Принцип. Глюкоза в присутствии фермента глюкозоксидазы окисляется кислородом воздуха с образованием перекиси водорода. Образующаяся перекись водорода под действием пероксидазы окисляет субстрат с образованием окрашенного продукта, определяемого фотометрически.
Кетонурия
Кетоновые тела (ацетон, р-оксимасляная и ацетоуксусная кислоты) определяют по назначению врача у больных сахарным диабетом, при тиреотоксикозе, при субарахноидальных кровоизлияниях, при ацетонемической рвоте у детей, при токсической диспепсии, дизентерии, при длительном голодании. При наличии запаха ацетона в моче, при глюкозурии лаборант обязан определить кетоновые тела и без назначения врача.
Кетонурия может быть
- алиментарного характера у детей и у взрослых при употреблении жирной и белковой пищи без углеводов
-при голодании ткани испытывают энергетический голод за счет сокращения запасов гликогена
-при сахарном диабете кетонурия связана с уменьшением гликогена в печени.
-гиперинсулинемии, акромегалии, болезни Иценко — Кушинга, тиреотоксикозе, эклампсии
-при обширных операциях, при субарахноидальном кровоизлиянии, черепно-мозговых травмах
-сильном эмоциональном возбуждении
-при токсикозе беременных.
Для определения кетоновых тел в моче используют:
1. реакцию Легаля;
2. реакцию Ланге (предпочтительнее реакции Легаля);
3) пробу Лестраде (экспресс-метод определения кетоновых тел в моче).
Принцип. Кетоновые тела в щелочной среде образуют соединение с нитропруссидом натрия, имеющее красную или фиолетовую окраску. При этом надо учитывать, что некоторые нормальные составные части мочи, в частности креатинин, также реагируют с нитропруссидом натрия. Чтобы отличить окраску, зависящую от кетоновых тел, от окраски, которую дает креатинин, используют химически чистую ледяную уксусную кислоту. Уксусная кислота разрушает окраску, обусловленную креатини-ном, но сохраняет и даже усиливает окраску, зависящую от кетоновых тел.
Билирубинурия
— это состояние, при котором в моче увеличивается содержание билирубина и качественные пробы на билирубин становятся положительными. Билирубин появляется в моче при увеличении концентрации связанного билирубина в крови больше 35—85 мкмоль/л при норме 8,55—20,5 мкмоль/л. За сутки у взрослого человека образуется 250—350 мг билирубина. В норме в моче билирубин рутинными методами не определяется.
Определение билирубина в моче производят по назначению врача. Лаборант обязан определить билирубин и без назначения врача, если моча имеет зеленовато-желтый, желтый, желтушный цвет и при окрашивании пены в желтый цвет при взбалтывании мочи.
Билирубин в моче определяют следующими методами: проба Розина, проба Гаррисона — Фуше.
Принцип. Билирубин под влиянием окислителя превращается в изумрудно-зеленый биливердин.
Уробилиновые тела (уробилиноген, стеркобилиноген, d-уробилиноген, третий уробилиноген)
в норме в небольшом количестве всегда присутствуют в моче взрослого человека, представлены стеркобилиногеном, который всасывается через слизистую толстого кишечника, и по геморроидальным венам и нижней полой вене попадают в почки. В норме уробилиновые тела отсутствуют у новорожденных, так как в кишечнике еще нет флоры, ферменты которой способствуют переходу билирубина в стеркобилиноген. Уробилинурия— повышение в моче уробилиновых тел характерна для:
-гемолитических состояний, параксизмальной ночной гемоглобинурии, эритремии, внутрисосудистого гемолиза, рассасывания обширных гематом
-вирусного и хронического гепатита, токсических поражений печени, рака печени, метастазов в печень, эхинококкоза.
