стрептококки, диплококки, палочки Пфейффера, спирохеты Плаута-Венсана, актиномицеты и другие микроорганизмы.
Участие в проведении общеклинического и бактериоскопического исследования мокроты
Общеклинический анализ мокроты включает:
Ø макроскопическое исследование (физические свойства);
Ø микроскопическое исследование;
Ø бактериоскопическое исследование (проводится в микробиологической лаборатории).
Исследование мокроты проводят, строго соблюдая нормативную документацию (приказ №109), соблюдая все правила сан.-эпид. режима и техники безопасности (спец. одежда, респиратор, резиновые перчатки, при необходимости защитный экран).
Работа ведется в вытяжном шкафу.
После работы препаровальные иглы немедленно прокалываются на огне, деревянные палочки протыкиваются в емкости, содержащей песчаную смесь с дез. средством (70% древесный спирт), затем сжигаются. Лабораторная посуда подвергается обработке согласно нормативной документации.
Бактериоскопическое исследование.
Выявляют возбудителя патологического процесса ( делают посев на питательные среды), а так же можно произвести подбор антибиотика эффективного при данном возбудителе (то есть определить чувствительность возбудителя к тому или иному антибиотику).
Выявление в микропрепаратах альвеолярных макрофагов, содержащих гемосидерин
С препарата, в котором были обнаружены альвеолярные макрофаги с лимонно-желтой или золотисто-желтой зернистостью, снимают покровное стекло. Мокроту подсушивают на воздухе. На 8-10 минут на препарат наливают реактив (смесь равных объемов 3% раствора соляной кислоты и 5% раствора желтой кровяной соли). Через 8-10 минут реактив сливают. Препарат накрывают покровным стеклом и изучают под большим увеличением. При наличии гемосидерина альвеолярные макрофаги окрашиваются в синий (голубой) цвет
Оценка микроскопической картины мокроты
1. Слизь — волокнистая или сетевидная, вместе с форменными элементами (лейкоцитами, эритроцитами), сероватого цвета.
2. Эпителий — плоский, круглый (альвеолярные макрофаги), цилиндрический (мерцательный).
Плоский эпителий имеет форму полигональных бесцветных клеток с обильной цитоплазмой и одним ядром. Эпителий цилиндрический, мерцательный (бронхов) представляет собой продолговатой формы клетки, один из концов которых сужен, а на другом — тупом — нередко видны реснички; ядро, круглой или овальной формы, расположено эксцентрично в широкой части клетки; цитоплазма содержит мелкую зернистость. Иногда (при бронхиальной астме) эпителий бронхов выявляется в виде железистоподобных образований, которые в свежевыделенной мокроте имеют движущиеся реснички.
Альвеолярные макрофаги — это круглой формы клетки по размерам в несколько раз больше лейкоцитов, с выраженной зернистостью в цитоплазме, из-за которой в большинстве случаев не видно ядра. Зернистость обычно сероватого цвета. Подвергаясь, жировому перерождению, альвеолярные макрофаги становятся более темными, так как капли жира, накапливающиеся в клетке, сильнее преломляют лучи проходящего через них света.
При наличии угольного пигмента часть зернистости приобретает черный цвет. У курильщиков альвеолярные макрофаги содержат буровато-желтую зернистость. Золотисто-желтая зернистость обусловлена наличием в альвеолярных макрофагах кровяного пигмента, содержащего железо (гемосидерин). С целью обнаружения гемосидерина в мокроте используют химическую реакцию.
Реакция на гемосидерин в мокроте
С препарата, в котором были обнаружены альвеолярные макрофаги с лимонно-желтой или золотисто-желтой зернистостью, снимают покровное стекло. Мокроту подсушивают на воздухе. На 8-10 минут на препарат наливают реактив (смесь равных объемов 3% раствора соляной кислоты и 5% раствора желтой кровяной соли). Через 8-10 минут реактив сливают. Препарат накрывают покровным стеклом и изучают под большим увеличением. При наличии гемосидерина альвеолярные макрофаги окрашиваются в синий (голубой) цвет
3. Миелин — различной формы матово-серые образования, которые могут находиться в мокроте внеклеточно, а также внутри альвеолярных макрофагов.
