Аналитический этап

Объем -2 -6 мл, это нормоспермия,

снижение количества – олигоспермия, при хр. простатите, дефиците гормонов, снижении секреции предстательной железы, атрофия яичек.

Отсутствие эякулята – аспермия

Отсутствие сперматозоидов – азооспермия.

Разжижение – при комнатной температуре в течение часа. Если материал остается вязкий, это говорит о воспалении предстательной железы, увеличение образования слизи.

рН –7, 2 – 8, 0 слабо щелочнаяза счет секрета бульбо-уретальных желез, присутствия фосфатов, карбонатов семенных пузырьков. Снижение рН 6, 0-6, 8 (кислая) – закупорка семявыносящих протоков на фоне азооспермии. РН менее 7, 2 – косвенный признак патологических состояний, рН 9, 0-10, 0 (резко щелочная) - патология предстательной железы.

Вязкость - определяется через 1 час, опустить стеклянную палочку, поднять и измерить длину нити. В норме не более 2 см. Увеличение вязкости в 30-50% случаев – это фактор, препятствующий оплодотворяющей способностиэякулята.

Запах –характерный, цветов каштана за счет присоединения секрета предстательной железы. Уменьшается или исчезает при закупорке протоков, атрофии железы, гнилостный – при гнойно-воспалительных заболеваниях, обусловлен продуктами жизнедеятельности микрофлоры и при длительном храненииэякулята.

Цвет –мутный, молочно-белый, серовато-желтый, возможны желеобразные гранулы. Степень мутности зависти от количества сперматозоидов. Прозрачный – уменьшение клеток; розовый, красный, красновато-коричневый – гемоспермия; желтоватый, желтый- желтуха, прием витаминов, флавина, длительное половое воздержание; желтовато-зеленый – пиоспермия.

Количество сперматозоидов в 1 мл - не менее 20 млн. - это нормозооспермия

Общее количество сперматозоидов вэякуляте - не менее 40 млн.

Олигозооспермия – менее 20 млн. сперм. /1мл – при обструкции семявыносящих путей, хр. воспалении моче-полового тракта, гипогонадизме, генетических аномалиях, врожденных дефектах развития.

Азооспермия – сперматозоиды после центрифугировании спермы отсутствуют, могут быть клетки сперматогенеза.

Аспермия – нет эякулята.

Кинезиограмма – изучение подвижности, сперматозоиды разделяются по категориям:

А – быстрое поступательное движение, более 25 мкм/с. (более 25%)

В – медленное вялое поступательное движение (А + В более 50%)

С – непосредственное движение (колебательное, маятникообразное, манежное) скорость 5 мкм/с.

Д – неподвижные.

Нативныйпрепарат исследуется при температуре не ниже 20⁰, лучше с подогревом столикамикроскопа. Микроскопия осуществляется при малом увеличении микроскопа со спущенным конденсором.

Астенозооспермия – снижение подвижности сперматозоидов. Причины разные – нарушение функции хвостиков, энергетические нарушения, хр. воспаление, бактериспермия, токсические факторы, недостаток биохимических компонентов, увеличение вязкости.

Агглютинация – склеивание подвижных сперматозоидов между собой головками, хвостами. В норме нет, появляется при иммунном бесплодии.

(+) слабовыраженная (10 скоплений по 4-6 клеток в каждом);

(++)значительная (более 20 скоплений);

(+++)резко выраженная (более 20 скоплений более 20 сперматозоидов);

(++++) тяжелая степень агрегации – все подвижные клетки агглютинированы.

Агрегация – хаотическое скопление неподвижных сперматозоидов, нагромождение на комочки, тяжи слизи, клеточные элементы. В норме нет. Появляются как признак иммунного компонента.

Слизь – в норме нет, появляется при воспалении уретры, бульбо-уретральных желез, простаты, препятствует движению сперматозоидов, приводит к снижению оплодотворяющей способности спермы.

Липоидные тельца – мелкие, блестящие зернышки, в норме в большом количестве, уменьшаются при простатите, отсутствуют при длительном воспалении.

Амилоидные тельца–округлой формы, разных размеров, сероватого, желтоватого цвета с характерной слоистостью, напоминающей распил дерева. Центральная часть – мелкозернистая. Это элемент застоя секрета предстательной железы.

Кристаллы спермина (Бетхера) –бесцветные, удлиненной формы с заостренными, прямоугольными концами, напоминают кристаллы Шарко-Лейдена, трипельфосфатов, мочевой кислоты. Образуются при охлаждении спермы, длительном стоянии.

