Хелпикс

Главная

Контакты

Случайная статья





3.2. ПРОФИЛАКТИКА ПАРАЗИТАРНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ 1 страница



 

\ql  
" Паразитологическая диагностика малярии. Методические указания. МУК 3. 2. 987-00" (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 19. 10. 2000)  
Документ предоставлен КонсультантПлюс www. consultant. ru Дата сохранения: 15. 09. 2014  

 

Утверждаю

Главный государственный

санитарный врач

Российской Федерации,

Первый заместитель

Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г. Г. ОНИЩЕНКО

19 октября 2000 года

 

Дата введения -

1 января 2001 года

 

3. 2. ПРОФИЛАКТИКА ПАРАЗИТАРНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА МАЛЯРИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

МУК 3. 2. 987-00

 

1. Методические указания подготовлены сотрудниками Института медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е. И. Марциновского Московской медицинской академии им. И. М. Сеченова Минздрава России и Федерального центра государственного санитарно - эпидемиологического надзора Минздрава России.

2. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 19 октября 2000 г.

3. Введены впервые.

 

1. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ И НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ

 

Паразитологическую лабораторную диагностику малярии проводят клинико - диагностические лаборатории лечебно - профилактических учреждений (ЛПУ) системы Минздрава, ведомственных учреждений, а также другие лаборатории, независимо от принадлежности и форм собственности (НИИ, вузов, Минобороны, УВД, частных клиник и т. д. ), имеющие лицензию и аккредитованные в системе госстандарта и госсанэпиднадзора в установленном порядке.

Органы и учреждения государственной санитарно - эпидемиологической службы Российской Федерации организуют и проводят эпидемиологический надзор за малярией, частью которого является:

- контроль за уровнем лабораторной диагностики малярии в клинико - диагностических лабораториях лечебно - профилактических учреждений и других ведомств (в т. ч. исследования: 1) контрольные - не менее 10% препаратов крови от числа отрицательных; 2) обязательные - 100% сомнительных и положительных препаратов крови с целью подтверждения лабораторного диагноза малярии);

- обследование населения в очагах малярии, обследование населения по эпидпоказаниям и с консультативной целью.

В настоящих Методических указаниях использованы ссылки на следующие нормативно - методические и правовые документы:

- Федеральный закон " О санитарно - эпидемиологическом благополучии населения" (30 марта 1999 г. N 52-ФЗ);

- " Основы законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан" (22 июля 1993 г. N 5487-1);

- санитарные правила и нормы 3. 2. 569-96 " Профилактика паразитарных болезней на территории Российской Федерации";

- санитарные правила 3. 1/3. 2. 558-96 " Общие требования по профилактике инфекционных и паразитарных заболеваний";

- санитарные правила 1. 2. 731-99 " Безопасность работы с микроорганизмами 3 - 4 групп патогенности и гельминтами".

 

2. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

 

Возможность завоза малярии на территорию Российской Федерации, появление вторичных от завозных и местных случаев заболевания требуют своевременной лабораторной диагностики, необходимой для адекватного лечения и рационального проведения противоэпидемических мероприятий.

Малярию человека вызывают 4 вида паразитических простейших рода Plasmodium: P. falciparum - возбудитель тропической малярии, P. vivax - трехдневной малярии, P. ovale - малярии типа трехдневной, P. malariae - четырехдневной малярии. Неспецифические клинические проявления малярии, преимущественно в первые дни болезни, при наличии ряда объективных показателей эпидемиологического характера: географический анамнез (пребывание на территории стран с тропическим и субтропическим климатом), и клинического характера: лихорадочное состояние неясной этиологии, анемия, увеличение селезенки и ряд других - обязывают врачей лечебно - профилактических учреждений заподозрить малярию.

Безусловным подтверждением диагноза служит обнаружение малярийного паразита при микроскопическом исследовании крови. Особое значение имеет раннее выявление возбудителя тропической малярии, при несвоевременной диагностике которой возможен летальный исход. Определение вида паразита служит основанием для выбора рациональной терапии и правильной организации противоэпидемических мероприятий.

 

3. ХАРАКТЕРИСТИКА РАЗВИТИЯ МАЛЯРИЙНОГО ПАРАЗИТА

В ЭРИТРОЦИТАХ

 

Проявления малярии обусловлены развитием паразита в эритроците - так называемой эритроцитарной шизогонией. В процессе эритроцитарной шизогонии образуются бесполые и половые формы паразита.

