Подсчитывать количество форменных элементов в ликворе можно также с реактивом Самсона, который красит медленнее – 10-15 минут, но дает более отчетливую картину. Состав реактива Самсона: фуксин (спиртовой раствор 1:10) 2,5мл; ледяная уксусная кислота 30,0мл; карболовая кислота 2,0г; вода дистиллированная до 100мл. Ход исследования и расчет, как в унифицированном методе.
Цитоз в норме. Содержание лейкоцитов в ЦСЖ, полученной при люмбальной пункции, в норме составляет 0-5 клеток в 1мкл, или 0-5·106/л. Цитоз ликвора из желудочков мозга0-1/мкл. У детей цитоз выше, чем у взрослых. С возрастом он постепенно падает.
Клиническое значение. Увеличение количества клеточных элементов в ЦСЖ (плеоцитоз) наблюдается при воспалительных процессах мозговых оболочек и органических поражениях вещества мозга (опухоли, абсцесс, сифилис), а также при травмах, кровоизлияниях и др. Максимальный плеоцитоз – до 2000-5000·106/л бывает при гнойном менингите и абсцессе мозга.
Количество эритроцитов в ликворе подсчитывают в счетной камере Горяева так же, как в крови. Для этого ЦСЖ с примесью крови разводят в 10 раз 0,9% раствором хлорида натрия (0,2мл раствора + 0,02мл ликвора). Количество эритроцитов в 1мкл ЦСЖ определяют, умножая число эритроцитов, подсчитанных в пяти больших квадратах камеры Горяева, на 500. Эритроциты могут быть обнаружены и в прозрачной бесцветной жидкости - при содержании менее 700 эритроцитов в 1мкл спинномозговой жидкости её цвет не меняется. 900-1000 эритроцитов в 1мкл придают жидкости опалесценцию; при наличии 2000 эритроцитов появляется едва заметное розовое окрашивание; при наличии 4000-5000 эритроцитов жидкость приобретает явно красный цвет. Для диагностики внутричерепного кровотечения имеет значение не только количество эритроцитов, но и нарастание их числа при повторном исследовании спинномозговой жидкости.
Микроскопическое исследование нативных и окрашенных препаратов ликвора и выпотных жидкостей
Для определения клеточного состава исследуемой выпотной жидкости проводят микроскопическое изучение нативных и окрашенных препаратов.
Нативные препараты готовят следующим образом: на предметные стекла помещают каплю отцентрифугированного осадка или частицы из свертков или сгустков. Накрывают их покровным стеклом и изучают под микроскопом вначале под малым, а затем под большим увеличением.
Окрашенные мазки готовят из нативных препаратов после их изучения. С этой целью с препаратов снимают покровное стекло, подсушивают мазки на воздухе, фиксируют и окрашивают по Романовскому в течение 3-5 минут, а затем исследуют под микроскопом с иммерсионной системой.
Если в ликворе клеток мало (нормоцитоз или слабовыраженный плеоцитоз), ликвор центрифугируют в течение 10 мин со скоростью 1500 об/мин, пластиковой пастеровской пипеткой отсасывают надосадочный ликвор, аккуратно размешивают осадок и делают 2-3 мазка, которые окрашивают азур-эозином. В осадке количество клеток больше и возможна их дифференцировка на большом увеличении (х400) и на
иммерсии (х900 или х1000). Необходимо провести дифференцировку 100 и/или 200 клеток и дать ответ в % (ликворная формула).
Участие в регистрации полученных результатов общеклинических исследований ликвора и выпотных жидкостей
Все результаты исследований заносят в бланк анализа.
Участие в проведении утилизации отработанного биологического материала
К отходам деятельности лаборатории, в зависимости от их класса, предъявляют различные требования по обеззараживанию, сбору, временному хранению, транспортированию и утилизации.
Отходы класса А (неопасные) не требуют специального обеззараживания. Их собирают в пластиковые пакеты белого цвета, герметично закрывают и в твердых емкостях (например, баках) с крышками переносят к мусороприемнику для дальнейшего вывоза на полигон твердых бытовых отходов (ТБО).
