Стерилизация сред.

4.Стерилизация сред.

Стерилизацией или обеспложиванием (sterilis- бесплодный) называют полное уничтожение вегетативных клеток микроорганизмов и их спор в каком – либо материале (питательной среде, посуде, приборе, инструменте, перевязочном материале и т.д.). Выбор способа стерилизации зависит от свойств стерилизуемого объекта.

Автоклавирование.

Питательные среды стерилизуют главным образом в автоклавах насыщенным паром под давлением 0,05-0,2 МПа. Температура насыщенного пара при различных давлениях показана ниже:

Показатели манометра, МПа	Температура насыщенного пара, ºC	Показания манометра, МПа	Температура насыщенного пара, ºC
0,00		0,15
0,05		0,20
0,10		0,30

Автоклав работает при высоких давлениях и температурах и к его обслуживанию допускаются только специально подготовленных лиц.

При работе с автоклавом строго соблюдают правила, указанные в прилагаемой к аппарату инструкции.

Подготовку автоклава к работе и процесс стерилизации осуществляют следующим образом:

1) Тщательно проверяют исправность аппарата.

2) В водопаровую камеру через воронку заливают дистиллированную воду до тех пор, пока ее уровень не дойдет до верхней метки водомерного стекла. После этого кран перекрывают.

3) Питательные среды в пробирках или колбах, закрытых ватными пробками с бумажными колпачками, завернутую в бумагу посуду и другой стерилизуемый материал помещают на решетчатую подставку и накрывают бумагой.

4) Автоклав закрывают крышкой, равномерно завинчивают зажимы, не допуская перекосов и не плотностей.

5) Открывают спускной кран пароотводной трубы, включают автоклав в электрическую сеть и начинают прогрев.

6) Образующийся пар должен вытеснить из автоклава весь воздух, так как температура чистого насыщенного пара выше температуры смеси пара с воздухом.

7) После полного удаления воздуха и влажного пара непрерывную струю свистящего сухого пара выпускают еще 10-15 мин и перекрывают спускной кран.

8) Пар выпускают через резиновый шланг, надетый на пароотводную трубку и опущенный в сосуд с водой.

9) За повышением рабочего давления в автоклаве следят по манометру.

10) Время стерилизации отсчитывают с момента установления необходимого давления.

11) Излишний пар, образующийся в результате нагрева, выпускается предохранительным клапаном, как только стрелка манометра переходит черту требуемого давления.

12) По истечении времени стерилизации автоклав выключают из электрической сети, нагревание прекращают и ждут момента, когда давление по манометру упадет до нуля.

13) Только после этого можно открыть спускной кран, осторожно выпустить из автоклава остаток пара, затем отвинтить и откинуть крышку. Если спускной кран открыть раньше, чем стрелка займет нулевое положение, может произойти бурное вскипание жидких сред и смачивание ватных пробок. Резкое снижение давления может привести к выталкиванию пробок и даже выплескиванию жидкости из сосудов.

14) Нельзя преждевременно отвинчивать и открывать крышку, так как вырывающиеся струи пара могут вызвать ожоги обслуживающего персонала и окружающих. Автоклаву дают несколько остыть и вынимают простерилизованный материал.

15) Оставлять автоклав закрытым до полного охлаждения не рекомендуется, так как пар конденсируется и влага пропитывает ватные пробки. В нерабочем состоянии автоклав держат открытым и свободным от воды.

16) Для проверки стерильности питательные среды помещают на 2-3 сут в термостат при 30ºC, и если обнаруживают рост микроорганизмов, среды готовят заново.