Бесполые формы за период времени, характерный для каждого вида паразита, проходят в эритроцитах ряд последовательных возрастных стадий своего развития, строение которых (морфология) и их окрашиваемость (тинкториальные свойства) хорошо различимы в " тонком мазке" крови. Трофозоиты - одноядерные растущие стадии: кольцевидные, развивающиеся (амебовидные, полувзрослые) и зрелые. Шизонты - делящиеся стадии: развивающиеся (незрелые), с последовательным делением ядер и общей цитоплазмой и зрелые, представляющие скопление дочерних клеток мерозоитов с обособленными ядрами и цитоплазмой. В динамике эритроцитарная шизогония в общем виде протекает следующим образом: мерозоит, внедрившийся в эритроцит, быстро увеличивается в размере, в цитоплазме появляется пищеварительная вакуоль и образуется кольцевидный трофозоит. На этой стадии цитоплазма имеет вид узкого ободка, огибающего пищеварительную вакуоль, ядро сравнительно мелкое, компактное с трудно различимой структурой хроматина оттеснено к одному из полюсов клетки. По мере роста паразита увеличиваются его размеры, количество цитоплазмы нарастает: ядро становится более крупным, менее компактным. В цитоплазме могут появиться асимметричные утолщения, различающиеся по форме и числу, псевдоподии - образуется амебовидный трофозоит. В дальнейшем у развивающегося трофозоита постепенно исчезает вакуоль, продолжает увеличиваться ядро и количество цитоплазмы - образуется зрелый трофозоит. Зрелый трофозоит - округлая или несколько вытянутая клетка с относительно рыхлым ядром, правильной или несколько вытянутой формы, занимающая весь или часть пораженного эритроцита. Затем наступает стадия шизонта, начинается попарное деление ядер, образуется развивающийся (незрелый) шизонт. По окончании деления ядер одномоментно делится цитоплазма, обособляясь вокруг каждого из дочерних ядер, - образуется зрелый шизонт, состоящий из мерозоитов; их число, размеры и расположение по отношению к скоплению пигмента характерны для каждого вида плазмодиев (см. таблицы). При отсутствии или неэффективном лечении мерозоиты внедряются в интактные эритроциты, и цикл вновь повторяется с присущей для каждого вида плазмодиев продолжительностью развития одной генерации. У P. falciparum, P. vivax, P. ovale - 48 ч, P. malariae - 72 ч.

В процессе роста паразита в его цитоплазме появляется малярийный пигмент - продукт метаболизма гемоглобина, представляющий собой включения от едва заметных мелких зерен и гранул до относительно более крупных, неправильной формы, от золотисто - коричневого до черного цвета. Количество пигмента, размеры его частиц и распределение в цитоплазме паразита меняются по мере его перехода в последовательные стадии развития.

У части трофозоитов деления ядер не происходит, и они дифференцируются в половые формы - гаметоциты - женские (макрогаметоциты) и мужские (микрогаметоциты). Мужские и женские гаметоциты различаются между собой по морфологии, в первую очередь по структуре ядра, характеру и окраске цитоплазмы. В отличие от бесполых форм гаметоциты не имеют выраженной вакуоли, характеризуются значительно более обильным и грубым пигментом. Округлая форма присуща гаметоцитам P. vivax, P. ovale и P. malariae, удлиненная серповидная (полулуния) - P. falciparum. Гаметоцитов образуется меньше, чем бесполых форм. При этом женских гаметоцитов в 3 - 5 раз больше, чем мужских, что затрудняет выявление последних. Гаметоциты P. vivax, P. ovale, P. malariae значительно отличаются от гаметоцитов P. falciparum по срокам созревания, появления в периферической крови и сохранения способности заражать переносчика (самок комара P. anopheles).

P. vivax, P. ovale и P. malariae развиваются в эритроцитах, циркулирующих в периферической крови. Развитие P. falciparum происходит в синусах селезенки и мелких капиллярах внутренних органов в связи с адгезией пораженных эритроцитов к стенкам таких капилляров. В периферической крови обнаруживаются, преимущественно при неосложненном течении, только самые молодые стадии - кольцевидные трофозоиты. Их число очень быстро нарастает, поэтому при однократном исследовании периферической крови в начале болезни можно получить неправильное представление об истинном числе паразитов. При осложненном течении в периферической крови могут быть обнаружены более зрелые возрастные стадии паразита и гаметоциты в связи с нарушением сосудистого тонуса.