Жизнеспособность –доля в % живых клеток, причем % мертвых не должен превышать % неподвижных. В норме более 75% ( по требованиям ВОЗ более 50%).

Некроспермия – менее 75% живых, оценка проводится по суправитальной окраске (по Блюму), краситель-эозин, нигрозин. Живые клетки – бесцветные, мертвые окрашены в оранжево-красный цвет.

«Круглые» клетки –эпителиальные, лейкоциты, макрофаги, незрелые клетки сперматогенеза. В норме не более 5, 0 млн. в1мл

Лейкоциты –менее 1млн. в 1 мл спермы, преимущественно нейтрофилы, подсчет ведется в 100 больших квадратах камеры Горяева.

Клетки сперматогенеза – в норме 2-4 на 100 сперматозоидов, рассчитываются в окрашенных препаратах, много при восстановлении сперматогенеза.

Остаточные тельца - фрагменты цитоплазмы клеток сперматогенеза, в норме нет, наличие сочетается с клетками сперматогенеза.

Макрофаги – в норме нет, появляются при хр. специфических и неспецифических воспалениях простаты и др. отделов.

Спермиофаги - это макрофаги, фагоцитировавшиесперматозоиды, свидетельствуют о застое в эпидидимисе.

Эритроциты - в норме нет, гемоспермия при травмах, воспалении, опухолях.

Гематоидин –при распаде гемоглобина.

Эпителий –многослойный плоскийороговевающий – единичный с головки полового члена, крайней плоти, неороговевающий многослойный плоский – ладьевидная ямка, цилиндрический – уретра, переходный – простатическая часть уретры.

Морфология сперматозоидов – изучение в окрашенных препаратах.

Головка: правильный овал, симметрична, большая часть – это ядро, прикрытое акросомой (ядерной шапочкой). Шейка: тонкая, в месте прикрепления не должно быть деформации. Хвост: прямой, возможен изгиб, угол сгиба не более 90⁰. Незрелые (юные) клетки: головка в цитоплазматической капле, капля на шейке в виде шарфа.

Патология: дефекты головки – большие, маленькие, грушевидные, двойные, шейки под углом, хвост – короткий, сломанный, наклонный, закругленный, без хвоста, множественные.

В норме 30-87%нормальные, при увеличении патологических форм – тератозооспермия

МАR – тест с Ig G – в норме менее 50% сперматозоидов с прилипшими частицами или шариками. До 20% мужского бесплодия приходится по имм. причинам.

Группа крови

Приказ МЗ от 2. 04. 2013г. №183 н « Об утверждении правил клинического использования донорской крови и ее компонентов ».

Приказ Управления здравоохранения Тамбовской области № 1678 от 1. 11. 2013г. « О мерах по совершенствованию трасфузиологической помощи, оказываемой в обл. учреждениях здравоохранения».

При поступлении пациента, нуждающегося в переливании, проводится первичное определение групповой иRh- принадлежности врачом отделения, подтверждающее определение по системе АВО и Rh - принадлежности проводится врачом (биологом) лаборатории. Обязательным является использование методов с цоликлонами, со стандартными эритроцитами, а также проводится фенотипирование крови по антигенам С, с, Е, е, К, к. У детей до 4 мес. возраста определение группы по системе АВО проводится только с использованием цоликлонов.

Влабораторию кровьдоставляется с направлением, в котором указывается Ф. И. О. больного полностью, отделение, № истории болезни, даты рождения, диагноза, первичного определения группы и фактора с указанием серии, срока годности цоликлонов, информация о враче. Врач КДЛ проводит подтверждающее определение, выдает результат с указанием серии, срока годности реактивов.

Характеристика антигенов эритроцитов.

Эритроциты человека содержат АГ, располагающиеся на внешней поверхности мембран эритроцитов. ВыделяютА, В типы. В зависимости от их сочетания выделяются 4 группы крови.

О(I) – нет АГ, но есть агглютинины α, β A(II) - А, β

В (III) - В, α А В(IV) – А, В

При встрече АГ и соответствующего агглютинина происходит реакция агглютинации эритроцитов (склеивание), поэтому у одного человека одновременно не встречаются. На этом принципе основаны иммунологические реакции определения групповой принадлежности.

Метод с цоликлонами- при добавлениицоликлонов (например анти-А) к крови больного происходит агглютинация эритроцитов в том случае, если у больного в крови есть антиген А. Цоликлоны – реактивы, содержащие заведомо известные антитела ( анти-А, анти-В).

