ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 5. Каталитическая активность ферментов (на примере амилазы)».. Приготовление раствора слюны, содержащего фермент амилазу.. Тщательно прополощите рот водой.. Наберите 2—4 мл слюны в мерный цилиндр.. Добавьте в цилиндр воды до объёма 1

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 5

«Каталитическая активность ферментов (на примере амилазы)».

Цель: доказать каталитическое действие белков — ферментов, показать их высокую специфичность, а также зависимость их действия от условий среды.

Ход работы:

1. Приготовление раствора слюны, содержащего фермент амилазу.

• Тщательно прополощите рот водой.

• Наберите 2—4 мл слюны в мерный цилиндр.

• Добавьте в цилиндр воды до объёма 10 мл.

2. В две пронумерованные пробирки налейте по 10 капель раствора крахмала.

3. В пробирку № 1 внесите 4 капли воды (контроль), а в пробирку № 2 — 4 капли раствора слюны.

В пробирке №2 под действием слюны (в которой содержится амилаза) произойдет расщепление крахмала на олигосахариды (сахарозу, а она до глюкозы и фруктозы).

4. Перемешайте и поставьте на водяную баню на 15 мин при температуре 37°С.

5. Из пробирки № 2 возьмите 4 капли исследуемого вещества и внесите их в две разные пробирки (по две капли в каждую). В одну из них добавьте каплю раствора йода в иодиде калия (№ 2.1). В другую (№2.2) — каплю раствора сульфата меди (II) и 4 капли раствора гидроксида натрия и осторожно нагрейте до кипения.

Те же действия проделайте с содержимым контрольной пробирки (№ 1).

6. Оформите полученные результаты в виде таблицы.

Пробирка	Добавили	Результат	Результат после закипания
№2.1	каплю раствора йода в иодиде калия	Под действием слюны (в которой содержится амилаза) произошло расщепление крахмала на олигосахариды (сахарозу, а она до глюкозы и фруктозы). Появилось красно-бурое окрашивание (характерная реакция йода на крахмал).	Полная потеря каталитической активности фермента слюны (амилазы) вследствие денатурации их белковой части. Цвет стал белым
№2.2	каплю раствора сульфата меди (II) и 4 капли раствора гидроксида натрия	Под действием слюны (в которой содержится амилаза) произошло расщепление крахмала на олигосахариды . Глюкоза вступает в реакцию с гидроксидом меди (II) (растворяет) и ведет себя как многоатомный спирт. Появилось ярко синее окрашивание (качественная реакция на многоатомные спирты).	Полная потеря каталитической активности фермента слюны (амилазы) вследствие денатурации их белковой части. Синяя окраска исчезает. Сначала образуется жёлтый осадок CuОН, который превращается в красно-коричневый осадок Cu₂О. Глюкоза окисляется до глюконовой кислоты.
№1	каплю раствора йода в иодиде калия	Появилось синее окрашивание. Йод является реакцией на крахмал. В присутствии воды гидролиза крахмала не происходит.	При закипании крахмал разлагается, синее окрашивание исчезает.
№1	каплю раствора сульфата меди (II) и 4 капли раствора гидроксида натрия	В начале образуется бледно–голубой осадок гидроксида меди (II) при встряхивании растворяется, раствор приобретают синеватую окраску. В присутствии воды гидролиза крахмала не происходит.	При закипании крахмал разлагается, синее окрашивание исчезает.

7. Вывод:

Ферме́нты - сложные белковые соединения, ускоряющие химические реакции в живых системах.

В данной работе в качестве _________, гидролизующего крахмал на его составные части (мальтозу, глюкозу), выступает _________ слюны. В пробирках № _____ и №______ под действием слюны (в которой содержится амилаза) произошло расщепление крахмала. В пробирке №_______фермент отсутствовал, была добавлена ________, поэтому гидролиза крахмала не произошло.

Одно из свойств ферментов – высокая специфичность. Каждый фермент действует только на одно вещество или группу сходных субстратов, что обусловлено соответствием структуры фермента, точнее его активного центра и структуры субстрата. В данной работе показано действие фермента ______, содержащегося в ________, ускоряющего гидролиз ______________, расщепляя его на олигосахариды.

Активность ферментов зависит от условий среды, среди которых первостепенное значение имеют температура и рН среды. В данной работе показана активность фермента________ в интервале температур 0- 40 °C . Результат после закипания (100 °C ) происходит полная _________ белковой части фермента амилазы и потеря каталитической активности фермента.