При оценке результатов исследования препаратов крови, наряду с типичной морфологией возбудителя, необходимо учитывать ряд особенностей, характеризующих паразитологическое развитие инфекции собственно и привходящих воздействий (предшествовавшее применение противомалярийных препаратов, неправильное приготовление и окраска препаратов крови).

 

4. ПРИНЦИП МЕТОДА ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКОЙ

ДИАГНОСТИКИ МАЛЯРИИ

 

Паразитологическая диагностика малярии основана на обнаружении бесполых и половых форм возбудителя при микроскопическом исследовании крови, что возможно только в период его развития в эритроците. Для обнаружения плазмодиев и определения их вида используют препараты крови, приготовленные методом " тонкого мазка" и " толстой капли", окрашенные по Романовскому - Гимза. Оба метода, имеющие свои преимущества и недостатки, являются взаимодополняющими.

Основной метод - " толстая капля". Благодаря распределению относительно большего объема крови на меньшей площади, за один и тот же промежуток времени просматривается количество крови в 30 - 40 раз больше, чем в " тонком мазке", что значительно повышает шанс обнаружения паразитов, особенно при низкой паразитемии. Начинать надо всегда с просмотра " толстой капли".

Чувствительность метода " толстой капли" такова, что при просмотре 100 - 150 полей зрения можно обнаружить около 8 паразитов в 1 мкл крови. Концентрация исследуемой крови на ограниченной площади приводит к многослойному расположению эритроцитов. Для того чтобы паразиты были видимы, " толстую каплю" окрашивают нефиксированной; это приводит к гемолизу эритроцитов, и паразиты подвергаются деформации. Несмотря на определенную специфичность, такая деформация иногда может препятствовать идентификации вида паразита. Ограничиться просмотром " толстой капли" можно, только если вид паразита был первоначально установлен. " Толстая капля" относительно быстро позволяет выявить и других паразитов крови: трипаносом, микрофилярий, спирохет, бабезий и др. Отрицательный паразитологический результат изучения " толстой капли", но повышенное содержание остатков незрелых эритроцитов, позволяет предположить перенесенную недавно малярию (при отсутствии соответствующих анамнестических данных), обнаружение повышенного содержания лейкоцитов, их видовой состав, а также повышенное содержание остатков незрелых эритроцитов позволяют предположить иное заболевание, не связанное с малярией.

В " тонком мазке", фиксированном до окраски, сохраняются морфологические особенности как пораженного эритроцита, так и присущие данному виду паразита. Большое значение для дифференциального диагноза имеет характер изменения пораженных эритроцитов. " Тонкий мазок" крови делают в дополнение к " толстой капле". В тех случаях, когда вид возбудителя в очаге установлен, для эпиднадзора за очагом можно ограничиться методом " толстой капли".

 

5. НЕОБХОДИМЫЕ РЕАКТИВЫ И ОБОРУДОВАНИЕ

 

1. Этиловый спирт 96°.

2. Азур - эозин по Романовскому - Гимза (промышленный маточный раствор или сухая краска).

3. Метиленовый синий.

4. Этиловый эфир.

5. Глицерин.

6. Тетраборат натрия (бура).

7. Калий фосфат однозамещенный безводный - KH2PO4.

8. Натрий фосфат двузамещенный безводный - Na2HPO4.

9. Смесь Никифорова (смесь этилового спирта и эфира в равных частях).

10. Дистиллированная вода.

11. Индикаторная бумага (диапазон pH 5, 0 - 8, 0).

12. Фильтровальная бумага.

13. Химическая посуда: мерные цилиндры или стаканы на 10, 50 и 100 мл; градуированные центрифужные пробирки; колбы и стаканы; стеклянные палочки.

14. Предметные стекла.

15. Шлифованные стекла.

16. Фарфоровая ступка с пестиком.

17. Аптечные равноплечие или электронные весы.

18. Эмалированные кюветы.

19. Пинцеты.

20. Часы песочные или сигнальные.