Для контроля соответствия показаний манометра температуре, внутри автоклава пользуются веществами, имеющими определенную точку плавления. Например, бензонафтол плавится при 110 ºC, антипирин – при 113 ºC, резорцин и сера – при 119 ºC, бензойная кислота – при 120 ºC. В стеклянную ампулу или пипетку Пастера длиной 5-6 см, запаянную с одного конца, насыпают одно из указанных веществ, и прибавляют несколько кристаллов сухого анилинового красителя (фуксина, сафранина или метиленового синего). Трубочку запаивают и помещают в автоклав между стерилизуемыми предметами. Если температура соответствует давлению, контрольное вещество расплавится и окрасится в цвет взятого красителя.

Температура и продолжительность автоклавирования определяются составом питательных сред и их рН. Субстраты, легко разрушающиеся при нагревании до 120 ºC, стерилизуют при 0,05 МПа. При кислой реакции некоторые вещества, входящие в состав питательной среды, в процессе автоклавирования гидролизуются. Во избежание этих явлений, растворы некоторых компонентов (сахара, многоатомные спирты, витамины, аминокислоты) стерилизуют отдельно при значениях рН, обеспечивающих их устойчивость, и добавляют после стерилизации. Такой способ обеспложивания называется раздельной стерилизацией.

Стерилизация текучим паром (дробная стерилизация).

Данный способ применяют для стерилизации питательных сред, изменяющих свой состав и свойства под действием температур выше 100 ºC.

Сущность дробной стерилизации состоит в том, что нагревание среды (или ее компонентов) проводят при 100 ºC три раза по 30 мин трое суток подряд. Кратковременное прогревание среды кипячением уничтожает в основном термолабильные вегетативные клетки микроорганизмов. Поэтому между нагреваниями питательные среды выдерживают при комнатной температуре (или в термостате при 30 ºC) и дают возможность прорасти оставшимся жизнеспособным спорам. Образовавшиеся из термоустойчивых спор вегетативные клетки погибают при повторном кипячении. Продолжительность нагревания может быть увеличена до 45-60 мин, что зависит от объема жидкости.

Дробную стерилизацию питательных сред проводят в аппарате Коха или в автоклаве с закрытой, но не завинченной крышкой. Так как нагревание ведут в парах кипящей воды, способ называют стерилизацией текучим паром. Дробной стерилизации подвергают среды, в состав которых входят сахара, многоатомные спирты, желатин.

Стерилизация путем прерывистого нагрева.

Была предложена английским физиком Джоном Тиндалем и получила название тиндализации.

Среды необратимо изменяющиеся при кипячении, осторожно прогревают при более низкой температуре: при 60-80 ºC в течение 5 сут подряд по 30-60 мин или при 56-58 ºC на протяжении 6-7 сут, в первые сутки – 2 ч, в последующие – по 1 ч. Температурную обработку сред ведут на водяной бане или в ультратермостате, где температура автоматически поддерживается на определенном уровне с помощью специального устройства. В промежутках между нагревами среды выдерживают в обычном термостате при 30 ºC.

Пастеризация.

Пастеризация, или неполная стерилизация, предложена Луи Пастером. Она предназначена для уничтожения в основном аспорогенных микроорганизмов однократным прогреванием при температуре 60-75 ºC и выдержке 15-30 мин или при 80 ºC в течение 10-15 мин. Пастеризации подвергаются продукты и среды, которые при воздействии боле высоких температур претерпевают глубокие изменения, теряют качество и питательную ценность. Пастеризацию широко применяют в пищевой промышленности.

Стерилизация фильтрованием.

Стерилизацию жидких питательных сред, не выдерживающих даже незначительного нагревания, производят фильтрованием через специальные мелкопористые бактериальные фильтры. На бактериальных фильтрах задерживаются механические взвешенные примеси, в том числе и клетки микроорганизмов. Исключение составляют вирусы и фаги. Фильтрованию подвергают среды с белками, антибиотиками, витаминами, летучими веществами, а также культуральные жидкости с целью освобождения от клеток и сохранения всех продуктов метаболизма в неизменном виде. Фильтры изготавливают из положительно заряженных материалов.

⇐ Предыдущая 1 23