ПРОФИЛАКТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ 2 страница

- составление календарного плана эпизоотологического обследования выявленных очагов туляремии.

Получение этих сведений достигают путем систематического планового обследования территории в минимально необходимом для этого объеме работ.

Эпизоотологическое обследование предусматривает: сбор полевого материала, его лабораторное исследование и последующий анализ полученных данных.

Полевой раздел работ включает:

- изучение природных особенностей территории (рельеф, климат, почвы и т.п.);

- изучение видового состава, биотопического распределения и численности млекопитающих - носителей инфекции и членистоногих - переносчиков; отлов животных и сбор эктопаразитов;

- поиск трупов и следов жизнедеятельности мелких млекопитающих (ММ), объектов окружающей среды;

- доставку этого материала в лабораторию и подготовку его к исследованию;

- изучение особенностей образа жизни животных, которые определяют развитие эпизоотического процесса и условия заражения людей.

Сбор материала для лабораторного исследования обычно сочетают с изучением видового состава и проведением учетов численности ММ и членистоногих - переносчиков.

При эпизоотологическом обследовании используют общепринятые зоолого-паразитологические методы и специальные, направленные на поиск туляремийных эпизоотий. Поиски туляремийных эпизоотий в первую очередь производят в тех районах, где в прошлом имели место случаи заболевания людей, были выделены культуры возбудителя или обнаружен антиген в объектах окружающей среды. Каждый район обследуют 1 раз в 1 - 2 года (в зависимости от активности очага). Имеющиеся стационары или пункты многолетних наблюдений обследуют ежегодно - весной и осенью. По эпидемиологическим показаниям проводят экстренные эпизоотологические обследования. Во всех случаях при обнаружении эпизоотии туляремии выясняют границы ее распространения. Границы эпизоотий определяют следующим способом. По результатам лабораторного исследования материала, собранного на энзоотичной по туляремии территории, картируют все "точки" с положительным результатом и все крайние "точки" соединяют (оконтуривают). На оконтуренной территории отмечают участки с положительными пробами, определяют тип очага, процент зараженных проб, показатели численности носителей и переносчиков, процент зараженных биотопов.

Таким образом, устанавливают пространственно - биоценотическую структуру очага, степень распространения эпизоотии, ее интенсивность и экстенсивность.

При обследовании больших территорий и получении сведений о состоянии очагов туляремии в сжатые сроки используют маятниковый метод обследования. Сущность метода заключается в том, что выезды групп эпизоотологического обследования осуществляют каждый раз в удаленные от предыдущего места обследования районы. В итоге оперативно охватывают обследованием наибольшую площадь энзоотичной по туляремии территории.

4.3. Организация эпизоотологического обследования

Возникновение заболеваний среди людей определяется эпизоотическим состоянием очагов. Разлитые эпизоотии туляремии происходят в годы высокой численности мелких млекопитающих. Повышение численности ММ является важной характеристикой состояния очага и признаком возможного эпидемического неблагополучия. Наблюдения за численностью ММ - одна из основных составляющих эпизоотологического обследования, которое осуществляют на основе различных методов количественного учета ММ. При этом основное внимание уделяют обследованию скирд, ометов, строений, расположенных в окружении природных биотопов, а также зарослей кустарников, опушек широколиственных лесов, облесенных балок и оврагов, участков рудеральной растительности, агроценозов с зерновыми культурами, лесополос, околоводных биотопов, колоний грызунов, заброшенных и временно используемых человеком строений, других мест повышенного риска заражения людей туляремией (зон рекреации, мест заготовок сельскохозяйственной продукции, лесозаготовок и т.п.).

В поисках туляремийных эпизоотий лабораторному исследованию подвергают отловленных разными методами диких ММ или их трупы, собранные в природе, подснежные гнезда грызунов, продукты жизнедеятельности ММ, погадки птиц (ПП), помет хищных млекопитающих (ПХМ), а также солому, мякину, талую воду и другие объекты, загрязненные выделениями грызунов, воду из естественных водоемов и колодцев, гидробионтов и др. Среди членистоногих - переносчиков основное внимание уделяют иксодовым клещам. Кроме того, исследуют мелких эктопаразитов, собранных с ММ (вшей, гамазовых и краснотелковых клещей, блох). При трансмиссивных вспышках исследуют кровососущих двукрылых (комаров, слепней и др.). Серологические исследования домашних животных производят при соответствующих эпизоотологических и эпидемиологических показаниях.