Для отличия миелина от капелек жира используют микрореакцию: к материалу, в котором был обнаружен миелин, осторожно прибавляют одну каплю концентрированной H2SO4; при этом миелин окрашивается в оттенки от фиолетового до красного цвета.
4. Нейтрофилы. Морфологически нейтрофилы напоминают лейкоциты, встречающиеся в моче. В гнойной мокроте происходит разрушение лейкоцитов, поэтому в некоторых местах препарата находят зернистую бесструктурную массу (детрит).
5. Эозинофилы. Имеют ряд отличительных от нейтрофилов признаков. Они несколько больше их по размеру, содержат крупную зернистость, благодаря чему выглядят более темными. Их скопления при малом увеличении имеют желтоватый оттенок. Особенно много эозинофилов содержится в желтоватых рассыпчатых клочках мокроты больных бронхиальной астмой. Иногда среди эозинофилов находят кристаллы Шарко-Лейдена. Для более точного распознавания эозинофилов препарат окрашивают.
Техника окраски эозинофилов. Мокроту распределяют по предметному стеклу. Препарат высушивают на воздухе и фиксируют над пламенем горелки. Теплое стекло помещают на 3 минуты в 0,5% спиртовой раствор эозина, а затем промывают водой и красят в течение нескольких секунд 0,5-1% водным раствором метиленовой синьки. Вновь промывают водой, высушивают и изучают под микроскопом с иммерсией. В эозинофилах выявляют красную зернистость . Окрасить эозинофилы можно также способом Романовского. С этой целью препарат окрашивают точно так же, как мазки крови, но только меньше времени (8-10 минут).
6. Эритроциты — неизмененные выглядят так же, как и в моче. В бурых кровянистых частицах они обычно не обнаруживаются.
7. Жирно-зернистые клетки — округлой формы, в несколько раз больше лейкоцитов, содержат жировые капельки, сильно преломляющие свет.
8. Клетки злокачественных новообразований — разных размеров, жиро- и вакуольно-перерожденные. Встречаются отдельно и в виде тесных округлых групп или стержневидных образований, луковиц и пр.
9. Эластические волокна
а) простые эластические волокна — блестящие, тонкие, нежные двуконтурные образования, толщина которых равномерна на всем протяжении. Встречаются скоплениями среди гнойных частиц и в мелких плотноватых клочках, в виде обрывков и единичных волокон среди казеозного распада;
б) коралловидные эластические волокна. Представляют собой простые эластические волокна, покрытые мылами. В связи с этим они лишены блеска, грубее и толще простых эластических волокон;
в) обызвествленные эластические волокна. Они грубее и толще простых эластических волокон, часто фрагментированы, некоторые из них напоминают палочковидные образования. Наиболее часто этот вид волокон располагается среди аморфной массы солей извести и капелек жира, что называют обызвествляющим жировым казеозным распадом. Обызвествляющий жировой казеозный распад, обызвествленные эластические волокна, кристаллы холестерина и микобактерии туберкулеза называют тетрадой Эрлиха.
Элементы тетрады Эрлиха легче обнаружить, если при тщательном макроскопическом исследовании мокроты отобрать беловатые рассыпчатые клочки.
В некоторых случаях для отличия коралловидных волокон от обызвествленных используют микрохимическую реакцию. К исследуемому материалу добавляют 1-2 капли 10-20% раствора NaOH; мыла, покрывающие коралловидные волокна, растворяются, и из-под их покрова освобождаются простые эластические волокна; обызвествленные эластические волокна под влиянием воздействия щелочи не изменяются. При обнаружении в нативном препарате эластических волокон препарат обязательно окрашивают по Цилю-Нильсену. В некоторых случаях прибегают к обработке мокроты с целью обнаружения простых эластических волокон.
