Учет выживаемости спермиев

Санкт-Петербургская государственная академия

ветеринарной медицины

Ветеринарный факультет

заочной формы обучения

Шифр - 203114

по акушерству

студента 4 курса СПГАВМ

Санкт-Петербург

1. Особенности строения половых органов хряка и барана, свиньи и овцы с. 3

2. Приготовление растворов и их применение в искусственном осеменении с. 9

3. Характеристика двух физиологических типов спермы с. 12

4. Методика оценки качества спермы по абсолютной выживаемости спермиев с. 14

5. Список использованной литературы с. 17

Особенности строения половых органов

хряка и барана, свиньи и овцы

АНАТОМИЯ ПОЛОВЫХ ОРГАНОВ САМЦОВ.Половые органы самцов состоят из семенников, придатков семенников, спермиопроводов, придаточных половых желез и полового члена (органа совокупления).

Семенники — парные половые железы, помещаются в специальном кожно-мышечном мешке — мошонке, которая у баранов расположена между бедрами под нижней стенкой живота; у хряков семенники находятся позади бедер, близко к анальному отверстию. У баранов они имеют вертикальное положение, а у хряков — наклонное. Семенники имеют яйцевидную форму, слегка сплющены с боков.

Кожа мошонки покрыта короткими тонкими, иногда едва заметными волосами, содержит сальные и потовые железы. По средней линии ясно выражен шов мошонки. Под кожей мошонки находится мышечно-эластическкй слой, который состоит из соединительной ткани с эластическими волокнами и значительного количества пучков гладкой мышечной ткани. При сокращении мышц волокон кожа мошонки сморщивается и делается складчатой.

Мошонка разделена перегородкой из соединительной ткани на два отделения. В каждом из них находится по семеннику. Полости отделений мошонки сообщаются с брюшной полостью через паховые каналы. Они выстланы общей влагалищной оболочкой, являющейся продолжением брюшной стенки и состоящей из волокнистой ткани и серозного слоя. К наружной поверхности общей влагалищной оболочки прилегает сильная мышца, которая при сокращении подтягивает мошонку с семенниками ближе к брюшной стенке.

Семенники развиваются в поясничной части брюшной полости плода, когда он находится еще в утробе матери. В первые месяцы после рождения, а у некоторых животных перед рождением семенники опускаются в мошонку через паховые каналы брюшной стенки.

Семенники и их придатки покрыты серозной оболочкой. При опускании семенника в мошонку вместе с ним опускаются спермиопровод, кровеносные и лимфатические сосуды, нервы и поддерживающая семенник связка; все это покрыто серозной оболочкой и называется семенным канатиком. Семенной канатик содержит также мышцу — внутренний подниматель семенника, состоящий из гладких волокон.

Под серозной оболочкой семенники имеют белочную соединительнотканную оболочку, от которой внутрь отходит много перегородок. Промежутки между перегородками заполнены очень извитыми микроскопическими малыми семенными канальцами, в которых образуются мужские половые клетки — спермии. Все извитые канальцы соединяются в середине семенника в прямые канальцы, которые при выходе образуют сеть; от сети отходит несколько протоков — выводящих канальцев, впадающих в проток канала придатка семенника, по которому спермии перемещаются в спермиопровод.

Придаток непосредственно прилегает к семеннику. Его условно делят на три части: головку — начало придатка, тело, расположенное вдоль семенника, и хвост придатка — его конечная часть.

Просвет канала в начале придатка очень узкий — 0,1—0,2мм. По направлению к хвосту он постепенно расширяется, а в хвосте имеет диаметр 1—2 мм и хорошо различим простым глазом. Канал придатка представляет собой развитую длинную трубку. Его стенки состоят из соединительной ткани и мышечных волокон, пронизаны кровеносными сосудами и разветвлениями нервов. Внутри канал выстлан цилиндрическим реснитчатым эпителием.