Отходы класса Б (опасные) подвергают обязательной дезинфекции на месте их образования в соответствии с действующими нормативными документами (СП I. 3.1285-03). Обеззараженные отходы собирают в одноразовую герметичную упаковку желтого цвета. Для твердых отходов, имеющих острые края (битая стеклянная посуда, пипетки и т.п.), используют твердую упаковку, для игл от шприцов испльзуют специальные одноразовые контейнеры. Одноразовые емкости желтого цвета с отходами класса Б маркируют надписью «Опасные отходы – «Класс Б» с указанием названия лаборатории, кода учреждения, даты, фамилии ответственного за сбор отходов лица. Заполненные емкости помещают во влагонепроницаемые баки желтого цвета с той же маркировкой, герметично закрывают крышкой и переносят к металлическим контейнерам, которые размещены на специальной площадке хозяйственного двора учреждения (лаборатории). Дальнейшую утилизацию отходов проводят централизовано специальным автотранспортом на полигон ТБО или децентрализовано к месту кремации, если учреждение имеет крематорий для сжигания отходов.
Использованные для переноса (перевоза), временного хранения многоразовые емкости (баки, контейнеры) дезинфицируют и моют.
Отходы класса В (чрезвычайно опасные) подвергают обязательной дезинфекции на месте их образования в соответствии с действующими нормативными документами (СанПиН 2.1.7.2527-09, СП 1.3.1285-03; СанПин 2.1.7.728-99). Обеззараживание отходов проводят автоклавированием или обработкой дезрастворами. Эффективность работы автоклавов контролируют с помощью химических (каждый цикл автоклавирования) или биологических (ежемесячно) тестов. Путем автоклавирования обеззараживают жидкие и плотные питательные среды с посевами ПБА I-IV групп патогенности и без посевов; вскрытые ампулы из-под лиофилизированных культур (предварительно обеззараженные в дезрастворе); пробирки, флаконы, колбы с бактериальными взвесями; сыворотки; лабораторную посуду; обгоревшие ватно-марлевые пробки и другой материал, инфицированный или подозрительный на зараженность ПБА I-IV групп.
Жидкие питательные среды с посевами микроорганизмов после обеззараживания автоклавированием разводят водопроводной водой 1:2 и сбрасывают в канализацию. Рабочие растворы отработанных дезсредств после экспозиции в течение не менее 24 ч разводят водопроводной водой 1:2 и сливают в канализацию.
Лабораторные отходы класса В (из блока для работы с инфицированными животными) после обеззараживания в дезрастворах могут содержать ватные и ватно-марлевые тампоны, салфетки, вскрытые трупы мелких экспериментальных животных, трупы отловленных в природе грызунов, остатки корма и подстилочный материал из садков, где содержались лабораторные животные до и после экспериментов, шприцы, ампулы и флаконы с остатками вакцинных препаратов, сколы концов пастеровских пипеток и ампул и др.
После обеззараживания отходы класса В собирают в одноразовую упаковку красного цвета. Одноразовая упаковка может быть мягкой (пакеты) и твердой (одноразовые емкости). Каждая упаковка маркируется надписью «Чрезвычайно опасные отходы – «Класс В» с указанием названия лаборатории, кода, даты и фамилии ответственного сотрудника. Бактериальные культуры, вирусологически опасный материал, различные острые предметы, экспериментальных животных складывают в твердую герметичную упаковку, нетвердые отходы – в герметичную мягкую упаковку.
Все заполненные емкости укладывают в маркированные водонепроницаемые металлические баки (контейнеры) с плотно закрывающимися крышками и хранят до кремирования в специально отведенном месте в пределах лаборатории. Транспортирование отходов класса В для утилизации осуществляют только в закрытых кузовах специально применяемых для этих целей автомашинах, которые после вывоза подвергают спецобработке.
Подготовку обеззараженных отходов лабораторной деятельности к утилизации (сбор, упаковка, герметизация, размещение в емкости для временного хранения) осуществляет ответственное лицо из числа работников лаборатории в средствах индивидуальной защиты (противочумный костюм III типа, дополненного при необходимостиреспиратором и прорезиненным фартуком).