- при циррозе печени, портальной гипертензии, тромбозе портальных вен
- при заболеваниях кишечника, когда нарушается всасывание уробилиновых тел. Наиболее часто такая картина наблюдается у детей при колитах, непроходимости кишечника, запорах. Уробилиновые тела могут не определяться при дисбактериозе, хронических заболеваниях кишечника, при лечении антибиотиками.
Выраженная уробилиногенурия является одним из чувствительных и достоверных признаков, отражающих функциональное состояние гепатоцитов, если у пациентов нет гемолиза и кишечной патологии
Количественное определение белка в моче
Количественное определение белка в моче основано на том, что при наслаивании мочи, содержащей белок, на 50% раствор азотной кислоты или реактив Ларионовой на границе двух жидкостей образуется белое кольцо, причем если четкое белое кольцо появляется к 3 минутам, то содержание белка равно 0,033%о или 33 мг в 1000 мл мочи.
Количественное определение глюкозы в моче
1. Поляриметрический метод. Основан на свойстве глюкозы, вращать плоскость поляризованного луча поляриметра вправо, причем угол отклонения луча пропорционален содержанию глюкозы в моче. Требования к материалу: полная прозрачность, кислая реакция, отсутствие белка (мочу подкисляют слабой уксусной кислотой, перемешивают, кипятят и фильтруют).
2. Колориметрический метод Альтгаузена. Основан на появлении цветной реакции при нагревании глюкозы со щелочью: 4 мл мочи смешивают с 1 мл 10% раствора едкого натра и кипятят в пробирке 1 минуту. Через 10 минут после кипячения цвет жидкости сравнивают с цветной шкалой Альтгаузена (каждый цветовой оттенок соответствует содержанию глюкозы).
3. Экспресс-метод тест полосками - Глюкотест, Глюкофан и др. – сравнивают со стандартной шкалой, выражающей содержание сахара в % и ммоль/л.
Подсчёт уроцитограммы
Метод Каковского-Аддиса: Метод Каковского-Аддиса является унифицированным методом количественного определения форменных элементов в суточном объеме мочи. Этот наиболее трудоемкий и имеющий много недостатков метод все реже применяется на практике в последнее время. Подготовка пациента. При исследовании мочи по методу Каковского-Аддиса во избежание получения заниженных данных, обусловленных распадом форменных
элементов в нейтральной или щелочной моче, а также в моче с низким удельным весом, пациенту в течение суток, предшествовавших исследованию, назначают мясную диету и ограничивают прием жидкости. При этих условиях обычно стандартизуется удельный вес мочи (1020 - 1025) и ее pH (5,5). Сбор мочи. Классический вариант исследования мочи по методу Каковского-Аддиса требует строго соблюдать правила сбора мочи и ее хранения в течение длительного времени. При этом мочу собирают в течение суток: утром больной освобождает мочевой пузырь, а затем в течение 24 часов собирает мочу в сосуд с 4 - 5 каплями формалина или 2 – 3 кристаллами тимола, мочу следует хранить в холодильнике. Однако на практике чаще пользуются другим, более простым способом сбора мочи - мочу собирают за 10 – 12 часов. При этом способе страдает точность результата. При данном варианте сбора мочи для метода Каковского-Аддиса перед сном больной опорожняет мочевой пузырь и отмечает это время. Утром, через 10 – 12 часов после вечернего мочеиспускания, пациент мочится в приготовленную посуду, вся моча отправляется в лабораторию для исследования. На бланке направления должно быть указано, в течение какого времени была собрана моча. При невозможности удержать мочу в течение 10 - 12 часов пациент собирает ее в несколько приемов, соблюдая условия ее хранения. У женщин мочу собирают катетером. Оборудование: мерная центрифужная пробирка, пипетка на 10 мл, счетная камера (Горяева, Фукса-Розенталя или Бюркера), стеклянная палочка, микроскоп. Ход исследования: доставленную мочу тщательно перемешивают, измеряют