По данным ряда исследователей, длина канала придатка семенника у животных разных видов колеблется от 50 до 80 м. Длина канала увеличивается с возрастом животного.

Спермиопроводы, левый и правый, являясь продолжением канала придатка, проходят в семенных канатиках, проникают через паховые кольца в брюшную полость, располагаются над мочевым пузырем, сближаются и впадают в шейку мочевого пузыря.

Стенка снермиопровода состоит из слизистой оболочки с продольными складками, выстланной цилиндрическим эпителием; мышечной оболочки с двумя слоями — продольным и круговым. Сверху спермиопровод покрыт серозной оболочкой. Над мочевым пузырем перед впадением в мочеполовой канал спермиопроводы значительно утолщены. Эти утолщения называются ампулами спермиопроводов. В их стенках имеются железы, выделения которых смешиваются со спермиями во время эякуляции. Кроме того, у быка и барана ампулы служат местом накапливания спермиев во время полового возбуждения перед садкой. У хряка ампулы развиты слабо.

Мочеполовой канал, начинаясь с шейки мочевого пузыря, по тазовому сокращению направляется в сторону ануса (заднепроходного отверстия), где образует изгиб вниз, затем вперед и входит в половой член. В тазовой части мочеполовой канал окружен уретральной мышцей, под которой имеется еще сосудистая, или кавернозная, оболочка. Она слабо развита у барана, ее нет у хряка. Слизистая оболочка мочеполового канала выстлана многослойным эпителием и содержит много маленьких уретральных желез, выделяющих жидкий секрет.

В тазовую часть мочеполового канала, кроме спермиопроводов и мелких уретральных желез (открываются отверстия придаточных половых желез: пузырьковидных, предстательной и луковичных, или куперовых). Их выделения смешиваются со спермиями во время эякуляции.

Пузырьковидные железыпарные, расположены над мочевым пузырем по бокам от ампул спермиопроводов. Их отверстия впадают в мочеполовой канал вблизи от отверстия спермиопроводов. Пузырьковидные железы похожи на два мешочка длиной 12—15 см; у баранов они бугристые, длиной у быка 5 см, шириной 2,5, толщиной 1,5 см; у хряка длиной до 12 см, шириной до 7 и толщиной 3 см.

У барана и хряка пузырьковидные железы вырабатывают жидкий секрет.

Предстательная железарасположена над начальной частью мочеполового канала и открывается в него многими протоками возле протоков пузырьковидных желез. Вырабатывает жидкий секрет щелочной реакции. Хорошо выражена у хряков; у баранов она слабо развита и в виде маленьких железок рассеяна внутри стенок мочеполового канала.

Куперовы, или луковичные, железы лежат по бокам мочеполового канала. Наибольшей величины они достигают у хряка (до 14см длины, 4см ширины); выделяют густой, желеобразный секрет. У барана эти железы небольшие, 1—3 см длиной, каждая из них открывается одним протоком в мочеполовой канал. Секрет куперовых желез у баранов жидкий и прозрачный.

Половой член (пенис)— орган для введения спермы в половой аппарат самок. В половом члене различают корень, тело и головку. Корень — основание полового члена — прикрепляется двумя ножками к седалищным костям. От седалищных бугров половой член направляется вниз, затем поворачивает вперед под седалищным сращением. Отсюда начинается тело полового члена, оно помещается между бедрами, под брюшной стенкой. Тело заканчивается головкой.

Остов полового члена состоит из покрывающей его оболочки из соединительной ткани. От этой оболочки внутрь отходят многочисленные перегородки. Образования между ними называются пещеристыми, или кавернозными, телами. Пещеристые тела представляют собой измененные кровеносные сосуды с большими расширениями — пещерами, или кавернами, соединяющимися между собой и выстланными, как все кровеносные сосуды, эндотелием. Пещеристые тела будут артериальными, если они представляют собой расширение артериальных сосудов, и венозными, если расширены вены. Различают два основных (правое и левое) пещеристых артериальных тела.