Всех млекопитающих по отношению к туляремийной инфекции и их роли в эпизоотическом процессе разделяют на 3 группы.

Первая группа. Высоковосприимчивые и высокочувствительные млекопитающие (заражаются при попадании в организм единичных туляремийных бактерий, остро болеют и быстро погибают с интенсивным обсеменением органов и тканей возбудителем). К этой группе относятся все виды мелких мышевидных грызунов, кроме полевой мыши, зайцеобразные и насекомоядные, за исключением ежей, куторы, выхухоли.

Вторая группа. Высоковосприимчивые, но малочувствительные млекопитающие (заражаются при попадании в организм единичных бактерий, болеют тяжело, но быстро освобождаются от возбудителя, приобретая устойчивый иммунитет). К этой группе относятся полевая мышь, все виды крыс и сусликов, белки, бурундуки, бобры, ежи, выхухоль, кутора, белозубка и некоторые другие виды млекопитающих.

Третья группа. Маловосприимчивые и практически нечувствительные млекопитающие. К ним относятся большинство хищных млекопитающих и сельскохозяйственных животных.

Наибольшее эпидемиологическое и эпизоотологическое значение имеют животные 1-й группы, поэтому тактика эпизоотологического обследования строится с учетом того, к какой группе относятся обитающие в очаге животные.

При поисках эпизоотий туляремии в первую очередь исследуют отловленных и трупы животных 1-й группы. Основным методом при этом является бактериологический. Во вторую очередь исследуют животных 2-й группы, а затем животных 3-й группы, которых исследуют бактериологическими и серологическими методами. У животных 1-й группы в небольшом проценте случаев может иметь место хроническая форма туляремии с формированием специфических антител, поэтому целесообразны поиски антител и у зверьков 1-й группы. Наличие антител указывает на контакт зверьков с возбудителем.

Во время зимних лыжных маршрутов под одиноко стоящими деревьями и кустами, на ометах соломы, под столбами и другими возвышениями на снегу можно обнаружить обрывки шкурок ММ, которые хищные птицы сдирают, прежде чем съесть зверька. Иногда на снегу около обрывков шкурок имеются замороженные капли крови. Обрывки шкурок и капли замороженной крови собирают в пробирки и исследуют с помощью биологической пробы. Во время зимнего тропления следов лисы собирают экскременты, обрывки шкурок, остатки трупов ММ и гнездового материала, раскопанных лисой нор ММ. Собранный таким образом материал исследуют путем биологической пробы, методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) и серологическими методами.

Для рекогносцировочного обследования значительных территорий применяют серологическое исследование ПП и ПХМ на содержание туляремийного антигена. Преимущества метода заключаются в малой трудоемкости процесса сбора и быстроте исследования полевого материала, в возможности за короткий срок обследовать значительные территории открытых ландшафтов и быстро получить ответ о наличии или отсутствии инфекции. Метод применим для раннего и ретроспективного выявления эпизоотии, определения ее границ, установления видов животных, вовлеченных в эпизоотический процесс, и оценки их численности. Поедая в природе преимущественно ослабленных, больных зверьков или их трупы, хищники осуществляют выбор из популяции именно того материала, который желателен для лабораторного исследования.

Погадка представляет собой плотный, продолговатый комок непереваренных птицей частей пищи (шерсть, кости, перья, хитин насекомых и т.п.), выбрасываемый ею через рот по окончании процесса предварительного пищеварения. Образование погадок отмечается у всех хищных птиц, чаек, вороновых и некоторых других. Костные остатки млекопитающих в погадках хорошо сохраняются, что позволяет установить видовую принадлежность съеденных зверьков. Птицы выбрасывают погадки во время отдыха через 10 - 20 ч. после кормежки. Погадка может содержать остатки одного зверька у мелких птиц и нескольких - у крупных хищников. Установлено, что птицы избавляются от погадок недалеко от мест кормежки и можно считать, что исследование содержимого погадок характеризует именно ту территорию, на которой они собраны (в пределах 2 - 3 км от точек сбора).