Техника обработки мокроты с целью выявления эластических волокон. К небольшому количеству мокроты прибавляют равный объем 10% раствора щелочи; смесь нагревают до растворения, а затем разливают в две центрифужные пробирки и центрифугируют, предварительно добавив по 5-8 капель 1% спиртового раствора эозина. Из осадка готовят препарат и рассматривают под микроскопом. Эластические волокна окрашиваются в оранжево-красный цвет
10. Фибрин — имеет форму тонких волоконец, расположенных параллельными пучками пли сетевидно.
11. Кристаллы гематоидина — ромбовидные или игольчатые, красновато-оранжевого цвета.
12. Холестерин — бесцветные таблички со ступенчатообразными уступами.
13. Кристаллы Шарко-Лейдена— ромбовидные, бесцветные кристаллы, напоминающие стрелку магнитного компаса.
14. Кристаллы жирных кислот — имеют вид длинных слегка изогнутых серых игольчатых образований.
15. Спираль Куршмана — слизистое, спиралевидное закругленное образование, имеющее центральную нить и мантию. В некоторых случаях спираль имеет либо центральную нить, либо мантию. Наряду со спиралью часто в одном и том же препарате обнаруживают эозинофилы и кристаллы Шарко-Лейдена.
16. Пробка Дитриха — беловатого или желтовато-сероватого цвета комочки творожистой копсистенции, иногда со зловонным запахом, сходные по форме с зернами чечевицы. Состоят из кристаллов жирных кислот, нейтрального жира, детрита и скоплений бактерий.
.
17. Рисовидные тельца — округлые, плотные образования. Содержат скопления коралловидных волокон, продуктов жирового распада, мыла, кристаллы холестерина и большое количество микобактерий туберкулеза.
18. Друзы актином ицетов — при малом увеличении представляют собой округлые образования с резко очерченными контурами, желтоватого цвета, с аморфной серединой и с более темной окраской по краям; при большом увеличении центр друзы представляет собой скопление лучистого грибка, нити которого на периферии заканчиваются колбовидными вздутиями. При окраске по Граму нити мицелия грибка грамположительны, а колбовидные вздутия грамотрицательны.
19. Элементы эхинококка — хитиновая оболочка эхинококкового пузыря (в тонких местах прозрачна и имеет нежную параллельную исчерченность), крючья и сколексы эхинококка.
Выявление кислотоустойчивых микобактерий туберкулеза при проведении бактериоскопии
Наибольшее значение имеет обнаружение в мокроте эластических волокон. Эластические волокна выделяются из легких в виде пучков различной величины, сохраняющих очертания альвеол, без сохранения альвеолярного строения или в виде небольших обрывков. Кроме того, в мокроте могут обнаруживаться так называемые коралловидные волокна (волокна Коппена-Джонса) - толстые, шероховатые образования, которые образуются в результате отложения на эластических волокнах жирных кислот. Могут также выявляться обызвествленные волокна. Наличие эластических волокон в мокроте указывает на разрушение легочной ткани. При свежем распаде пучки волокон сохраняют альвеолярное строение, при пролиферативных формах туберкулеза альвеолярное строение не сохраняется. Коралловидные волокна появляются в основном в случаях старого туберкулеза, обызвествленные волокна - при распаде обызвествленных очагов во время обострения процесса. В мокроте больных туберкулезом можно обнаружить известковые соли (в основном карбонаты и сульфаты). Они попадают в мокроту чаще всего из старых, распадающихся обызвествленных очагов. Кристаллы холестерина, как правило, свидетельствуют о наличии в легких старых каверн.
