, 1 моль/л) (индикатор -

метиловый - оранжевый).

1 мл раствора едкого натра (0, 1 моль/л) соответствует 0, 01005

г хлорной кислоты.

Сохраняют в склянках с притертыми пробками вдали от горючих

веществ.

Серебра окись (ч. )

Аg2О М. м. 231, 74

Коричнево - черный тяжелый порошок без запаха. Практически

нерастворим в воде, легко растворим в разведенной азотной кислоте

и концентрированном растворе аммиака.

ЭЛЕКТРОФОРЕЗ

Электрофорез - метод анализа, основанный на способности

заряженных частиц к передвижению во внешнем электрическом поле.

Передвижение частиц при электрофорезе зависит от ряда факторов,

основными из которых являются: напряженность электрического поля,

величина электрического заряда, скорость и размер частицы,

вязкость, рН и температура среды, а также продолжительность

электрофореза. При электрофорезе на носителях (твердая среда) на

подвижность и эффективность разделения дополнительное влияние

оказывают: адсорбция, неоднородность вещества носителя и его

ионообменные свойства, электроосмос и капиллярный эффект.

Электрофоретическая подвижность является величиной,

характерной для данного вещества. Различают абсолютную и

относительную электрофоретическую подвижность. Абсолютная

электрофоретическая подвижность измеряется в сантиметрах в секунду

под влиянием градиента потенциала 1 В на 1 см и выражается в

-1с - 1

кв. см х В . Относительная электрофоретическая подвижность

есть отношение подвижности исследуемого вещества к подвижности

другого вещества, принятого за стандарт.

Существуют два различных метода электрофореза: фронтальный

электрофорез, который проводят в свободной незакрепленной среде, и

зональный электрофорез - в закрепленной среде (стабилизированная

жидкость или носители). Они имеют единую аппаратурную схему:

источник тока, камеру для электрофореза, два электрода,

соединяющих камеру с источником тока, и аппаратуру для сбора и

идентификации разделенных веществ. Для электрофореза используют

как готовые наборы аппаратуры (универсальный прибор для

иммуноэлектрофореза и электрофореза белков на бумаге и крахмале,

набор для электрофореза в полиакриламидном геле венгерской фирмы

" Реанал" ), так и наборы, составляемые экспериментатором из

отдельных приборов (универсальный источник питания УИП-1,

двухлучевой регистрирующий микрофотометр ИФО-451 и др. ).

Примерная схема проведения электрофореза:

- подготовка среды (носителя);

- нанесение веществ, подлежащих разделению;

- проведение электрофореза;

- обнаружение и количественная оценка разделенных веществ.

Фронтальный электрофорез

Электрофорез проводят в свободной незакрепленной среде в

кювете, которая представляет собой разборный U-образный канал. В

кювете создают четкую границу между исследуемой смесью веществ и

буферным раствором. В процессе электрофореза первоначальная

граница постепенно расходится на ряд границ по числу компонентов

смеси.

Метод является единственным способом прямого определения

абсолютной электрофоретической подвижности. Его применяют для

веществ с высокой молекулярной массой, которые обладают слабой

диффузией.

Зональный электрофорез

Зональный электрофорез проводят в закрепленной среде, роль

которой состоит в стабилизации электрофоретических зон. В

зависимости от среды и способа проведения зональный электрофорез

имеет много вариантов.

ЭЛЕКТРОФОРЕЗ В СВОБОДНОЙ ЖИДКОСТИ

Электрофорез в градиенте плотности. В качестве среды

используют жидкость, стабилизированную добавлением глицерина,

гликолей или сахарозы, создающих градиент плотности. Этой

жидкостью, более тяжелой, чем фракционируемый раствор, заполняют

внутреннюю трубку стеклянной охлаждаемой колонки. Дно трубки

закрыто пористой стеклянной пластинкой. К обоим концам колонки

присоединяют два электродных сосуда и проводят электрофорез.

Изоэлектрическое фокусирование. В качестве среды используют

жидкость, в которой создают объединенный градиент плотности и рН.

Градиент рН достигают прибавлением амфолитов, представляющих собой

готовую смесь алифатических полиаминополикарбоновых кислот, или

экспериментально подобранных смесей, которые при приложении

электрического напряжения концентрируются в узких зонах своих

изоэлектрических точек (рI). В результате в колонке создается

градиент рН от 1 до 11. При электрофоретическом разделении,

например смеси белков, каждый из них перемещается, пока дойдет до

зоны, соответствующей его рI.

Метод позволяет разделять вещества, различие в рI которых

составляет до 0, 02, а также определять их рI.

В обоих методах полностью исключена адсорбция, что позволяет

обнаруживать и количественно оценивать вещества во фракциях

непосредственно после электрофореза.

ЭЛЕКТРОФОРЕЗ НА КРУПНОПОРИСТЫХ НОСИТЕЛЯХ

В качестве крупнопористых носителей применяют фильтровальную

бумагу, крахмал, целлюлозу, порошкообразную пластмассу, агар -

агар, ацетилцеллюлозу, стеклянный порошок.

Электрофорез в блоке. В качестве носителя используют крахмал,

⇐ Предыдущая 8 9 10 11 121314 15 16 17 Следующая ⇒