Помет хищных млекопитающих (семейства куньих, собачьих) также состоит из непереваренных частей пищи, видовой состав которой в полевых условиях определить трудно, т.к. они были разжеваны и прошли пищеварительный тракт хищника. Участок охоты хищных млекопитающих, как правило, постоянен и занимает территорию в несколько квадратных километров.

Длительность сохранения погадок и помета в природе зависит от климатических условий местности. В зоне достаточного увлажнения разрушение их происходит в течение 4 - 5 месяцев под воздействием гнилостных процессов, почвенных видов микро- и мезофауны и различных насекомых. В засушливом климате степей и пустынь они могут сохраняться более длительное время (в течение года и более). Чем свежее погадка и помет, тем они темнее окрашены. Гибель туляремийного микроба в погадках и помете происходит быстро (в первые сутки; при отрицательных температурах, возможно, дольше), в связи с чем бактериологическое исследование этого материала нецелесообразно. Туляремийный антиген сохраняется в погадках и помете в течение всего периода их существования. Для поиска туляремийного антигена в ПП и ПХМ используют ПЦР, серологические методы, чаще всего наиболее простой и доступный - реакцию нейтрализации антител (РНАт).

В бесснежное время года в открытых ландшафтах в течение одного дня можно собрать материал, содержащий остатки большого числа ММ с территории несколько сотен квадратных километров, если использовать автомашину для передвижения. Труднее, но возможно, проводить сбор ПП и ПХМ зимой. Погадки собирают вблизи гнездовий, мест кормежки, ночевок и отдыха птиц. Обычно это возвышенные предметы, столбы линий электропередач, одиноко стоящие деревья, стога сена и ометы соломы, вышки и т.д. ПХМ можно обнаружить около возвышающихся на местности предметов, а также на охотничьих тропах хищников и на их лежках. ПП и ПХМ собирают обычно ранней весной, сразу после схода снега и поздней осенью. Это позволяет получить характеристику эпизоотийного состояния популяции ММ на протяжении всего года, установить начало и длительность эпизоотии. В пойменно-болотных очагах наиболее удобное время сбора ПП и ПХМ - вторая половина лета, когда возникают эпизоотии среди околоводных видов млекопитающих. В лесных ландшафтах ПП и ПХМ собирают возле гнезд или по кромке леса и опушкам. Непосредственно в лесных массивах особое внимание уделяют сбору ПХМ в зимнее время.

Каждую найденную погадку или пробу помета заворачивают в отдельный лист бумаги во избежание контаминации. Собранный с одного места материал помещают в отдельные матерчатые мешки и этикетируют. Быстрое отмирание туляремийного микроба в кислой среде ПП и ПХМ позволяет проводить их сбор в природе и дальнейшую обработку без специального режима, соблюдая лишь правила обычной гигиены. При необходимости материал может храниться длительное время, если его тщательно просушить.

Сведения о распределении, динамике численности фоновых видов млекопитающих и кровососущих членистоногих, выделении культур возбудителя или находках туляремийного антигена в объектах внешней среды наносят на карты и анализируют.

Обо всех вновь выявленных природных очагах туляремии информируют территориальные управления.

4.4. Лабораторное исследование зоопаразитологического материала на туляремию

4.4.1. Подготовка материала к исследованию и порядок исследования.

Успех бактериологического исследования зависит от свежести доставленного материала, поэтому животных или их органы, если они не были заморожены или законсервированы, исследуют немедленно после доставки в лабораторию. Если это не удается, то трупы животных или органы сохраняют на холоде. В первую очередь исследуют зверьков, найденных мертвыми. Перед вскрытием зверьков осматривают и снимают или счесывают с них эктопаразитов. Затем зверьков взвешивают с точностью до 0,5 г, измеряют длину их тела, хвоста, высоту уха и др., что необходимо для точного определения вида добытого животного. При вскрытии определяют пол, возраст и генеративное состояние зверьков. Возможна обработка зверьков на месте сбора, вскрытие и помещение органов в консервант для последующей доставки в лабораторию. Консервантами могут служить вазелино-парафиновая смесь (1 часть парафина - 10 частей вазелинового масла, смесь стерилизуют 45 мин. прогреванием на кипящей водяной бане), а также касторовое масло, 5%-ный раствор поваренной соли, глубокое замораживание в жидком азоте и др. В консервантах и при низкой температуре органы животных можно сохранять в течение 1 месяца.

