Фракционирование белков. Очистка белков от низкомолекулярных примесей.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 3.

Фракционирование белков. Очистка белков от низкомолекулярных примесей.

Опыт 1. Диализ белков.

Диализом называют процесс разделения высокомолекулярных веществ (например, белков) и низкомолекулярных (например, солей) с помощью полупроницаемых мембран.

Полупроницаемыми называют мембраны, диаметр пор которых позволяет проходить только низкомолекулярным соединениям. Примером естественных полупроницаемых мембран могут быть биомембраны растительных и животных тканей, например, капсула Боумена—Шумлянского почек. Широко используют искусственные полупроницаемые мембраны: целлофан, коллодиевую пленку, на основе которых созданы диализаторы, в том числе «искусственная почка».

Метод диализа используют в научных лабораториях, в промышленности, в клинической практике.

Цель работы

Доказать, что низкомолекулярное соединение NaCl проходит через полупроницаемую мембрану, а высокомолекулярный белок не проходит и остается в диализируемом растворе.

Принцип метода

Метод основан на том, что низкомолекулярные вещества легко диффундируют через полупроницаемые мембраны в чистый растворитель, образуя диализат. Диффузия будет продолжаться, пока не произойдет выравнивание концентраций диффундируемого вещества между диализируемым раствором и диализатом. Процесс возобновится, если диализат заменить чистым растворителем или, если эта смена будет происходить постоянно (проточный диализ).

Диализ можно ускорить, периодически меняя воду в стакане (через каждые 15—20 мин. ) или же используя проточный диализатор.