ее количество и отбирают для исследования количество, соответствующее 12 минутам или 1/5 часа. Это количество определяют по формуле: Q = V/(t*5), где Q – количество мочи (в мл), выделенное за 12 минут, V – общий объем собранной мочи (в мл), t – время (в часах), за которое собрана моча, 5 – число для расчета объема мочи, выделенной за 12 минут. Рассчитанное количество мочи помещают в градуированную центрифужную пробирку и центрифугируют 3 мин при 3500 об/мин, или 5 минут при 2000 об/мин. Отсасывают верхний слой, оставляя 0,5 мл мочи вместе с осадком. Если осадок превышает 0,5 мл, то оставляют 1 мл мочи. Осадок с надосадочной жидкостью тщательно перемешивают и заполняют камеру Горяева (или другую счетную камеру). В этой камере подсчитывают раздельно количество лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров (эпителиальные клетки мочевыводящих путей не считают). Примечание. Для подсчета цилиндров необходимо просмотреть не менее 4 камер Горяева (или Бюркера) или 1 камеру Фукса-Розенталя. Количество цилиндров, сосчитанное в 4 камерах Горяева или Бюркера, затем следует разделить на 4, а уже потом полученное число можно вставлять в формулу для определения количества цилиндров в 1 мкл осадка мочи. Рассчитывают количество форменных элементов в 1 мкл осадка мочи (x). При подсчете в камере Горяева и Бюркера x = H/0,9, где H – количество подсчитанных в камере клеток, а 0,9 – объем камеры. При подсчете в камере Фукс- Розенталя x = H/3,2, так как объем камеры 3,2 мм3. Затем, исходя из того, что для исследования было взято 0,5 мл, или 500 мм3, полученные количества форменных элементов в 1 мм3 умножают на 500 (а при осадке в 1 мл – на 1000), и получают количество форменных элементов, выделенных с мочой за 12 минут. В пересчете на 1 час это количество умножают на 5, а при расчете за сутки – еще на 24. Так как, 500, 5 и 24 являются постоянными числами, то соответственно полученное количество эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров (x) умножают на 60 000, если в пробирке для исследования было оставлено 0,5 мл мочи,
или на 120 000, если осадок был обильный и был оставлен 1 мл. Нормальные значения форменных элементов для метода Каковского-Аддиса: Число Каковского-Аддиса для нормальной мочи составляет до 1 000 000 для эритроцитов, до 2 000 000 для лейкоцитов, до 20 000 для цилиндров. Некоторые авторы указывают другие цифры для метода Каковского-Аддиса: эритроцитов – до 2 000 000 – 3 000 000, лейкоцитов – до 4 000 000, цилиндров – до 100 000. Метод Амбурже: Метод Амбурже относится к методам количественного определения форменных элементов в моче. При этом определяется количество форменных элементов, выделенных с мочой за 1 минуту. Подготовка больного. Больному ограничивают прием жидкости днем и исключают ночью. Сбор материала осуществляется в соответствии с основными правилами сбора мочи, отличительной особенностью сбора мочи для метода Амбурже является то, что утром больной опорожняет мочевой пузырь, замечает время и ровно через 3 часа собирает мочу для исследования. Мочу сразу отправляют в лабораторию на исследование. Оборудование: мерная центрифужная пробирка, пипетка на 10 мл, счетная камера (Горяева, Фукса-Розенталя или Бюркера), стеклянная палочка, микроскоп. Ход исследования: доставленную порцию мочи измеряют, хорошо перемешивают и отливают 10 мл в градуированную центрифужную пробирку. Центрифугируют 5 мин при 2000 об/мин, затем осторожно отсасывают верхний слой, оставляя точно 1 мл вместе с осадком. Осадок с надосадочной жидкостью перемешивают и взвесью заполняют счетную камеру. Раздельно подсчитывают число лейкоцитов и эритроцитов во всей камере. Производят подсчет клеток в 1 мкл осадка мочи (x). Если подсчет производился в камере Горяева или Бюркера x=H/0,9, где H - количество подсчитанных в камере