Трупы зверьков, погибших в природе, павших в лаборатории, или животных, у которых при вскрытии обнаружены патолого-анатомические изменения, характерные для туляремии, подвергают индивидуальному исследованию, применяя биологический, бактериологический, молекулярно-генетические, серологические методы. Эти методы сочетают по-разному в зависимости от задач и технических возможностей. Вскрытие зверьков, найденных мертвыми в природе, производят в отдельной кювете и отдельными инструментами. При вскрытии каждого зверька осуществляют тщательную обработку инструментов 96°-ным спиртом с последующим обжиганием или смену их с последующим кипячением, а также обработку рук (перчаток) и доски для вскрытия. Необходимо полностью исключить возможность случайного переноса микроба туляремии в другие исследуемые пробы. В трупах животных возбудитель туляремии может быть обнаружен путем бактериоскопии мазков - отпечатков органов или выделен посевом на питательные среды, если органы не подверглись разложению. Посевы из трупов зверьков целесообразнее производить на питательные среды с антибиотиками, предупреждающими рост посторонней микрофлоры. В органах животных 1-й группы туляремийные бактерии могут быть обнаружены микроскопическим исследованием (лучше люминесцентной микроскопией). Использование микроскопии мазков из органов трупов животных 2-й группы может быть безуспешным из-за малой обсемененности их органов туляремийными бактериями. Наряду с микроскопией и посевом органы трупов зверьков исследуют путем биологической пробы, а остатки суспензии используют для постановки ПЦР и серологических реакций (РНАт, реакции иммунофлуоресценции - РИФ и др.). В условиях установленной эпизоотии можно ограничиться посевом и бактериоскопией мазков из органов, сохраняя часть их на холоде до выяснения результатов и выделения возбудителя прямым посевом. В сомнительных случаях (плохая сохранность трупов, отсутствие при вскрытии типичных патолого-анатомических изменений) прибегают к биологическому методу. При этом часть органов оставляют до выяснения результатов посева или биологического исследования. Если биопробное животное погибнет преждевременно от посторонней причины, а посев неудачен, то проводят повторное биологическое исследование. У животных с признаками разложения в первую очередь исследуют костный мозг трубчатой кости. При исследовании сильно разложившихся трупов применяют накожный метод заражения биопробного животного. Трупы животных исследуют параллельно методом ПЦР и серологическими методами (РНАт, РИФ и др.). Трупы животных 2-й и 3-й групп обязательно исследуют биологическим методом, позволяющим выявить даже единичные бактерии. Исследование завершают выделением чистой культуры, ее идентификацией, что служит неоспоримым доказательством зараженности объекта.

Обнаруженные при обследовании природных очагов туляремии мумифицированные трупы, высохшие шкурки и кости зверьков не содержат живых туляремийных бактерий, поэтому такие объекты исследуют методом ПЦР и серологическими методами, позволяющими обнаружить дезоксирибонуклеиновую кислоту (ДНК) возбудителя или туляремийный антиген.

Основным методом исследования ММ, добытых в природе орудиями лова или живыми, служит биологическая проба. Этот метод позволяет обнаруживать даже единичные бактерии возбудителя туляремии на различных стадиях заболевания или бактерионосительства, когда использование других методов (посев, бактериоскопия) не дает положительного результата. При биологическом исследовании ММ (кроме трупов и зверьков с патолого-анатомическими изменениями) применяют групповое исследование, т.е. объединение органов нескольких зверьков (5 - 10) одного вида и пойманных в одном месте. Используют кусочки селезенки, печени, почек, лимфатические узлы, костный мозг. При групповом анализе посевы и мазки от каждого вскрываемого зверька не делают. Отобранные органы помещают в стерильную ступку, тщательно растирают пестиком, добавляют стерильный 0,9%-ный раствор натрия хлорида (NaCl) и смешивают в гомогенную суспензию. Количество раствора колеблется от 0,5 до 5,0 мл в зависимости от величины органов. Сразу после приготовления 0,2 - 0,5 мл взвеси набирают в шприц через небольшой кусочек стерильной ваты и вводят белой мыши под кожу паховой области правой ноги (морской свинке можно ввести до 2 мл взвеси). При вскрытии смену инструментов производят после группы зверьков, входящих в общий анализ. Органы животных, у которых на вскрытии обнаружены патолого-анатомические изменения, исследуют индивидуально. В этом случае применяют дополнительно посев и бактериоскопию (люминесцентную микроскопию). Бактериоскопия, как правило, дает положительный результат только в септической (терминальной) фазе заболевания.