Артерии и вены, образующие каверны, имеют участки с мышечной стенкой, способной быстро пропускать большое количество крови и задерживать ее при выходе из каверн. Пещеристые тела наполняются кровью при половом возбуждении, и это создает эрекцию полового члена.

На нижней поверхности тела пениса имеется глубокий желоб, в котором помещается мочеполовой канал. Он состоит из пещеристого тела, мышечной оболочки и внутри выстлан многослойным эпителием: Передняя часть полового члена имеет кожный покров.

У барана и хряка половой член имеет зигзагообразный изгиб. В таком состоянии его удерживают две мышцы, идущие от места изгиба к корню пениса и седалищным костям. Вследствие изгиба половой член в спокойном состоянии помещается в препуциальном мешке. Во время полового возбуждения, при наполнении кавернозных тел кровью, половой член выпрямляется и выдвигается из препуция.

На конце полового члена барана имеется небольшая головка с отростком мочеполового канала. Этот отросток у барана достигает 3—4 см длины и во время эякуляции вибрирует и разбрызгивает сперму по поверхности глубокой части влагалища овцы. У хряка конечная часть полового члена спиралеобразно закручена.

Препуций, или препуциальный мешок, — кожное образование, облегающее половой член, расположен на брюхе впереди мошонки. У жеребцов он имеет глубокие складки и при спокойном состоянии полового члена представляет собой двойной мешок. При эрекции складки препуция натягиваются, одевая тело полового члена. В стенке препуция находится много сальных и потовых желез.

На поверхности полового члена есть много чувствительных нервных окончаний. У барана они сосредоточены главным образом на кончике полового члена, а у хряка — в области головки и внутреннего листка препуция, покрывающего во время эрекции основание полового члена.

АНАТОМИЯ ПОЛОВЫХ ОРГАНОВ САМОК.Половые органы самок сельскохозяйственных животных состоят из яичников (основные половые железы), яйцепроводов (место оплодотворения), матки (места развития плода), влагалища с преддверием, клитором и половыми губами (совокупительные органы).

Яичники — парные органы, в них образуются и проходят все стадии роста женские половые клетки — яйцеклетки. Яичники не имеют специальных выводных протоков, и созревшие яйцеклетки выделяются в результате нарушения стенки яичника.

Яичники подвешены на специальной связке позади почек. Они расположены в тазовой области, имеют округлую или овальную форму, плотные; размеры их у овцы 1,5X1 см.

У свиней яичники помещаются в задней трети брюшной полости. Нижний край яичников, обращенный к брюшной стенке, вогнут и образует в середине овуляционную ямку. У свиньи яичники неправильной бобовидной формы, длина их в среднем 3 см, ширина 2 см, поверхность бугристая. Размер и масса яичников зависят от возраста животных и изменяются при разных стадиях роста фолликулов и желтых тел.

Яичники овец и свиней покрыты клетками зародышевого эпителия, из которого во время эмбрионального развития животного образуются фолликулы. Под зародышевым эпителием находится корковый слой, в котором имеется множество фолликулов на разных стадиях развития и дегенерации (атрезии). В фолликулах развиваются яйцеклетки. Внутри яичника расположены соединительная ткань, мышечные волокна, разветвления сосудов и нервов — сосудистая зона.

Яйцепроводы — тонкие, сильно извитые трубочки, находящиеся между яичниками и рогами матки. По ним вышедшие из яичников яйцеклетки поступают в матку. Длина яйцепроводов в вытянутом состоянии достигает у свиней 25—30см, у овец—10— 15 см. Просвет яйцепровода постепенно суживается по направлению от яичника к матке. В начальной части его, возле яичника, имеется воронкообразное бахромчатое расширение — воронка яйцепровода. Рядом с яичниковой бахромкой (место соединения бахромы с яичником) и яичником имеется небольшое углубление — сумка яичника, образованная его брыжейкой. Она способствует попаданию яйцевых клеток из яичника в воронку яйцепровода, а не в брюшную полость. Противоположный конец яйцепровода очень узкий.