Отходы лаборатории класса Г по степени токсичности делятся на следующие подклассы (Сан ПиН № 4286-87, Приказ МПР РФ от 02.12.2002 г. № 786):
1 – ртуть, термометры, лампы люминесцентные
2 – масла, серная кислота, электролиты
3 – медицинские отходы
4 – картонная упаковка
Использованные люминесцентные лампы, ртутьсодержащие приборы собирают в закрытые влагонепроницаемые емкости черного цвета с маркировкой «Отходы – «Класс Г» и хранят в специально выделенном помещении до утилизации, которая осуществляется в соответствии с действующими нормативными документами. Если во время работы повреждена целостность ртутьсодержащих приборов или термометров и ртуть вылилась, необходимо немедленно провести демеркуризацию.
Масла, минеральные (хлорводородная, азотная, серная) и сильные органические кислоты, щелочи утилизируют согласно действующим нормативным документам.
Вакцинные, диагностические и лекарственные препараты с истекшим сроком годности после обеззараживания путем автоклавирования измельчают, помещают в пакеты черного цвета и хранят до утилизации в водонепроницаемом герметически закрытом контейнере с маркировкой «Отходы – «Класс Г». В эти же контейнеры складывают ненужную картонную упаковку в мягких одноразовых маркированных пакетах черного цвета. Вывоз этих отходов на полигон ТБО осуществляют централизованно специализированным автотранспортом.
Участие в проведении дезинфекции использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты
1. Кипячение в дистиллированной воде в течение 30 минут, или в 2% растворе питьевой соды – 15 мин. Данным методом подвергаются дезинфекции изделия из стекла, металла, термостойких полимерных материалов, резины. 2. Паровой метод – обработка водяным насыщенным паром под избыточным давлением 0,5 кгс/см2 (4,9*104 Па) при температуре 1100С в течение 20 мин. Таким способом можно дезинфицировать изделия из стекла, металла, резины, латекса и термостойких полимеров. 3. Воздушный метод – сухой горячий воздух при температуре 1200С в течение 45 мин. Применяется для дезинфекции изделий из стекла и металла. 4. Химический метод – растворы химических веществ, температура которых не менее 180С. Данным методом подвергаются дезинфекции изделия из стекла, коррозионностойкого металла, полимерных материалов, резины. В качестве химических дезсредств можно применять следующие растворы: - 3% раствор хлорамина – 60 мин; - 6% раствор перекиси водорода – 60 мин; - 6% раствор перекиси водорода с 0,5% раствором моющего средства, разрешенного к применению МЗ РБ- 60 мин; - 4% раствор формалина (по формальдегиду) – 60 мин; - 2,5% раствор глютарового альдегида – 30 мин; - 0,5 раствор дезоксона-1 – 60 мин; - 0,6% раствор нейтрального гипохлорита кальция – 60 мин; - 0,5% раствор сульфохлорантина-Д – 60 мин. 11
Дезинфицирующие растворы используются однократно. Для приготовления 6% перекиси водорода с 0,5% раствором моющего средства нужно взять 240 мл 27% перекиси водорода, 5 г моющего средства и добавить 755 мл воды. Емкости для проведения дезинфекции должны быть четко промаркированы, иметь крышки. Изделия либо полностью погружают в раствор, либо двукратно протирают салфеткой из бязи или марли с интервалом 15 мин
Участие в проведении предстерилизации использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты
1. Замачивание в моющем растворе при полном погружении изделия. При применении «Биолота» первоначальная температура раствора 40±5 0С; других моющих средств – 50±5 0С, время выдержки – 15±1 мин. Температура раствора в процессе мойки не поддерживается. 14 2. Мойка каждого изделия в моющем растворе при помощи ерша или ватно-марлевого тампона в течение 0,5±0,1 мин. 3. Споласкивание под проточной водой. При применении моющего средства «Биолот» в течение 3,0±1,0 мин.; других моющих средств – 10, ±1,0 мин. 4. Споласкивание дистиллированной водой в течение 0,5±0,1 мин. 5. Сушка горячим воздухом при температуре 850С до полного исчезновения влаги. Механическую очистку осуществляют с помощью специального оборудования струйным, ротационным методами, ершеванием или с применением ультразвука. Моющие средства те же. Качество предстерилизационной очистки изделий оценивают на наличие крови и путем постановки азопирамовой пробы остаточных количеств щелочных компонентов моющего вещества. Самоконтроль в КДЛ проводиться ежедневно, контролю подвергают не менее 1% от одновременно обрабатываемых изделий одного наименования, но не менее 3-5 единиц. При положительной пробе на кровь или моющее средство всю группу контролируемых изделий подвергают повторной обработке до получения отрицательных результатов. Контроль качества предстерилизационной очистки работники санитарно-эпидемиологической службы проводят 1 раз в квартал.