Животных, добытых живыми, исследуют на наличие туляремийных антител, для чего используют сыворотку крови или "смывы" из грудной полости. Для забора крови живых грызунов умерщвляют, вскрывают грудную клетку и берут из правого желудочка сердца еще не свернувшуюся кровь (обычно от 0,5 до 3,0 мл в зависимости от вида животного). Кроме того, кровь можно брать из кончика хвоста или уха, не убивая животное, что позволяет при необходимости повторить исследование. При этом используют индивидуальные пипетки и шприцы. Отстоявшуюся сыворотку консервируют мертиолатом натрия до конечной концентрации 1:10000 (на 1 мл сыворотки добавляют 2 капли по 0,05 мл раствора мертиолата натрия 1:1000) с последующим прогреванием при температуре 56 °С в течение 30 мин. Можно использовать плазму крови животных (особенно мелких видов). Для этого кровь берут из сердца или периферических сосудов и помещают в количестве 0,1 мл в лунку пластины, содержащей 0,2 мл 5%-ного раствора натрия лимоннокислого. Через 2 ч. плазму крови можно использовать в серологических реакциях микрообъемным способом с соблюдением правил биологической безопасности. Исходное разведение плазмы приравнивается к разведению сыворотки 1:5.

При исследовании ММ, добытых орудиями лова или павших, готовят суспензию из сгустков крови сердца и околосердечного пучка сосудов ("смыв"). Суспензию готовят непосредственно в грудной полости грызунов после взятия материала для бактериологического исследования. Для этого целиком удаляют легкие, ножницами иссекают сердце, аорту и другие крупные сосуды. Шприцем с толстой иглой или пастеровской пипеткой вливают в грудную полость 0,9%-ный раствор натрия хлорида с мертиолатом натрия 1:4000 в количестве 1 мл. После перемешивания взвесь отсасывают и переносят в пробирку, в которую добавляют еще 2 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида и прогревают при температуре 56 °С в течение 30 мин. "Смывы" отстаивают 1 - 2 ч., отсасывают надосадочную жидкость. Условно "смыв" приравнивают к разведению сыворотки 1:10. "Смывы", как правило, исследуют в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) и методом ПЦР.

Возможно производить забор сыворотки и цельной крови на фильтровальную бумагу, предварительно обработанную мертиолатом натрия в разведении 1:1000.

Подготовка ПП и ПХМ к исследованию. Каждую погадку или пробу помета рекомендуется исследовать индивидуально. После доставки в лабораторию материал просушивают при комнатной температуре и взвешивают каждую пробу с точностью до 0,1 г. Это позволит в дальнейшем придерживаться сравнимого исходного разведения суспензии (по сухому весу). Например, если к образцу весом 1 г добавить 4 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида, то получим разведение 1:5, а при добавлении 9 мл - 1:10 и т.д. После взвешивания дальнейшую обработку материала можно проводить двумя способами.

Первый способ - взвешенный образец помещают в специальный пакетик из тонкой полиэтиленовой пленки. Размер пакетика определяется величиной исследуемого материала. После помещения в пакетик исследуемого образца верхний край его перегибают и сшивают скрепочной машинкой. Затем шприцем непрерывного действия через прокол верхнего края пакета в него вводят подогретый (до 70 °С) 0,9%-ный раствор натрия хлорида в необходимом количестве. Использование подогретого раствора в 1 - 2 раза повышает титр реакции в сравнении с холодным раствором. Содержимое пакета разминают в однородную массу и через 20 - 30 мин. отжимают в пробирку, отрезав нижний заостренный край пакета. Суспензию обеззараживают в соответствии с п. 2.8.16 санитарно-эпидемиологических правил СП 1.3.1285-03 "Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности)", после чего адсорбируют взвесью 50%-ных формалинизированных эритроцитов (2 капли эритроцитов на 1 мл суспензии). Через 20 - 30 мин. суспензию центрифугируют 10 - 15 мин. при 2000 об./мин. или отстаивают в течение 18 - 20 ч. в холодильнике. Полученную прозрачную надосадочную жидкость используют для постановки серологической реакции. Процедура истощения суспензии формалинизированными эритроцитами необходима для избежания неспецифических реакций.