клеток (отдельно лейкоцитов и эритроцитов), а 0,9 – объем камеры. При подсчете в камере Фукс- Розенталя x=H/3,2, так как объем камеры 3,2 мм3. Расчет числа форменных элементов, выделенных за 1 минуту, проводят по формуле: A=x•(1000•V)/(S•t), где A – количество клеток, выделенных с мочой за минуту, x – число клеток в 1 мкл осадка (раздельно для лейкоцитов и эритроцитов), 1000 – объем осадка (в кубических миллиметрах), V – объем мочи, выделенной за 3 часа (в миллилитрах), S – количество мочи, взятой для центрифугирования (в миллилитрах), t – время, за которое собрали мочу (в минутах). Нормальные значения. В норме количество лейкоцитов в минутном объеме мочи составляет 2000, эритроцитов – 1000. Иногда в литературе можно встретить другие цифры нормы: лейкоцитов в минутном объеме мочи – 2500, эритроцитов – 2000. Метод Нечипоренко: Метод Нечипоренко в отечественной лабораторной диагностике является наиболее распространенным методом количественного определения форменных элементов в моче. Этот метод наиболее прост, доступен любой лаборатории и удобен в амбулаторной практике, а также имеет ряд преимуществ перед другими известными количественными методами исследования осадка мочи. По методу Нечипоренко определяют количество форменных элементов (эритроцитов, лейкоцитов и цилиндров) в 1 мл мочи.
Подготовка пациента. Специальной подготовки для исследования мочи по методу Нечипоренко не требуется. Сбор мочи. Для исследования мочи по методу Нечипоренко собирается только средняя порция (в середине мочеиспускания) первой утренней мочи (достаточно 15 – 20 мл). На это обязательно следует указать пациенту. При этом необходимо соблюдать основные правила сбора мочи. Моча сразу же доставляется в лабораторию. В стационаре для уточнения топической диагностики для исследования мочи по методу Нечипоренко может быть использована моча, полученная при раздельной катетеризации мочеточников. Оборудование: мерная центрифужная пробирка, пипетка на 10 мл, счетная камера (Горяева, Фукса-Розенталя или Бюркера), стеклянная палочка, микроскоп. Ход исследования: доставленную мочу хорошо перемешивают, отливают 5 – 10 мл в центрифужную градуированную пробирку и центрифугируют 3 мин при 3 500 об/мин, отсасывают верхний слой мочи, оставляя 1 мл вместе с осадком. Хорошо перемешивают осадок и заполняют камеру Горяева или любую счетную камеру. Обычным способом во всей сетке камеры подсчитывают число форменных элементов (раздельно лейкоцитов, эритроцитов и цилиндров) в 1 мм3 осадка мочи (x). Установив эту величину и подставив ее в формулу, получают число форменных элементов в 1 мл мочи: N = x*(1000/V), где N – число лейкоцитов, эритроцитов или цилиндров в 1 мл мочи, x – число подсчитанных лейкоцитов, эритроцитов или цилиндров в 1 мм3 (1 мкл) осадка мочи (при подсчете в камере Горяева и Бюркера x = H/0,9, где H – количество подсчитанных в камере клеток, а 0,9 – объем камеры, а при подсчете в камере Фукс- Розенталя x = H/3,2, так как объем камеры 3,2 мм3), V – количество мочи, взятой для исследования (если моча берется катетером из лоханки, то V обычно меньше 10), 1000 – количество осадка (в кубических миллиметрах). Примечание. Для подсчета цилиндров необходимо просмотреть не менее 4 камер Горяева (или Бюркера) или 1 камеру Фукса-Розенталя. Количество цилиндров, сосчитанное в 4 камерах Горяева или Бюркера, затем следует разделить на 4, а уже потом полученное число можно вставлять в формулу для определения количества цилиндров в 1 мкл осадка мочи. Нормальные значения. Для метода Нечипоренко нормальным считается содержание в 1 мл мочи лейкоцитов до 2000, эритроцитов - до 1000, цилиндры отсутствуют или обнаруживаются в количестве не более одного на камеру Фукса-Розенталя или на 4 камеры Горяева. Цифры одни и те же для взрослых и детей, для лоханочной и пузырной мочи.