Метод со стандартными эритроцитами –реактивы содержат заведомо известные АГ, выявляются соответствующие АТ в сыворотке больного.

Групповая принадлежность, Rh – фактор наследуются от родителей. Один АГ от отца, один - от матери.

Система Rh – фактора представлена 48 антигенами, АГ Д встречается у 85% населения, С имеют 70%, Е – 30%, с – 97%. Всего существует 28 фенотипов, из них 14 – с положительным резусом, доноры с отрицательным резусом, у которых нет антигенов С, Е, Д.

Основное значение имеет антиген Д, для его выявления используется цоликлон анти – Д супер. Если эритроциты содержат не все единицы АГ - тогда эритроциты слабо агглютинируют, это состояние RhДᵘ. Доноры стаким резусом относятся к резус – положительным, переливание их крови к резус- отрицательным реципиентам вызываеттрансфузиологическиеосложнения. Реципиенты с таким ослабленным резусом относятся к резус отрицательным.

Этапы проведения.

1). Первичное определение врачом клинического отделения

2). Подтверждающее определение врачом (биологом) КДЛ (перекрестный метод, фенотипирование крови, определение антиэритроцитарных антител с использованием полиспецифическихкассет)

Запрещается переносить данные о группе от других организаций в документацию своей организации, где планируется переливание.

3). проба на совместимость - врач отделения.

4). биологическая проба – переливание 10мл крови в течение 3-3, 5 мин., повторяется дважды.

Определение группы крови методом с цоликлонами.

Цоликлоны – реактивы, содержащие антитела к антигенам эритроцитов. Это полные, холодовые, класс IgMв титре 1: 16, 1: 28. В розовом флаконе – цоликлон анти-А, в голубом – цоликлон анти-В. Берется реактива и капли крови в соотношении 1: 10. Содержимое лунки перемешивается путем покачивания планшета. При агглютинации эритроцитов происходит склеивание клеток, в гомогенной красной капле образуются хлопья. Жидкость просветляется.

Группа крови больного	Цоликлон анти-А	Цоликлон анти-В
О(I)	отриц.	отриц.
А(II)	полож.	отриц.
В(III)	отриц.	полож.
АВ(IV)	полож.	полож.

Определение групповой принадлежности методом со стандартными эритроцитами.

Исследуется венозная кровь, центрифугируется, получаем сыворотку. Стандартные эритроциты – реактивы, содержащие заведомо известные антигены групп крови. С помощью этого метода определяются соответствующие антитела в сыворотке больного.

Стандартные эритроциты	О(I) группа больного	А(II)группа больного	В(III)группа больного
первая группа	отриц.	полож.	полож.
вторая группа	отриц.	отриц.	полож.
третья группа	отриц.	полож.	отриц.
четвертая группа	отриц.	отриц.	отриц.

Определение резус принадлежности

Проводится с помощью цоликлона анти-Д супер ( антитела классаIg М). При наличии агглютинации - результат положительный, при отсутствии – отрицательный.

Посттрансфузионные осложнения.

Связаны с присутствием в компонентах крови лейкоцитов, инфекционного начала, с гемосидерозом внутренних органов из-за перегрузки железом при частых трансфузиях, с острой сердечно-сосудистой недостаточностью при объемных переливаниях. Ошибки КДЛ

преаналитический этап	неправильная маркировка пробирок, неправильная маркировка лунок, t воздуха выше 25°С, недостаточная освещенность раб. места, нечистая лабораторная посуда
аналитический этап	использование просроченных реактивов, неправильное их хранение, нарушение соотношения реактива и крови, сокращение времени для оценки результата, недостаточное перемешивание содержимого лунки, невысокое качество реактивов, низкая активность, узкий спектр
постаналитический этап	ошибочная регистрация
индивидуальные особенности	ослабление АГ системы, полная утрата АГ эритроцитов у онко-больных, лейкозных больных, нарушение синтеза ферментов, ответственных за синтез А и В, холодовая агглютинация, низкая активность агглютининов у новорожденных, гематологических, онко-больных, при ожоговой болезни

Гемолитическая болезнь новорожденных

Развивается при наличии в крови матери антител к эритроцитам плода. Встречается при конфликте крови матери и плода по системе АВО и резус- системе. Мать с первой группой крови, если плод наследует от отца АГ А илиВ, плод может иметь вторую, третью группу крови. На присутствие антигена, которого нет у матери, идет выработка соответствующего антитела, в результате чего осуществляется массивный гемолиз эритроцитов плода. Это состояние сопровождается желтухой гемолитического характера с увеличением общего биллирубина за счет непрямого. Непрямой биллирубин – токсичное вещество, преимущественно накапливается в клетках, богатых липидами ( это нервные клетки ц. н. с. ). Возникает ядерная желтуха, тяжелая энцефалопатия с последующейинвалидизацией ребенка.