Участие в регистрации полученных результатов общеклинических и бактериоскопических исследований мокроты
В заключительном ответе должна быть приведена следующая информация: •характеристика качества собранной мокроты; •использованный метод окраски; •среднее количество кислотоустойчивых микобактерий в препарате; •выявление больших скоплений микроорганизмов, что может свидетельствовать о гораздо большем количестве КУМ, чем указано в заключении; •давайте заключение только о количестве кислотоустойчивых микобактерий; не пытайтесь идентифицировать вид микобактерий; •укажите дату исследования и фамилию сотрудника, проводившего исследование; •всегда отправляйте результат в медицинское учреждение, приславшее пробы. Никогда не ограничивайтесь выдачей результата пациенту, если больной не сообщит о результате исследования в лечебное учреждение, он может не получить надлежащего лечения. Результаты исследования всех препаратов должны регистрироваться в лабораторном журнале, где должна содержаться следующая информация: фамилия больного, пол, возраст, название медицинского учреждения и номер истории болезни, основание для проведения исследования (диагностика или мониторинг химиотерапии), результат бактериоскопии и примечания (если необходимо). Рекомендуется
положительные результаты исследования вписывать в журнал красными чернилами. Затем, на основании записей в лабораторном журнале необходимо подготовить индивидуальные ответы по каждому больному
Участие в проведении утилизации отработанного биологического материала; дезинфекции и предстерилизации использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты
Для обеззараживания мокроты:
1. Заливают (из расчета 2 объема дез. раствора на 1 объем мокроты) 5% раствором хлорамина на 12 часов или 10% раствором хлорной извести на 1 час, или засыпают на 1 час хлорной известью (200 г/л)
2. После обеззараживания мокроту сливают в канализацию, а плевательницы или посуду, в которой дезинфицировали мокроту, моют обычным способом.
3. Плевательницы кипятят в 2% растворе соды 30 минут или погружают в 5% раствор хлорамина на 1 час
Металлические предметы (шпатели, иглы) обеззараживают прокаливанием над огнем. Во избежание переноса микроорганизмов из одной порции мокроты в другую шпатель и иглу немедленно прокаливают после отбора соответствующих частиц. Покровные стекла опускают в небольшую плоскую чашечку с 40% раствором серной кислоты на 12-24 часа. Затем кислоту сливают, а стекла неоднократно промывают водопроводной и дистиллированной водой. Вымытые стекла высушивают и используют для последующих исследований.
Дата, место проведения УП
Содержание и объем работы
4 день
Оценка, подпись преподавателя
Участие в подготовке рабочего места для проведения общеклинических исследований ликвора и выпотных жидкостей: Подготовка оборудования, расходного материала, реактивов
- Включить полностью освещение рабочего места и убедиться в исправной работе светильников.
- Проверить санитарное состояние рабочего места и проветрить его, открыв окна или фрамуги и двери. Убедиться в том, что температура воздуха на рабочем месте соответствует установленным санитарным нормам.
- Надеть спецодежду, спецобувь и другие средства индивидуальной защиты.
- Подготовить рабочую зону для безопасной работы.
- Проверить наличие и надежность подсоединения защитного заземления к корпусам электрооборудования (если рабочее место с электрооборудованием).
- Убедиться в исправности электрооборудования рабочего места (если имеется): светильники должны быть надежно подвешены к потолку и иметь светорассеивающую арматуру; электрические коммутационные коробки должны быть закрыты, а электророзетки — фальшвилками; корпуса и крышки выключателей и розеток не должны иметь трещин и сколов, а также оголенных контактов. При использовании технических средств убедиться в их исправности и целостности подводящих кабелей и электровилок.
- Подготовить необходимое для работы оборудование и инвентарь. Проверить его исправность.
Подготовка растворов для дезинфекции отработанного материала
1.Отработанные предметные стекла, пипетки, пробирки, пробки, стеклянные палочки, химические стаканчики и т.п. складывают в течение рабочего дня в емкости с дезинфицирующим раствором до полного вертикального погружения (10%-ный хлорамин, «Велтолен», «Аламинаг», дезсредства типа «Септодор», «Дианокс», «Виркон» и т.д., допущенные к применению в установленном порядке) для предварительного обеззараживания.
2. Заключительное обеззараживание лабораторной посуды проводится путем кипячения в воде (с момента закипания не менее 30 минут) с добавлением хозяйственного мыла или жидкого моющего средства. При соответствующих условиях можно использовать автоклавирование. После дезинфекции посуда допускается для мытья и стерилизации.
3. Ватно-марлевый материал, бумажные фильтры и разовые деревянные палочки уничтожаются путем сжигания или выброса в контейнер для мусора после экспозиции в одном из дезинфицирующих растворов или предварительно засыпаются сухим порошком хлорной извести или хлорамина.