Подготовка проб мочи для исследования по Нечипоренко
Исключить из пищи острое и соленое, а также продукты, влияющие на цвет мочи, накануне исследования.
Отменить прием мочегонных средств за двое суток до сдачи анализа.
Техника сбора:
Провести гигиену наружных половых органов.
Необходимо собрать среднюю порцию мочи, т.е. первую часть мочи выпустить в унитаз, затем приостановить мочеиспускание и собрать в контейнер среднюю порцию.
Закрытый крышкой контейнер с биоматериалом доставляют в лабораторию.
Исследование мочи по Нечипоренко не требует 100% стерильности емкости для сбора, поскольку не предполагает подсчет и выявление бактерий.
Подготовка камера Горяева
Камеру и шлифовальное стекло моют под проточной водой, насухо вытирают. На участок камеры с нанесенными сетками укладывают шлифованное покровное стекло, осторожно нажимая большими пальцами на края покровного стекла, его притирают к боковым пластинкам камеры до появления радужных колец Ньютона. С помощью стеклянной палочки каплю исследуемой жидкости помещают перед щелью, образующейся между покровным стеклом и счетной камерой. В силу закона капиллярности жидкость заполняет пространство подпокровным стеклом над сеткой. При заполнении камеры надо стараться, чтобы исследуемая жидкость не растекалась в борозды камеры и, чтобы в камеру не попали пузырьки воздуха. Все это может изменить правильное распределение элементов крови в камере. Равномерность заполнения и распределения форменных элементов и цилиндров по сетке камеры проверяют под микроскопом. После заполнения камеру оставляют стоять на 1-2 мин., чтобы элементы осели на дно и движение их прекратилось.
Подсчёт количества лейкоцитов , эритроцитов, цилиндров в камере Горяева
Подсчёт лейкоцитов.
Для подсчета отдельных видов лейкоцитов кровь разводят в несколько раз слабым раствором уксусной кислоты, при этом образцы без лейкоцитоза, как правило, следует разводить не менее чем в 20 раз, в случаях выраженного увеличения количества белых кровяных телец может потребоваться большее разведение. Для контрастирования изображения применяют окрашивание метиленовой синью. После заполнения камер исследуемым объемом крови сверху накладывается покровное стекло сеткой и производится ее притирка, в ходе которой должны полностью исчезнуть пузыри воздуха между двумя стеклами. Заполненная камера помещается под микроскоп, причем целесообразно оставить ее неподвижной на 1-2 минуты для того, чтобы форменные элементы полностью прекратили движение и осели. После этого на среднем увеличении (окуляр не менее чем х10) проводится подсчет отдельных видов лейкоцитов в не менее чем 100 квадратах. Для перевода получившегося числа в объемные значения необходимо умножить его на разведение (как правило, в 20 раз) и на количество квадратов, участвовавших в подсчете (чаще всего 100). Полученное число дает представление о количестве лейкоцитов в 1 мкл крови. Подсчёт эритроцитов.
Исследуемую кровь разводят при помощи физиологического раствора минимум в 100 раз для того, чтобы стал возможен визуальный подсчет красных кровяных телец. При недостаточном разведении в камерах образуется двойной слой форменных элементов крови, что делает невозможным их определение. После наложения покровного стекла и притирки проводят микроскопирование препарата при увеличении окуляром х10. Подсчет ведется во всех 5 больших квадратах, разделенных линиями на 16 секторов. Расчет объемных значений проводят при помощи умножения полученного числа эритроцитов на степень разведения (чаще в 100 или 200 раз) и на 4000, затем проводят деление полученного числа на 80 (количество малых квадратов при подсчете). Полученное число характеризует количество эритроцитов в 1 мкл крови. Подсчёт цилиндров.