21. Стеклянные мостики или специальные контейнеры для окрашивания препаратов крови.

22. Скарификаторы стерильные одноразовые.

23. Бинты стерильные, вата.

24. Перчатки резиновые.

25. Микроскоп с осветителем (объективом x90 или x100, окуляром x7; x10).

26. Термостат.

27. Холодильник.

 

6. ТЕХНИКА ПАРАЗИТОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ

 

6. 1. Подготовка предметных стекол

 

1. Предметные стекла новые замачивают в мыльном растворе, нагревают до 60 - 80 °C, но не кипятят.

2. Каждое предметное стекло протирают ветошью с обеих сторон в этом растворе.

3. Промывают в проточной воде в течение 2 - 3 ч, периодически перемешивая.

4. Погружают в дистиллированную воду на 30 мин.

5. Проверяется качество отмывки предметных стекол от щелочи: на предметное стекло наносят 1 каплю фенолфталеина - появление розовой окраски раствора свидетельствует о недостаточной отмывке от щелочи.

6. Стекла протирают чистой хлопчатобумажной тканью и помещают для обезжиривания в смесь Никифорова (из расчета 1 мл смеси на 1 стекло), где они могут храниться в течение длительного времени.

7. Извлеченные пинцетом из смеси Никифорова стекла протирают хлопчатобумажной стиранной материей, заворачивают в чистую гладкую не ворсистую (! ) бумагу небольшими партиями и стерилизуют.

Стекла, многократно бывшие в употреблении, для приготовления препаратов крови использовать не рекомендуется. При необходимости их использования следует удалить следы иммерсионного масла простиранной ветошью, затем отмыть каждое стекло от окрашенных препаратов крови в теплом мыльном растворе (для этой цели удобно использовать зубную щетку с коротко срезанной щетиной). Дальнейшая обработка - такая же, как и новых стекол.

 

┌ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ┐

│ Во время манипуляций с чистыми предметными стеклами их│

│ следует брать только за боковые поверхности или пинцетом.   │

└ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ┘

 

6. 2. Приготовление и хранение реактивов

 

6. 2. 1. Раствор краски Романовского - Гимза

Маточный раствор краски Романовского - Гимза (промышленный или приготовленный из сухой субстанции) представляет собой густую темно - фиолетовую жидкость, которую можно хранить длительное время в хорошо закупоренных бутылях из темного стекла в сухом защищенном от света прохладном месте (но не в холодильнике). Для текущей работы перед приготовлением рабочего раствора краски Романовского - Гимза необходимое количество маточного раствора краски отливают в небольшой флакон, обязательно фильтруя, т. к. при хранении маточного раствора может выпасть осадок. Краску следует набирать сухой пипеткой или отливать через горлышко. Для определения качества краски рабочим раствором каждой новой серии производят пробное окрашивание мазков крови.

Для приготовления маточного раствора из сухой краски Романовского - Гимза необходимы следующие реактивы:

- азур - эозин - 10 г;

- глицерин - 100 мл;

- спирт этиловый 96° - 900 мл.

Техника приготовления краски предусматривает следующие этапы:

1. Азур - эозин тщательно растирают в фарфоровой ступке с небольшим количеством спирта и глицерина до получения кашицеобразной массы и сливают в колбу или бутыль из темного стекла. Затем постепенно добавляют остальной спирт и глицерин.

2. Полученную взвесь тщательно встряхивают в течение 10 мин. 2 - 3 раза.

3. Емкость с краской помещают в термостат при температуре 37° на 3 - 5 дней для созревания краски с ежедневным встряхиванием этой емкости вручную не менее 10 мин. При наличии магнитной мешалки встряхивание можно продолжать несколько часов. При наличии подогревателя в мешалке взвесь можно подогревать, при этом подогрев не должен превышать 40 - 50°, периодически подогреватель следует выключать с тем, чтобы температура не повышалась выше указанного уровня. Встряхивание и подогрев улучшают качество краски.

После каждого встряхивания раствор снова помещают в термостат.

4. Через 3 - 5 дней готовый раствор краски фильтруют через бумажный фильтр.

6. 2. 2. Буферный раствор

Необходимые реактивы:

1. Дистиллированная вода - 1 л.

2. Фосфат калия однозамещенный безводный - KH2PO4 - 0, 27 г.