Второй способ - при отсутствии полиэтиленовых мешочков или центрифуги суспензию можно подготовить к исследованию другим, более трудоемким способом. Погадку (или помет) растирают пестиком в фарфоровой ступке с необходимым количеством подогретого до 70 °С 0,9%-ного раствора натрия хлорида. Полученную взвесь отсасывают через кусок стерильной ваты пастеровской пипеткой, переносят в пробирку и обеззараживают в соответствии с п. 2.8.16 санитарно-эпидемиологических правил СП 1.3.1285-03 "Безопасность работы с микроорганизмами I - II групп патогенности (опасности)". Затем суспензию фильтруют на стеклянной воронке с асбестовым фильтром до получения прозрачной жидкости, которую используют в реакции. Такой фильтрат, как правило, не дает неспецифических реакций даже в начальных разведениях, поэтому дополнительная обработка формалинизированными эритроцитами не требуется.

Обнаружение туляремийного антигена и/или ДНК возбудителя в исследуемом материале служит достоверным критерием наличия эпизоотии на обследуемой территории в настоящее время или в недавнем прошлом и является основанием для организации работ, направленных на выделение возбудителя. Количество положительных ПП и ПХМ позволяет судить об интенсивности эпизоотического процесса: в местах разлитых эпизоотий этот показатель составляет 20 - 60% от всего материала, а при локальных (вялых) эпизоотиях - 0,5 - 3,0%. Для обнаружения антигена при вяло текущих эпизоотиях туляремии необходимо собрать и исследовать не менее 100 ПП или ПХМ из одного места в течение одного сезона обследования, а для контроля за эпизоотической ситуацией в известных очагах туляремии - не менее 25 ПП и ПХМ. ПП и ПХМ, собранные весной в лесной и лесостепной зонах, характеризуют эпизоотическое состояние зимнего периода и ранней весны, а собранные осенью - лета. Видовой состав ММ, вовлеченных в эпизоотический процесс в лабораторных условиях, удается определить до вида (или рода) по хорошо сохраняющимся костным остаткам (фрагментам черепа и зубам) при сравнении с эталонной коллекцией костей скелета и зубов ММ, обитающих на данной территории.

Добытых в природе насекомых и других беспозвоночных животных исследуют, как правило, в день доставки в лабораторию или не позднее следующего дня. Исключение может быть только для взрослых иксодовых клещей, которых можно сохранять живыми 2 - 3 недели на холоде. Погибшие и высохшие членистоногие непригодны для бактериологического исследования.

Беспозвоночных животных перед исследованием определяют до вида (или рода) и группируют в отдельные пробы, содержащие животных одного вида (рода) и добытых из одного места. Обнаружение туляремийного микроба в организме беспозвоночных наиболее эффективно при использовании биологического метода или ПЦР-анализа, выявляющего специфическую ДНК возбудителя туляремии. В редких случаях удается обнаружить туляремийные бактерии в иксодовых клещах посевом содержимого их тела на питательную среду или с помощью люминесцентной микроскопии.

Перед исследованием взрослых иксодовых клещей (~ 50 особей в один анализ) помещают в пробирку, приливают 10 - 15 мл этилового спирта, энергичным встряхиванием промывают клещей 0,5 - 1,0 мин., сливают спирт, после чего 3 - 4 раза таким же образом промывают их в стерильной дистиллированной воде. Отмытых клещей помещают на фильтровальную бумагу для удаления излишней влаги, а затем - в ступку. Клещей раздавливают пестиком и растирают в кашицу, избегая разбрызгивания. К растертой массе добавляют 5 мл стерильного 0,9%-ного раствора натрия хлорида и тщательно перемешивают в однородную суспензию, которую набирают в шприц через небольшой кусочек стерильной ваты и вводят биопробному животному.

При исследовании личинок и нимф иксодовых клещей промывание в спирте не проводят, т.к. это может повредить анализу. Личинок объединяют по 100 - 200 экз., нимф - по 50 - 100 в зависимости от степени их упитанности. Затем помещают в стерильную ступку, растирают пестиком, добавляют 1 - 3 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида, тщательно перемешивают и полученную суспензию вводят биопробному животному.