Для подсчета цилиндров необходимо просмотреть не менее 4 камер Горяева (или Бюркера) или 1 камеру Фукса-Розенталя. Количество цилиндров, сосчитанное в 4 камерах Горяева или Бюркера, затем следует разделить на 4, а уже потом полученное число можно вставлять в формулу для определения количества цилиндров в 1 мкл осадка мочи.
N = x*(1000/V), где N – число лейкоцитов, эритроцитов или цилиндров в 1 мл мочи, x – число подсчитанных лейкоцитов, эритроцитов или цилиндров в 1 мм3 (1 мкл) осадка мочи (при подсчете в камере Горяева и Бюркера x = H/0,9, где H – количество подсчитанных в камере клеток, а 0,9 – объем камеры, а при подсчете в камере Фукс- Розенталя x = H/3,2, так как объем камеры 3,2 мм3), V – количество мочи, взятой для исследования (если моча берется катетером из лоханки, то V обычно меньше 10), 1000 – количество осадка (в кубических миллиметрах).
Участие в проведении функциональных проб мочи
Функциональные пробы мочи (функциональное исследование почек)
Проба на концентрирование
Референтные пределы, норма пробы на концентрирование: При 18 часовом лишении жидкости – 1,028-1,030 г/мл Метод проведения пробы на концентрирование: В течение 18-24 часов испытуемый принимает белковую пищу и не принимает жидкости, моча собирается каждые 4 часа. Максимум концентрации в норме приходиться на 18 часов от начала пробы . Клиническое применение: -при снижении максимальной относительной плотности до 1,017 г/мл – нарушение концентрационной функции почек -показатель 1,015-1,016 г/мл – значительное нарушение концентрации мочи -показатель 1,010 – 1,012 г/мл – изостенурия, полное прекращение функции концентрирования мочи (относительная плотность мочи равна относительной плотности плазмы крови) Противопоказания к проведению пробы -обильные внепочечные потери жидкости (рвота, диарея) -прием мочегонных препаратов -острая почечная недостаточность и обострение ХПН на фоне высокого уровня креатинина (132 мкмоль/л)
Проба на разведение
Референтные пределы, норма пробы на разведение: При проведении пробы относительная плотность мочи снижается до 1,001-1,002 г/мл, в дальнейшем – 1,008-1,030 г/мл Клиническое применение пробы на разведение: -при отсутствии снижения до 1,003-1,004 г/мл – нарушение функции разведения -более 1,010 г/мл – полное выпадение функции разведения Противопоказания пробы на разведение: -сердечная недостаточность -гипертоническая болезнь -олигурическая недостаточность почек (острая и хроническая)
Проба Зимницкого \ Проба по Зимницкому
Референтные пределы, норма пробы по Зимницкому: суточный диурез – 67-75% количества выпитой жидкости дневной диурез 2/3-3/4 от общего суточного диуреза относительная плотность - 1,005-1,025 г/мл Клиническое применение -нарушение функционального состояния почек: выявление олигурии, анурии, полиурии -никтурия как признак нарушения почечной функции -нарушение функционального состояния почек по снижению амплитуды колебаний относительной плотности мочи (гипостенурия – снижение максимальной относительной плотности до 1,012 г/мл; гиперстенурия – увеличение минимальной относительной плотности до 1,010 г/мл; изостенурия – фиксация показателя относительной плотности в пределах 1,010-1,011 г/мл
Участие в проведении исследования мочи на мочевом анализаторе
В комплект входят специальные тест-полоски, на которые следует нанести небольшое количество мочи и вставить в само устройство. После обработки выдаётся результат.
Участие в регистрации полученных результатов общеклинических исследований мочи
Каждый сотрудник лаборатории должен использовать одни и те же формы (бланки результатов анализов) для сообщения полученных результатов. Форма бланка должна содержать название лаборатории и медицинский организации; информацию о пациенте, достаточную для его идентификации; название биологического материала и всех исследуемых показателей; дату получения пробы и, если это необходимо, время получения; результаты исследования; референтные интервалы; фамилию и подпись сотрудника, выполнившего исследование. Порядок выдачи результатов должен быть определен инструкцией, утвержденной руководителем медицинской организации.