Дата, место проведения УП
Содержание и объем работы
5 день
Оценка, подпись преподавателя
Участие в подготовке рабочего места для проведения общеклинических исследований отделяемого половых органов
Подготовка оборудования, расходного материала, реактивов
- Включить полностью освещение рабочего места и убедиться в исправной работе светильников.
- Проверить санитарное состояние рабочего места и проветрить его, открыв окна или фрамуги и двери. Убедиться в том, что температура воздуха на рабочем месте соответствует установленным санитарным нормам.
- Надеть спецодежду, спецобувь и другие средства индивидуальной защиты.
- Подготовить рабочую зону для безопасной работы.
- Проверить наличие и надежность подсоединения защитного заземления к корпусам электрооборудования (если рабочее место с электрооборудованием).
- Убедиться в исправности электрооборудования рабочего места (если имеется): светильники должны быть надежно подвешены к потолку и иметь светорассеивающую арматуру; электрические коммутационные коробки должны быть закрыты, а электророзетки — фальшвилками; корпуса и крышки выключателей и розеток не должны иметь трещин и сколов, а также оголенных контактов. При использовании технических средств убедиться в их исправности и целостности подводящих кабелей и электровилок.
- Подготовить необходимое для работы оборудование и инвентарь. Проверить его исправность.
Подготовка растворов для дезинфекции отработанного материала
1.Отработанные предметные стекла, пипетки, пробирки, пробки, стеклянные палочки, химические стаканчики и т.п. складывают в течение рабочего дня в емкости с дезинфицирующим раствором до полного вертикального погружения (10%-ный хлорамин, «Велтолен», «Аламинаг», дезсредства типа «Септодор», «Дианокс», «Виркон» и т.д., допущенные к применению в установленном порядке) для предварительного обеззараживания.
2. Заключительное обеззараживание лабораторной посуды проводится путем кипячения в воде (с момента закипания не менее 30 минут) с добавлением хозяйственного мыла или жидкого моющего средства. При соответствующих условиях можно использовать автоклавирование. После дезинфекции посуда допускается для мытья и стерилизации.
3. Ватно-марлевый материал, бумажные фильтры и разовые деревянные палочки уничтожаются путем сжигания или выброса в контейнер для мусора после экспозиции в одном из дезинфицирующих растворов или предварительно засыпаются сухим порошком хлорной извести или хлорамина.
4. Пробы фекалий, мокроты, желчи, мочи засыпаются сухой хлорной известью или белильной термостойкой известью или хлорамином перед выбросом в контейнеры или сливом в общую канализационную систему (при соответствующих условиях для обезвреживания используют автоклавирование).
Регистрация и маркировка проб
Поступивший материал регистрируют в журнале регистрации биологических материалов, заполняют данные о пациенте, указывают дату направления, присваивают номер направлению и пробе
Подготовка нативных и окрашенных микропрепаратов отделяемого половых органов
Метод окраски
Характеристика
Нативный препарат Fresh wet-mount microscopy
Исследование без применения красителей.Применяют еще 2 разновидности - исследование с применение солевого раствора (0.9% хлорида натрия) и 10% растора щелочи (КОН).Используется для диагностики трихомониаза,урогенитального кандидоза,бактериального вагиноза,исследования секрета простаты.