В ОАК- анемия, большое количество нормобластов (незрелых эритроцитов, еще не потерявших ядро). Их количество может быть значительным, рассчитывается на 100 лейкоцитов с последующим пересчетом истинного лейкоцитоза.

Гемолиз у новорожденных детей с несовместимостью по АВО системе встречается в 10-20% случаев. 50% - легкая степень гемолиза

25% - рождаются живые с тяжелым гемолизом, ядерной желтухой

25% -внутриутробная гибель плода

Конфликт по резус системе возникает, когда мама резус отрицательна, плод резус – положителен, иммунизация матери происходит при первой беременности, при последующих - у новорожденных развивается гемолитическая болезнь.

Мероприятия: определение группы и резус – фактора, определение антител к антигенам эритроцитовдо 28 нед. беременности контроль титра антител – 1 раз в месяц, после 28 нед. – 1 раз в неделю, профилактическое введение иммуноглобулина анти Резус Дбеременным с резус отрицательной кровью.

Преаналитический этап

Комплекс мероприятий, выполняемых от назначения врача до лабораторных измерений.

1. забор материала.

ОАК (венозная кровь): лучший материал для исследования, это минимальная травматизация клеток и примеси тканевой жидкости, достаточный объем образца для повторения, расширения исследований. Техника забора: место венепункции обрабатывается спиртом 70°безворсовой салфеткой, при использовании ваты -засорение счетных камер анализатора волокнами. Рука лежит на поверхности, плечо и предплечье образуют прямую линию. Наложение жгута на 1-2 мин., использование игл большого диаметра с коротким срезом. Во время манипуляции кровь поступает свободным током в пробирку, взятие шприцем нежелательно из-за возможного гемолиза, образования сгустка в пробе. После заполнения пробирки осторожно перемешать плавным переворачиванием и вращением пробирки в течение 2 мин. Нельзя встряхивать, происходит пенообразование, гемолиз эритроцитов, механическое повреждение клеток, обломки эритроцитов анализируются как тромбоциты.

Пробирки содержат антикоагулянт К2 ЭДТА, крышка красная, объем крови указан на пробирке.

Ошибки: неправильный забор биоматериала, недостаточное перемешивание, недостаточный объем крови.

ОАК (каппилярная кровь): забор из пальца, мочки уха, у новорожденных – из пятки. Результаты отличаются от венозного забора из-за сложности перемешивания образца, примеси тканевой жидкости, но допускается, если взятие венозной крови невозможно, проводится для ежедневного мониторинга, при обширных ожогах, труднодоступных венах, ожирении, венозных тромбозах, новообразованиях.

Забор: с использованием стерильных скарификаторов, лазерных перфораторов. Кожа должна быть сухая, теплая, розовая, после обработки 70° проводится прокол, первая капля удаляется (содержит тканевую жидкость), затем собирается в пробирку (микровет), капли должны вытекать свободно до метки на пробирке. Пробирку плотно закрыть, немедленно перемешать путем осторожного встряхивания, переворачивания 10 раз. На стенках антикоагулянт К2 ЭДТА. Дополнительно забор крови для постановки СОЭ и для приготовления мазка крови. Время исследования 1 – 4 часа, первые 5 – 30 мин. в пробе крови ложная тромбоцитопения из-за адаптации тромбоцитов к другим условиям.

Ошибки: холодные пальцы, плохой ток крови, давление на палец приводит к примеси тканевой жидкости, недостаточное количество крови, неправильное перемешивание, его отсутствие приводит к образованию сгустка крови, гемолизу эритроцитов. Такой образец не исследуется. При положении тела стоя – увеличение показателей Нв, Нt, лежа - снижение их на 6%, при хранении крови более 8 час. отмечается набухание клеток, увеличение объема.

Гемостаз (венозная кровь): методика забора та же, кровь забирается в пробирки с антикоагулянтом. Синяя крышка–цитрат натрия (предпочтительно)

светло-лиловая – ЭДТА, завышает АЧТВ, ПТИ, антитромбин -3

зеленая – гепарин, завышает АЧТВ, ПТИ, снижает фактор

Виллебранда.