Участие в проведении утилизации отработанного биологического материала
К отходам деятельности лаборатории, в зависимости от их класса, предъявляют различные требования по обеззараживанию, сбору, временному хранению, транспортированию и утилизации.
Отходы класса А (неопасные) не требуют специального обеззараживания. Их собирают в пластиковые пакеты белого цвета, герметично закрывают и в твердых емкостях (например, баках) с крышками переносят к мусороприемнику для дальнейшего вывоза на полигон твердых бытовых отходов (ТБО).
Отходы класса Б (опасные) подвергают обязательной дезинфекции на месте их образования в соответствии с действующими нормативными документами (СП I. 3.1285-03). Обеззараженные отходы собирают в одноразовую герметичную упаковку желтого цвета. Для твердых отходов, имеющих острые края (битая стеклянная посуда, пипетки и т.п.), используют твердую упаковку, для игл от шприцов испльзуют специальные одноразовые контейнеры. Одноразовые емкости желтого цвета с отходами класса Б маркируют надписью «Опасные отходы – «Класс Б» с указанием названия лаборатории, кода учреждения, даты, фамилии ответственного за сбор отходов лица. Заполненные емкости помещают во влагонепроницаемые баки желтого цвета с той же маркировкой, герметично закрывают крышкой и переносят к металлическим контейнерам, которые размещены на специальной площадке хозяйственного двора учреждения (лаборатории). Дальнейшую утилизацию отходов проводят централизовано специальным автотранспортом на полигон ТБО или децентрализовано к месту кремации, если учреждение имеет крематорий для сжигания отходов.
Использованные для переноса (перевоза), временного хранения многоразовые емкости (баки, контейнеры) дезинфицируют и моют.
Отходы класса В (чрезвычайно опасные) подвергают обязательной дезинфекции на месте их образования в соответствии с действующими нормативными документами (СанПиН 2.1.7.2527-09, СП 1.3.1285-03; СанПин 2.1.7.728-99). Обеззараживание отходов проводят автоклавированием или обработкой дезрастворами. Эффективность работы автоклавов контролируют с помощью химических (каждый цикл автоклавирования) или биологических (ежемесячно) тестов. Путем автоклавирования обеззараживают жидкие и плотные питательные среды с посевами ПБА I-IV групп патогенности и без посевов; вскрытые ампулы из-под лиофилизированных культур (предварительно обеззараженные в дезрастворе); пробирки, флаконы, колбы с бактериальными взвесями; сыворотки; лабораторную посуду; обгоревшие ватно-марлевые пробки и другой материал, инфицированный или подозрительный на зараженность ПБА I-IV групп.
Жидкие питательные среды с посевами микроорганизмов после обеззараживания автоклавированием разводят водопроводной водой 1:2 и сбрасывают в канализацию. Рабочие растворы отработанных дезсредств после экспозиции в течение не менее 24 ч разводят водопроводной водой 1:2 и сливают в канализацию.
Лабораторные отходы класса В (из блока для работы с инфицированными животными) после обеззараживания в дезрастворах могут содержать ватные и ватно-марлевые тампоны, салфетки, вскрытые трупы мелких экспериментальных животных, трупы отловленных в природе грызунов, остатки корма и подстилочный материал из садков, где содержались лабораторные животные до и после экспериментов, шприцы, ампулы и флаконы с остатками вакцинных препаратов, сколы концов пастеровских пипеток и ампул и др.