Анилиновые красители
Наиболее часто применяются растворы метиленового синего и бриллиантового зеленого.Применяется ограниченно для экспресс-диагностики гонококковой инфекции,трихомониаза и определения лейкоцитарной реакции
Окраска по Граму * Gram stain
В зависимости от химической структуры бактерии обладают способностью удерживать краситель кристаллический фиолетовый или обесцвечиваться в спирте. Грамположительные микробы окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, грамотрицательные - в розовый и красный. При правильной окраске препарат оранжево-красного цвета на тонких участках, лилово-фиолетового на толстых.
Окраска по Романовскому Romanovsky stain
Окраска позволяет выявить ядерные элементы и волютиновые гранулы бактериальной клетки за счет сродства к основным краскам. При микроскопировании ядерные элементы имеют красно-фиолетовый цвет, цитоплазма - слабо-розовый. В более молодых культурах цитоплазма окрашивается в сине-фиолетовый цвет. У бактерийных палочек ядра окрашены в темный красно-фиолетовый цвет, волютин - в вишнево-красный.Ограниченно применяется для диагностики хламидиоза и трихомониаза.
Окраска по Папаниколау ** Pap smear
Основан на на различной реакции структур клеток на кислые и основные красители.
Участие в проведении общеклинических исследований отделяемого половых органов
Оценка микроскопической картины влагалищного отделяемого
Мазки окрашивают по Граму (техника изложена в статье «Исследование выделений при гонорее»). Окрашенные препараты изучают с иммерсионной системой микроскопа. В мазках могут быть обнаружены следующие клеточные элементы:
Эпителий — различной формы крупные клетки с одним пикнотичным интенсивно окрашивающимся небольшим ядром; цитоплазма широкая, слабо окрашивается в розовый цвет.
Лейкоциты — круглые небольшого размера клетки с сегментированными, округлыми, сильно окрашивающимися ядрами и розовато окрашенной цитоплазмой.
Палочка Дедерлейна — крупная и толстая палочка, окрашивающаяся по Граму.
Comma variabile — мелкая, несколько изогнутая, не окрашивающаяся по Граму палочка.
Стафилококки, стрептококки и другие микроорганизмы.
Различают четыре степени чистоты влагалища (по Гейрлину, рис. 67). Первая степень чистоты — в мазках обнаруживают чистую культуру палочки Дедерлейна и единичные клетки плоского эпителия. При второй степени чистоты в препаратах находят палочки Дедерлейна, грамотрицательную палочку (Comma variabile), единичные лейкоциты. Для третьей степени чистоты характерно почти полное отсутствие влагалищной палочки, наличие гноеродной флоры, большое количество лейкоцитов. Четвертая степень чистоты — в мазках отсутствует палочка Дедерлейна, имеется гноеродная флора, много лейкоцитов
Определение физико-химических свойств эякулята
Физические
Количество. Среднее количество яэкулята в норме составляет 3-4мл. Объем его может колебаться от 2 до 6мл. Количество более 10мл чаще свидетельствует о мультиспермии (увеличенном количестве сперматозоидов), а меньше 0,5-1мл бывает при аспермии.
Цвет. Эякулят имеет серовато-белый цвет с молочно-белой опалесценцией. Патологические примеси могут изменить цвет эякулята. При гемоспермии (наличии крови в эякуляте) цвет становится розоватым или коричневатым, а при пиоспермии (наличии гноя в эякуляте) – желтоватым.
Мутностьспермы зависит от количества сперматозоидов.Чем больше сперматозоидов, тем более резко выражена молочно-белая мутность. Стекловидно-прозрачная сперма обычно бедна сперматозоидами.
Запахспермы обусловлен наличием спермина в секрете предстательной железы. В норме эякулят имеет запах, напоминающий запах опилок (цветов каштана).
Консистенция. Нормальный эякулят во время выделения жидкий, но на воздухе сразу же приобретает студенистую консистенцию. Затем при комнатной температуре происходит постепенное, в течение 20-30 минут разжижение секрета за счет протеолитических ферментов простаты. При хроническом воспалительном процессе в предстательной железе эякулят долго не разжижается, остается вязким, что препятствует передвижению сперматозоидов и отражается на их оплодотворяющей способности.