Кровь забирается в соотношении 9: 1 (кровь: антикоагулянт). После аккуратного перемешивания центрифугируется -1 вариант - 7 мин. при 1000об/мин. 15 мин. с переносом плазмы в другую пробирку и повторным центрифугированием 15 мин. 3000 об/мин. 2 вариант - однократное центрифугирование 15 мин. 3000об/мин. Плазма исследуется сразу, время хранения при комнатной t не более 4 час., допускается однократное замораживание.

Ошибки: неправильный забор, недостаточное перемешивание, нарушение соотношения с антикоагулянтом, гемолиз.

2. неправильная идентификация данных. Пробирки должны быть подписаны, обязательно направление со всеми данными о больном, виде исследования. При приеме материала обращать внимание на пробу, объем крови. Наличие сгустка. Такая кровь не принимается.

3. внутрилабораторный преаналитический этап.

Регистрация в электронном виде, формирование заказа, маркировка проб, проведение пробоподготовки. Качество мытья посуды, состояние холодильников для хранения реактивов, качество дист. воды, приготовление рабочих растворов реактивов, обязательное проведение внутрилабораторного контроля качества, выбор антикоагулянта, подготовка красителей, разведение краски для окрашивания мазков крови. Требования к помещениям: освещение, температура, готовность к работе аппаратуры, достаточное количество реактивов.

Аналитический этап

Составляет 19% ошибок.

Причины: аналитические ошибки в работе аппаратуры, использование «не родных» реактивов для данного типа анализатора без его адаптации, просроченные реактивы, ошибки при разведении, установки в анализатор.

Регистрация результатов

Результаты анализов автоматически передаются в систему ЛИС в заказ данного больного. При отсутствии связи аппаратуры с ЛИС необходимо внести данные вручную. Когда полученный результат очень высокий (превышает линейность прибора), необходимо развести пробу, повторить исследование, а затем внести полученный результат с учетом разведения. На этом этапе возможен ряд ошибок: выдали заказ, забыв внести данные (звездочки), не пересчитали результат с учетом разведения.

По гемостазу: если результат по Д - димерам очень высокий, анализатор может не выдать его, необходимо развести пробу в 10 -20 раз, повторить анализ, выдать результат с учетом разведения.

Ошибки регистрации: если результаты вносятся вручную.

Факторы, влияющие на результаты.

возраст: новорожденные пожилой возраст (старше 75 лет)	↑ билирубина за счет непрямого (физиологическая желтуха), высокий гемоглобин до 225г/л, эритроциты до 7, 5 млн., макроцитоз, полихроматофилия, лейкоцитоз, низкие показатели СОЭ. количество гемоглобина, эритроцитов секреция гормонов снижаются, ускоряется СОЭ, склонность к лейкопении, тромбоцитопении(прием большого количества лекарств), повышается частота анемий, патологии крови
ожирение	↑ холестерина, триглицеридов, мочевой кислоты, ↑ ЛПНП, ЛПОНП, ↓ ЛПВП, ↑ индекса атерогенности
беременность	↑ 8 фактора свертывания, фактора Виллебранда, Д-димеров, РФМК, объема циркулирующей крови, объема мочи на 25%, СКФ на 30%, ↓ мочевины. Частая патология – анемия гипохромного типа, небольшой лейкоцитоз, в начале родов до 30, 0 тыс.
забор крови после физических нагрузок, стресса	гиперкоагуляция, ↑ глюкозы, общего белка, КФК, Нв, Нt (связано с потерей жидкости с потом). Лейкоцитоз у бегунов до 30, 0 тыс., степень его связана с тяжестью физической нагрузки, ее продолжительностью
психологический стресс при взятии крови	лейкоцитоз, ↑ уровня гормонов – альдостерона, адреналина, глюкозы, агрегации тромбоцитов
Подготовка больного: после 12-часового голодания, воздержания от алкоголя, курения, между 7 и 9 часами утра при минимальной физической активности в течение 20-30 мин. забор крови в положении лежа или сидя	нарушения: прием пищи, употребление жирного мяса, рыбы, лука, чеснока, алкоголя, курение. ↓ фибринолитической активности крови, агрегации тромбоцитов, антитромбина -3, времени кровотечения, ↑ активаторов плазминогена
прием контрацептивов	↓ антитромбина - 3, протеинов С и S, ↑ агрегации тромбоцитов. Состояние – до тромбозов
прием антибиотиков	тромбоцитопения, нарушение функции тромбоцитов

⇐ Предыдущая 12