3. Фосфат натрия двузамещенный безводный - Na2HPO4 - 0, 67 г.

Техника приготовления:

1. Соли растворить в дистиллированной воде (1/3 объема) комнатной температуры, после полного растворения довести до метки 1000 мл и размешать.

2. Приготовленный раствор должен иметь pH 7, 0 +/- 0, 2. Точное соблюдение требуемой реакции буфера важно для правильной окраски. Если pH < 6, 8, то следует добавить Na2HPO4, если pH > 7, 2, то добавляется KH2PO4. Количество реактивов, необходимых для доведения pH, подбирается опытным путем.

Буферный раствор следует хранить в хорошо закупоренной посуде в холодильнике (до 1 месяца). Для приготовления краски используется буферный раствор комнатной температуры. Нельзя использовать буферный раствор с осадком, который после окраски затрудняет просмотр препарата и даже может привести к диагностическим ошибкам. Периодически следует проверять pH буферного раствора, особенно при искажении цвета окрашенных элементов крови.

 

6. 3. Взятие проб крови для исследования на малярию

 

1. Кровь для паразитологического исследования берут из пальца руки (у взрослых - обычно безымянного, у детей - из большого), у новорожденных детей - из большого пальца ноги (но не мочки уха).

2. Периферическую кровь для исследования берут вне зависимости от температуры тела и клинических проявлений.

3. Для прокола кожи пальца используют стерильные одноразовые скарификаторы или специальные стерильные разового использования иглы.

4. В целях безопасности пациента взятие крови на малярию производят на стерильные предметные стекла, т. к. во время взятия крови возможно их касание к месту прокола.

5. Перед проколом кожу пальца тщательно протирают ватным тампоном, смоченным в 70-процентном спирте, чем достигается не только предупреждение инфицирования места прокола, но и попадание с кожи пальца бактерий, различных посторонних частиц на препарат крови, которые могут затруднить диагностику при микроскопии.

6. Первую каплю крови, выступившую после прокола, вытирают сухим стерильным ватным тампоном, чтобы избежать фиксации эритроцитов остатками спирта, которым дезинфицировали кожу.

7. Последующие капли (выступающие самостоятельно или при надавливании на палец массирующими движениями) используются для приготовления препаратов крови. При этом кровь забирают в стерильный сухой гематологический капилляр, из которого быстро переносят на предметное стекло, либо выступившую кровь непосредственно из прокола пальца наносят на предметные стекла. Если кровь набирают в капилляр, то можно использовать не стерильные стекла, но подготовленные так же, как описано в п. 6. 1.

8. От одного пациента готовят не менее 2 - 3 стекол с " толстыми каплями" и 2 - 3 " тонких мазка" крови. Рекомендуется первоначально окрасить по одному стеклу, с тем чтобы иметь возможность исправить дефекты окраски.

 

┌ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ┐

│ При косвенных     показаниях      (анамнестических, │

│ эпидемиологических, клинических) о наличии малярии у│

│ обследуемого, но отрицательном первичном результате, кровь│

│ исследуют повторно через каждые 6 - 12 часов в течение 2-х│

│ суток.                                                      │

└ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ┘

 

6. 4. Приготовление препаратов крови,

их маркировка и фиксация

 

6. 4. 1. Препарат " толстая капля"

1. Препарат " толстая капля" на предметном стекле без мазка (рис. 1) < *>:

- на предметное стекло наносят каплю крови диаметром около 5 мм, кровь распределяют в равномерный диск или прямоугольник размером 1 - 1, 5 см;

- на краю стекла делается мазок в виде полоски крови для маркировки препарата, при массовых обследованиях делаются две полоски, где наносят маркировку.

--------------------------------

< *> Здесь и далее рисунки не приводятся.

 

2. Препарат " толстая капля" на мазке (рис. 2):

- на предметном стекле готовят мазок крови более толстый, чем требуемый для исследования на малярию;

- сразу после приготовления мазка, пока мазок не высох, его влажной поверхностью прикасаются к выступившей капле крови или наносят кровь из капилляра;

- кровь на влажном мазке распределится в равномерный диск при осторожных наклонах предметного стекла под небольшим углом в разные стороны; чем больше взятая капля крови, тем больше площадь, по которой она распределится.