Вязкостьэякулята определяют после его полного разжижения, с помощью стеклянной палочки с оплавленным концом. После тщательного перемешивания медленно извлекают палочку и отмечают длину нити. В норме это 1-5мм. Если длина нити короче, то вязкость понижена, что характерно для поражения семенных пузырьков. Длина нити более 5мм говорит о повышенной вязкости, которая может быть обусловлена наличием слизи при воспалении простаты.
Определение рН проводят при помощи рН-метра или индикаторной бумаги. В норме реакция эякулята слабощелочная, рН 7,2-7,6. Постоянная концентрация водородных ионов обеспечивает нормальную подвижность сперматозоидов. При сдвиге рН в кислую сторону до 6,0 и ниже обычно наблюдается некроспермия
Химическое исследование эякулята.Концентрация фруктозы в эякуляте в норме составляет 10-60ммоль/л, концентрация лимонной кислоты – более 20 ммоль/л. Уменьшение содержания фруктозы бывает при нарушении эндокринной функции яичек параллельно степени снижения их гормональной активности. Концентрация лимонной кислоты в эякуляте снижается при хронических воспалительных процессах в железах мужской репродуктивной системы.
Оценка микроскопической картины эякулята
Сперматозоиды представляют собой длинные (55-65мкм) подвижные клетки. В них различают головку, шейку (тело) и хвост. Форма головки овальная или грушевидная, сплюснутая в переднезаднем направлении, размером 5-6мкм. Бóльшую часть головки занимает ядро, хроматин которого состоит из 23 хромосом, ДНК несет 50% генетической информации. Впереди ядра располагается акросома, содержащая энзимы. Шейка короткая, переходит в тело и в хвост, содержащий фибриллы. Они обеспечивают движение хвоста и подвижность сперматозоида. Если в нативном препарате сперматозоиды не обнаруживаются, то эякулят центрифугируют при 3000об/мин в течение 10минут и из полученного осадка готовят препараты. При заболеваниях половых органов (простатите) может наблюдаться агглютинация (склеивание) сперматозоидов. Склеивание единичных сперматозоидов обозначается (1+). Если склеена половина сперматозоидов, но только головками - как (2+). Если половина сперматозоидов склеена хвостами и головками - как (3+), и склеивание почти всех сперматозоидов – как (4+). В нормальном эякуляте агглютинации не наблюдается.
Клетки сперматогенеза. Сперматогонии, сперматоциты и сперматиды в нативных препаратах плохо отличимы от лейкоцитов. Их исследуют в окрашенных препаратах. В норме они составляют 0,5-2%.
Эритроциты.В норме эритроциты отсутствуют или бывают единичными в препарате. Гемоспермия (наличие большого количества эритроцитов в сперме) может быть при воспалительных процессах половых органов.
Лейкоциты.Обычно в эякуляте встречаются единичные в поле зрения лейкоциты. Число их увеличивается при воспалительных процессах (эпидидимиты, простатиты, уретриты).
Эпителиальные клеткив нормальном эякуляте могут содержаться в незначительном количестве. Это клетки эпителия мочеиспускательного канала и придатка яичка. Эпителиальные клетки предстательной железы в норме не встречаются, в большом количестве появляются при воспалительных процессах.
Лецитиновые зерна – мелкие матовые образования округлой формы, в нормальном эякуляте содержатся в значительном количестве. Отражают гормональную функцию простаты. При простатите и раке простаты количество их уменьшается, иногда до полного исчезновения.
Кристаллы Беттхера имеют вид бесцветных вытянутых ромбов, представляют собой фосфорнокислую соль спермина. Большое количество их свидетельствует о простаторее.
Амилоидные тельца (конкременты) имеют овальную или округлую форму, характерное слоистое строение с концентрической исчерченностью и мелкозернистую центральную часть. Обнаруживаются при застое секрета предстательной железы, простатите.