4. Пробы фекалий, мокроты, желчи, мочи засыпаются сухой хлорной известью или белильной термостойкой известью или хлорамином перед выбросом в контейнеры или сливом в общую канализационную систему (при соответствующих условиях для обезвреживания используют автоклавирование).
Регистрация и маркировка проб
Регистрацию результатов реакции производят в течение 3 мин после исследования, так как в последующем помутнение может произойти и в нормальной СМЖ. Сравнение опыта с контролем производят на темном фоне. Для выражения результатов пользуются системой 4 плюсов.
Подготовка проб ликвора и выпотных жидкостей для подсчета цитоза
Микроскопическое исследование ЦСЖ предусматривает определение цитоза, то есть количества лейкоцитов в единице объема и дифференциацию клеточных элементов. Микроскопию следует проводить как можно скорее после взятия жидкости (в течение 30минут), так как клетки в ней быстро разрушаются.
Подсчет цитоза производится аналогично счету клеток крови в счетной камере. Но поскольку клеток в ликворе значительно меньше, для их счета пользуются камерой большего объема – Фукса-Розенталя (емкость 3,2мкл). По этой же причине жидкость не разводят, а только добавляют к ней 1/10 объема краски для разрушения эритроцитов и подкрашивания клеточных ядер.
Подготовка нативных и окрашенных микропрепаратов ликвора и выпотных жидкостей
Для определения клеточного состава исследуемой выпотной жидкости проводят микроскопическое изучение нативных и окрашенных препаратов.
Нативные препараты готовят следующим образом: на предметные стекла помещают каплю отцентрифугированного осадка или частицы из свертков или сгустков. Накрывают их покровным стеклом и изучают под микроскопом вначале под малым, а затем под большим увеличением.
Окрашенные мазки готовят из нативных препаратов после их изучения. С этой целью с препаратов снимают покровное стекло, подсушивают мазки на воздухе, фиксируют и окрашивают по Романовскому в течение 3-5 минут, а затем исследуют под микроскопом с иммерсионной системой.
Определение физических и химических свойств ликвора и выпотных жидкостей
Физические свойства ликвора
Цвет.Нормальная цереброспинальная жидкость бесцветна. При ряде патологических состояний (эпидемический энцефалит, туберкулезный менингит, сухотка спинного мозга) она остается бесцветной. Определение слабой окраски ликвора производят путем сравнения ее с дистиллированной водой, налитой в пробирку такого же диаметра, как и пробирка с ликвором.
Сероватый, серо-зеленый, зеленоватый цвет цереброспинальной жидкости обусловлен большим содержанием в ней лейкоцитов наблюдается при менингитах различного происхождения, при абсцессах мозга. Красный цвет обусловлен примесью крови (эритрохромия) и может наблюдаться при свежих субарахноидальных кровоизлияниях, геморрагических инсультах (при наличии связи очага кровоизлияния с ликворными путями), травме мозга. Иногда появление красного цвета ликвора может быть вызвано случайной примесью крови при неудачно проведенной пункции. Чтобы решить вопрос о природе эритроцитов, можно использовать пробу с двумя или несколькими пробирками. Если примесь крови является результатом пункции, то 2-я и последующие порции ликвора, взятого в разные пробирки, не содержат эритроцитов или содержат их в значительно меньшем количестве по сравнению с 1-ой порцией. При субарахноидальном кровоизлиянии все порции ликвора содержат примерно одинаковое количество эритроцитов. Решить вопрос о происхождении крови в цереброспинальной жидкости помогают повторные пункции — в случаях кровоизлияний при последующих пункциях появляется ксантохромия. Желтый цвет (ксантохромия) может быть связан с присутствием продуктов превращения гемоглобина (билирубин, биливердин). Иногда ксантохромия может быть результатом случайной примеси эритроцитов при производстве пункции. Для решения этого вопроса жидкость центрифугируют. В случаях, когда ксантохромия была обусловлена примесью эритроцитов, после центрифугирования жидкость становится бесцветной, а эритроциты выпадают в осадок.