Капля крови, нанесенная на мазок, более прочно прикрепляется, чем нанесенная непосредственно на предметное стекло. Толщина " толстой капли" должна быть такой, чтобы через нее просматривался печатный текст. Слишком толстая капля может оторваться от стекла при высушивании; такой препарат не пригоден для исследования.

Независимо от методики приготовления показателем достаточного содержания крови в " толстой капле" является обнаружение в 1 поле зрения микроскопа в среднем 10 - 15 лейкоцитов (увеличение: объектив x90 - 100, окуляр x7).

3. Комбинированные препараты (рис. 3).

В целях экономии стекол, особенно при массовых обследованиях, на предметном стекле одновременно готовят " тонкий мазок" и " толстую каплю".

Этот метод, однако, требует ряда предосторожностей. Для того чтобы оба препарата были пригодны для исследования, необходима четкая последовательность их обработки. Необходимо начинать с окраски " толстой капли" погружением соответствующего участка предметного стекла в раствор краски. Затем фиксируют " тонкий мазок" и окрашивают его. Нельзя начинать с фиксации " тонкого мазка", т. к. даже при очень аккуратном погружении в фиксирующую жидкость участка предметного стекла, на который нанесен " тонкий мазок", в " толстой капле" эритроциты могут подвергнуться фиксации парами фиксатора. При последующей окраске такая капля станет непригодной для исследования, даже если фиксация была неполной.

Все препараты высушивают на воздухе. Для ускорения высыхания " толстых капель" можно использовать обычный комнатный вентилятор.

 

┌ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ┐

│ Высушивание на солнце, огне или любом другом источнике тепла│

│ исключается, так как препарат становится непригодным для│

│ исследования.                                               │

└ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ─ ┘

 

Особенно это относится к " толстой капле", которая под действием тепла подвергается аутофиксации и необходимый гемолиз при окраске не наступает. " Толстые капли" (особенно в процессе высыхания) и фиксированные " тонкие мазки" следует беречь от тараканов, мух и муравьев, съедающих кровь.

6. 4. 2. Препарат " тонкий мазок" (рис. 4)

1. На край предметного стекла, отступив 0, 5 - 1 см, наносят небольшую каплю крови (объемом меньше в 5 - 10 раз, чем для препарата " толстая капля" ).

2. Предметное стекло с нанесенной каплей кладут на горизонтальную поверхность стола, при этом край стекла с каплей крови должен быть справа < *>.

3. Двумя пальцами левой < *> руки предметное стекло за боковые поверхности фиксируется на столе.

4. Край шлифованного стекла (фиксированного в правой < *> руке) ставится под углом 45° к предметному стеклу, прикасаясь к левому < *> краю капли крови.

5. После того как капля растекается по касательной линии в месте соприкосновения обоих стекол, шлифованное стекло быстрым движением продвигают справа налево < *> к противоположному краю предметного стекла, постепенно ослабляя давление на предметное стекло, что позволяет закончить " тонкий мазок" бахромчатой частью, где наиболее четко видны специфические особенности морфологии паразитов и изменения пораженных эритроцитов. Мазок крови должен быть тонким, равномерным, не доходить до конца и краев предметного стекла, заканчиваться бахромчатым краем (рис. 4).

--------------------------------

< *> Для лаборанта - левши читать вместо левого положения - правое, вместо правого - левое.

 

Если угол наклона шлифованного стекла увеличить, то мазок получится короткий и толстый, с расположением эритроцитов в несколько слоев (это маскирует некоторых паразитов, а также приводит к их деформации); если уменьшить угол наклона, то трудно создать бахромчатую часть мазка. Качество " тонкого мазка" зависит также от правильной подготовки предметного стекла и равномерности края шлифованного стекла.

На плохо вымытом жирном стекле и при дефектах на краю шлифованного стекла " тонкий мазок" получается неравномерным и с просветами. Возможные дефекты тонких мазков показаны на рис. 5.

6. 4. 3. Маркировка препаратов крови

1. Высохшие препараты крови маркируют простым карандашом (он не смывается во время фиксации и окрашивания).

2. Маркировка включает фамилию и инициалы, или номер истории болезни (можно номер страхового полиса), или порядковый номер по списку обследуемого и, обязательно, дату взятия крови.



  

© helpiks.su При использовании или копировании материалов прямая ссылка на сайт обязательна.