Слизь в нормальном эякуляте отсутствует. При простатите появляется большое количество густой слизи, которая обволакивает сперматозоиды и делает их неподвижными.
Микроскопия эякулята в норме: обнаруживают большое количество подвижных сперматозоидов и лецитиновых зерен, могут содержаться эритроциты (единичные в препарате), лейкоциты (единичные в поле зрения) и незначительное количество эпителиальных клеток
Подсчет количества сперматозоидов
пределение количества сперматозоидов в 1мл и во всем эякуляте
Принцип. Подсчет обездвиженных сперматозоидов в камере Горяева.
Реактивы.Для обездвиживания сперматозоидов используется один из реактивов.
1. 1 мл 40% формалина на 100 мл воды.
2. 1мл 40% формалина + 5г натрия бикарбоната на 100 мл воды.
3. Жидкость Рубенкова: 0,1г основного фуксина + 0,02 краски Романовского + 0,2мл концентрированной карболовой кислоты + 0,1 мл глицерина + 2 мл 96% этилового спирта на 100 мл физраствора. Эта жидкость не только обездвиживает, но и окрашивает сперматозоиды, что позволяет изучить их морфологию
Ход исследования. В пробирку вносят 0,4 мл одной из обездвиживающих жидкостей и 0,02 мл (капилляр Сали) эякулята. Тщательно перемешивают содержимое пробирки и заполняют этой смесью камеру Горяева. Ждут 2-3 минуты для оседания клеточных элементов и подсчитывают сперматозоиды в пяти больших разграфленных квадратах, расположенных по диагонали. Подсчитывают только те сперматозоиды, головки которых лежат внутри квадратов.
Расчет. Подсчитанное число умножают на 106, получая в результате количество сперматозоидов в 1мл эякулята. Затем умножают на объем эякулята и получают общее количество сперматозоидов.
Нормальное количество сперматозоидов: в 1 мл спермы содержится 100-150 ·106 сперматозоидов, во всем эякуляте количество сперматозоидов превышает 120·106, в среднем 150-450·106.
Оценка подвижности сперматозоидов
В зависимости от направления движения и скорости в ходе анализа все половые клетки ранее делили на 4 категории (подвижность сперматозоидов по классам):
Категория А. К этой группе относят сперматозоиды, которые быстро движутся по прямолинейной траектории. Скорость их при этом составляет 25 мкм/сек и более. При достаточном количестве таких половых клеток вероятность естественного зачатия высока. В эякуляте здорового мужчины содержаться не менее 32% сперматозоидов категории А.
Категория В. К этой группе относят сперматозоиды, которые имеют прогрессивное движение однако скорость их ниже. Эти половые клетки также достаточно перспективны в отношении оплодотворения. В частности, они могут начать передвигаться быстрее вследствие капацитации – сложного процесса, предполагающего в том числе заметное повышение их активности в половых путях женщины под воздействием специальных веществ. Концентрация сперматозоидов групп А и В в эякуляте здорового мужчины должна составлять не менее 40%.
Категория С. Половые клетки, относящиеся к этой категории, подвижны, однако не могут передвигаться по прямой. Как правило, они либо вращаются вокруг своей оси, либо совершают колебательные движения на одном месте. Причиной таких нарушений обычно являются аномалии строения шейки или хвоста.
Категория D. К этой категории относятся полностью неподвижные сперматозоиды. Как правило, это те клетки, у которых завершается или уже завершен жизненный цикл. Длительное воздержание перед сдачей анализа может стать причиной обнаружения большого числа таких клеток.
Согласно рекомендациям Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) от 2010 года, предлагается иная классификация, не учитывающая скорость передвижения клеток. Таким образом, вместо 4-х выделяются только 3 категории, а именно:
Прогрессивно-подвижные сперматозоиды (PR), то есть клетки, которые движутся либо по прямой, либо по кругу, который имеет очень большой радиус
Непрогрессивно-подвижные сперматозоиды (NP), то есть клетки, которые передвигаются не по прямой. При этом они могут либо совершать колебательные движения, либо двигаться по кругу, имеющему малый радиус