В клинической практике важно отличать застойную ксантохромию от геморрагической. Застойная возникает в результате замедления тока крови в сосудах мозга, когда в связи с нарушением проницаемости стенок сосудов окрашенная в желтый цвет плазма крови поступает в ликвор. Геморрагическая ксантохромия обусловливается попаданием в ликворные пути эритроцитов крови, гемоглобин которых, превращаясь в билирубин, и дает желтое окрашивание ликвора. Отличительной чертой является и то, что застойная ксантохромия, проявляющаяся обычно в результате блокирования субарахноидальных пространств, обычно бывает стабильна в своей интенсивности и сопровождается, как правило, выраженной протеинорахией, в то время как геморрагическая ксантохромия при отсутствии продолжающегося кровотечения исчезает через 10—14 суток после попадания крови в субарахноидальное пространство и не сопровождается столь резко выраженным увеличением содержания белка в ликворе. Застойная ксантохромия наиболее часто встречается при опухолях ЦНС, блокирующих ликворные пространства. Как физиологиче ский фактор ксантохромия встречается у недоношенных новорожденных. Это явление объясняется повышенной проницаемостью гематоэнцефалического барьера к билирубину. После 7 суток пигмент исчезает и жидкость становится бесцветной.
Прозрачность.Ликвор в норме прозрачный. Мутность определяют так же, как цвет ликвора, но обе пробирки, встряхнув, помещают на черном фоне. В зависимости от степени помутнения различают слабую, умеренную и большую мутность. Она может быть обусловлена присутствием большого количества клеточных элементов (лейкоцитов, эритроцитов) или большого количества микроорганизмов. Мутность, обусловленная форменными элементами крови, после центрифугирования исчезает, а связанная с наличием микроорганизмов — остается.
Опалесценцияликвора, появление которой связано в основном с большим содержанием грубодисперсных белков и фибриногена, может наблюдаться при туберкулезном менингите, сифилитическом менингите, тромбозе синусов головного мозга. При большом содержании фибриногена образуется пленка в виде желеобразного сгустка илликвор свертывается. Появление пленки фибрина в цереброспинальной жидкости отмечается при туберкулезном менингите, в ней иногда обнаруживают микобактерии туберкулеза. Быстрая коагуляция ликвора наблюдается при застойных явлениях в ликворных путях.
Запах.Нормальная цереброспинальная жидкость при большинстве патологических процессов не имеет запаха. При уремической коме ликвор приобретает запах аммиака, при диабетической — запах ацетона.
Относительная плотностьнормальной цереброспинальной жидкости, полученной при люмбальной пункции, равна 1,006— 1,008. Относительная плотность определяется с помощью ареометров малого размера. Повышение относительной плотности наблюдается при воспалении мозговых оболочек, травмах головного мозга. Снижение относительной плотности — при гиперпродукции ликвора (гидроцефалия). Среда ликвора в норме слабощелочная — рН = 7,35—7,4; при патологических состояниях существенно не изменяется, определяется с помощью универсальных индикаторных бумажек.
ХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ЛИКВОРА
Белки— важная составная часть цереброспинальной жидкости. Их количественное и качественное отклонение от нормы указывает на органическое поражение ЦНС. Имеется значительное расхождение в содержании белка на различном уровне ликворной системы. Люмбальный ликвор содержит до 0,22—0,33 г/л; ликвор желудочков мозга — 0,12—0,2 г/л; большой цистерны — 0,1—0,22 г/л; его уровень у новорожденных более высок — 0,6— 0,9 г/л, что связано с недостаточным развитием гематоэнцефалического барьера. При опухолях, воспалении мозговых оболочек, травмах, изменениях гемодинамики в головном и спинном мозгу, нарушениях проницаемости стенок капилляров содержание белка увеличивается (протеинорахия). Наиболее характерно увеличение количества белка для экстрамедулярно расположенных опухолей спинного мозга. Количество белка при них может быть так велико, что цереброспинальная жидкость сразу же после пункции выделяет желеобразный сгусток фибрина. Цитоз при этом может оставаться в норме или слегка повышаться, тогда говорят о белково-клеточной диссоциации (синдром Нонне — Фроан). Увеличение содержания белка в ликворе при опухолях объясняется венозным застоем в сочетании с нарушением циркуляции жидкости. Кроме того, в ликвор поступают продукты белкового обмена самой опухоли и продукты белкового распада из очагов кровоизлияний в ткани опухоли.
