Полевой В.В. «Физиология растений»: Учеб. для вузов. М.: Высш. шк., 1989.

· Задача 2. Выделение протопластов.

· Цель задачи: выделить протопласты, изучить влияние среды на выделение протопластов.

· Объект исследования:

· Реактивы и оборудование. Калий-фосфатный буфер (рН 7. 5), маннит две навески по 5г, целлюлаза две навески по 1, 0 г, цилиндры на 50 мл, 2 колбы по 100 мл, стаканчики, стеклянные палочки, маленькие чашки Петри, препаровальные иглы, лезвие, микроскопы.

· Ход работы:

1. Приготовление растворов маннита (плазмолитик) на К-фосфатном буфере. Раствор №1 с=70 г/л, раствор №2 с=90г/л.

2. Приготовление на основе растворов №1 и №2 растворов 2, 5% целлюлазы (сначала растворяют целлюлазу (фермент) в небольшом объеме, затем после ее растворения доливают оставшийся объем).

3. Наливают приготовленные растворы №1 и №2 в две маленькие чашки Петри (прикрыв раствором дно).

4. Отрезают небольшой (4*4мм) кусочек листа у выбранного объекта (по кусочку для каждого раствора).

5. Удаляют нижний эпидермис с кусочка ткани.

6. Сразу помещают кусочки в раствор фермента и плазмолитика.

7. Чашки Петри с кусочками ткани оставляют в термостате на 2, 5 часа при 37⁰С.

8. Через 2, 5 часа вынимают чашки Петри из термостата и смотрят под микроскопом изолированные протопласты, наводя на зеленые конгломераты в растворе, если таковых нет, то объект можно пошевелить препаровальной иглой. Зарисовать найденные протопласты.

Оценить произошло ли разрушение клеточной стенки, качественно оценить соотношение целых и разрушенных хлоропластов в растворе.

ЛИТЕРАТУРА к зачету:

Полевой В. В. «Физиология растений»: Учеб. для вузов. М.: " Высш. шк. ", 1989.

Бутенко Р. Г Биология клеток высших растений in vitro и биотехнологии на их основе. М., ФБК-ПРЕСС, 1999.