Блох, гамазовых клещей, вшей сортируют по видам (родам), а также видам зверьков, с которых они были собраны, помещают в стерильные пробирки и далее подвергают обработке по той же методике, что личинок и нимф иксодовых клещей.

Кровососущих двукрылых насекомых усыпляют парами эфира для ограничения подвижности. У слепней предварительно отстригают ноги и крылья, комаров и мошек исследуют целиком. В один анализ включают 25 - 50 слепней или 100 комаров, или 250 мошек. Насекомых растирают в ступке, добавляют 5 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида, полученную суспензию вводят биопробному животному.

Гидробионтов - ручейников, бокоплавов, дафний, циклопов и др. перед исследованием промывают в нескольких порциях воды и 1 - 2 порциях стерильной дистиллированной воды. У животных, имеющих чехлики или раковинки, последние по возможности удаляют. Животных объединяют в группы по 5 - 10 - 50 экз. в зависимости от размеров особей отдельных видов, растирают в ступке, добавляют 2 - 5 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида и полученную суспензию вводят биопробному животному.

Исследование объектов внешней среды является эффективным способом обнаружения возбудителя туляремии, т.к. последний обнаруживает значительную устойчивость во внешней среде, особенно при низкой температуре.

Пробы воды берут из различных водоемов: речек, ручьев, прудов, озер, болот, колодцев и т.п. Из каждой точки желательно брать 2 пробы. Пробы берутся в затененном месте, на глубине 10 - 20 см от поверхности стоячей или слабо проточной воды. Желательно отбирать пробы в местах обитания зверьков (возле кормовых столиков, нор, хаток бобров или ондатр). В стерильные бутылочки емкостью 200 - 250 мл отбирают 100 - 200 мл воды, закрывают пробкой, бумажным колпачком и обвязывают шпагатом. Бутылочки с водой помещают в клеенчатые или полиэтиленовые мешки, упаковывают в металлический ящик и доставляют в лабораторию. В зимнее время пробы берут в прорубях, в незамерзающих местах ручьев, мелиоративных каналов, рыболовных лунках. При глубоком промерзании водоема со дна берут лед или ил. После взятия каждой пробы руки (перчатки) и инвентарь обрабатывают 70°-ным спиртом. Исследование воды проводят в день ее доставки в лабораторию биологическим методом. Для концентрирования возбудителя используют фильтрование, центрифугирование, магнитные сорбенты и другие приемы. После этого белой мыши вводят подкожно до 1 мл, а морской свинке до 5 мл воды (желательно по 2 биопробы). Наиболее эффективно применение исследования воды в пойменно-болотных очагах туляремии в зимнее время.

С зерна, соломы, гнездового материала и других субстратов делают смыв 0,9%-ным раствором хлористого натрия. Для этого 5 - 10 г исследуемого субстрата помещают в стерильный сосуд, заливают двойным по весу количеством раствора и тщательно встряхивают. Смыв набирают в шприц (через кусочек ваты) и вводят биопробному животному. Зимой с соломы ометов собирают замерзшую мочу, экскременты грызунов, которые также используют для биопробы. Подснежные гнезда грызунов исследуют биологическим и серологическим методами.

Домашние животные (крупный рогатый скот, свиньи, овцы, северные олени) относятся к видам, малочувствительным к туляремии (3-я группа). При их исследовании используют главным образом серологические методы (реакцию агглютинации - РА и РНГА - синоним РПГА), реже - внутрикожную пробу с тулярином. Посевы из органов или биологические пробы применяют только при обследовании павших, забитых или больных животных. Исследуют в первую очередь лимфатические узлы и селезенку. При серологическом исследовании следует учитывать возможность обнаружения перекрестных реакций с бруцеллами и микробной флорой кишечника животных. Целесообразно исследовать сыворотки домашних животных, по крайней мере, в двух серологических реакциях: РА и РНГА, считая диагностически значимыми титры в РА - 1:40 и выше и в РНГА - 1:160 и выше. Положительные реакции в РНГА следует контролировать в реакции торможения гемагглютинации (РТНГА). Обнаружение специфических антител у домашних животных имеет ориентировочное значение и служит сигналом для проведения на данной территории детальных эпизоотологических исследований на туляремию.

⇐ Предыдущая 123 4 5 6 Следующая ⇒