Увеличение содержания белка в ликворе наблюдается при травмах ЦНС, поражении гематоэнцефалического барьера после операций на центральной нервной системе. Высота протеинорахии зависит от остроты воспалительного процесса и степени вовлечения в него мозговых оболочек. Значительное повышение уровня белка в ликворе характерно для менингококковых и гнойных менингитов, субарахноидальных кровоизлияний различной этиологии (аневризма, инсульт), различных поражениях нервной ткани головного и спинного мозга (энцефалиты, полиомиелиты, сифилис ЦНС, переломы позвоночника со смещением в сочетании с блоком спинно-мозгового канала).
Большое клиническое значение имеет установление соотношения белковых фракций. В норме показатель отношения содержания глобулинов к уровню альбумина колеблется в пределах 0,2-0,3.
Физические свойства выпотных жидкостей
Относительная плотность (определяется урометром)
Транссудат 1,006—1,012, не более 1,015
Экссудат 1,018—1,022 (более 1,015).
Содержание белка в выпотных жидкостях
Метод определения: по помутнению с сульфосалициловой кислотой, предварительно развести в 100 раз NaCl (в связи с высоким содержанием белка). Расчет по калибровочному графику с учетом степени разведения.
Транссудат не более 3% (5—25 г/л)
Экссудат более 3% (более 30 г/л).
Дифференцировать только по белку нельзя ~ 10% ошибок.
Проведение пробы Ривальта для дифференциации выпотной жидкости
Проба Ривальта. Это проба на серомуцин — мукополисахаридный комплекс. «+» - экссудат, «-» - транссудат.
Постановка пробы: узкий цилиндр емкостью 200 мл, наполняется водой, подкисленной 2—3 каплями уксусной кислоты, перемешивается. Из пипетки в этот раствор опускают 1—2 капли исследуемой жидкости. В экссудате на темном фоне наблюдается появление помутнения в виде папиросного дыма. В транссудате помутнение не образуется. В жидкостях смешанного характера не всегда эффективна – необходима микроскопия.
Исследование цитоза в камере Горяева или Фукса-Розенталя
Принцип. Подсчитывают количество лейкоцитов в счетной камере Фукса-Розенталя после разрушения эритроцитов.
Реактив: 10% раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиловым фиолетовым (ледяная уксусная кислота 5мл, вода до 50мл + метиловый фиолетовый 0,1мл).
Специальное оборудование: микроскоп, камера Фукса-Розенталя, смесители для подсчета лейкоцитов (меланжеры).
Ход исследования. В меланжер (смеситель) для лейкоцитов набирают раствор уксусной кислоты до метки «I», затем до метки «II» набирают ЦСЖ. Раствор уксусной кислоты разрушает эритроциты, а метиловый фиолетовый подкрашивает лейкоциты в синий цвет, что облегчает их подсчет. Встряхивают меланжер, перемешивая содержимое. Предварительно выпустив первую каплю, заполняют содержимым меланжера счетную камеру Фукса-Розенталя и считают лейкоциты по всей сетке (в 256 квадратах) при малом увеличении микроскопа (окуляр 15 Х, объектив 8Х).
Расчет количества лейкоцитов в 1мкл ведется по формуле:
Х = , где А – количество подсчитанных лейкоцитов в камере Фукса-Розенталя.
Примечание. При отсутствии смесителя допускается смешивание ликвора с реактивом на часовом стекле: 10 капель ликвора и 1 капля реактива. После тщательного перемешивания полученной смесью заполняют камеру.
, где А – количество подсчитанных лейкоцитов в камере Фукса-Розенталя.
Примечание. При отсутствии смесителя допускается смешивание ликвора с реактивом на часовом стекле: 10 капель ликвора и 1 капля реактива. После тщательного перемешивания полученной смесью заполняют камеру.