После обеззараживания отходы класса В собирают в одноразовую упаковку красного цвета. Одноразовая упаковка может быть мягкой (пакеты) и твердой (одноразовые емкости). Каждая упаковка маркируется надписью «Чрезвычайно опасные отходы – «Класс В» с указанием названия лаборатории, кода, даты и фамилии ответственного сотрудника. Бактериальные культуры, вирусологически опасный материал, различные острые предметы, экспериментальных животных складывают в твердую герметичную упаковку, нетвердые отходы – в герметичную мягкую упаковку.
Все заполненные емкости укладывают в маркированные водонепроницаемые металлические баки (контейнеры) с плотно закрывающимися крышками и хранят до кремирования в специально отведенном месте в пределах лаборатории. Транспортирование отходов класса В для утилизации осуществляют только в закрытых кузовах специально применяемых для этих целей автомашинах, которые после вывоза подвергают спецобработке.
Подготовку обеззараженных отходов лабораторной деятельности к утилизации (сбор, упаковка, герметизация, размещение в емкости для временного хранения) осуществляет ответственное лицо из числа работников лаборатории в средствах индивидуальной защиты (противочумный костюм III типа, дополненного при необходимостиреспиратором и прорезиненным фартуком).
Отходы лаборатории класса Г по степени токсичности делятся на следующие подклассы (Сан ПиН № 4286-87, Приказ МПР РФ от 02.12.2002 г. № 786):
1 – ртуть, термометры, лампы люминесцентные
2 – масла, серная кислота, электролиты
3 – медицинские отходы
4 – картонная упаковка
Использованные люминесцентные лампы, ртутьсодержащие приборы собирают в закрытые влагонепроницаемые емкости черного цвета с маркировкой «Отходы – «Класс Г» и хранят в специально выделенном помещении до утилизации, которая осуществляется в соответствии с действующими нормативными документами. Если во время работы повреждена целостность ртутьсодержащих приборов или термометров и ртуть вылилась, необходимо немедленно провести демеркуризацию.
Масла, минеральные (хлорводородная, азотная, серная) и сильные органические кислоты, щелочи утилизируют согласно действующим нормативным документам.
Вакцинные, диагностические и лекарственные препараты с истекшим сроком годности после обеззараживания путем автоклавирования измельчают, помещают в пакеты черного цвета и хранят до утилизации в водонепроницаемом герметически закрытом контейнере с маркировкой «Отходы – «Класс Г». В эти же контейнеры складывают ненужную картонную упаковку в мягких одноразовых маркированных пакетах черного цвета. Вывоз этих отходов на полигон ТБО осуществляют централизованно специализированным автотранспортом.
Участие в проведении дезинфекции использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты
1. Кипячение в дистиллированной воде в течение 30 минут, или в 2% растворе питьевой соды – 15 мин. Данным методом подвергаются дезинфекции изделия из стекла, металла, термостойких полимерных материалов, резины. 2. Паровой метод – обработка водяным насыщенным паром под избыточным давлением 0,5 кгс/см2 (4,9*104 Па) при температуре 1100С в течение 20 мин. Таким способом можно дезинфицировать изделия из стекла, металла, резины, латекса и термостойких полимеров. 3. Воздушный метод – сухой горячий воздух при температуре 1200С в течение 45 мин. Применяется для дезинфекции изделий из стекла и металла. 4. Химический метод – растворы химических веществ, температура которых не менее 180С. Данным методом подвергаются дезинфекции изделия из стекла, коррозионностойкого металла, полимерных материалов, резины. В качестве химических дезсредств можно применять следующие растворы: - 3% раствор хлорамина – 60 мин; - 6% раствор перекиси водорода – 60 мин; - 6% раствор перекиси водорода с 0,5% раствором моющего средства, разрешенного к применению МЗ РБ- 60 мин; - 4% раствор формалина (по формальдегиду) – 60 мин; - 2,5% раствор глютарового альдегида – 30 мин; - 0,5 раствор дезоксона-1 – 60 мин; - 0,6% раствор нейтрального гипохлорита кальция – 60 мин; - 0,5% раствор сульфохлорантина-Д – 60 мин. 11