У овец и свиней яйцепровод без резких границ переходит в рог матки.

Стенки яйцепровода состоят из слизистой оболочки, выстланной мерцательным эпителием, мышечного слоя и серозной оболочки. Слизистая оболочка яйцепровода имеет много продольных складок, заполняющих канал яйцепровода.

Матка у животных расположена между прямой кишкой и мочевым пузырем. Она подвешена на широкой маточной связке, которая прикреплена к поясничным мышцам. У овец матка находится в тазовой полости, заходя частично в брюшную; у свиней она почти вся расположена в брюшной полости.

Различают шейку, тело и рога матки. У овец тело матки небольшое, не превышает в длину 5см. Рога матки у овцы — 8—12 см. Они простираются сначала несколько вверх и вперед от тела матки, затем загибаются вниз и назад и переходят в яйцепроводы. Выпуклый край рога обращен вперед и книзу. Шейка матки овцы длиной около 3—6 см. Тело матки у свиньи развито слабо (длиной 5— 10 см). Рога матки у свиней в связи с их многоплодием длиной до 200 см и имеют вид кишечных петель. Шейка значительной длины (до 20 см), не выступает в свод влагалища, как у других животных. У овец, кроме того, на слизистой оболочке имеется четыре ряда возвышений — карункулов, по 10—15 в каждом ряду Во время беременности карункулы значительно разрастаются и являются местом соединения наружной оболочки плода с маткой.

Мышечная оболочка матки состоит из двух слоев гладких мышечных волокон: внутреннего кольцевого и наружного продольного. Между ними расположена сеть кровеносных сосудов. Снаружи матка покрыта серозной оболочкой.

В шейке матки кольцевой слой мышц образует сфинктер. У овец в канале шейки матки слизистая оболочка собрана в поперечные и продольные складки, а у свиньи — поперечные складки — валики, образующие извилистый канал и способствующие его плотному замыканию.

Влагалище расположено в тазовой полости под прямой кишкой. Длина его у овцы 9—10 см; у свиньи — узкое, длиной 18—30 см. Различают собственно влагалище — более длинную часть, обращенную к шейке матки, и преддверие влагалища. На границе между этими отделами, на нижней стороне влагалища, находится отверстие мочеиспускательного канала. Снаружи преддверие влагалища переходит в половую щель, образуемую половыми губами, в нижнем углу которых помещается клитор — орган, богатый нервными окончаниями и по строению подобный половому члену (рудимент).

Стенка влагалища состоит из трех слоев: слизистой оболочки, мышечного слоя и наружной соединительной оболочки. Выстилающая влагалище слизистая оболочка состоит из многослойного эпителия и образует продольные складки.

Органы полового аппарата самок сельскохозяйственных животных снабжаются кровью через ответвления передней, средней и задней (парных) маточных артерий, а также через мочеполовую внутреннюю срамную артерию и артерию промежности. Иннервируются симпатическими и парасимпатическими нервными волокнами. Симпатические нервы отходят от заднего брыжеечного узла, парасимпатические — от спинных центров.

В стенке матки располагаются как чувствительные, так и двигательные нервные волокна. Они находятся в соединительнотканных прослойках между пучками мышц; их окончания иннервируют мышцы, сосуды, слизистую оболочку матки и шейки матки. В слизистой оболочке влагалища, особенно в преддверии, имеется много чувствительных нервных окончаний.

Приготовление растворов и их применение

в искусственном осеменении

Главное преимущество метода искусственного осеменения — это возможность максимально использовать высокоценных племенных производителей путем осеменения многих самок спермой одного эякулята. Чтобы увеличить объем эякулята, а также для того, чтобы сохранить оплодотворяющую способность спермиев на более длительный срок при хранении спермы вне организма, надо разбавить сперму специальными биологическими и синтетическими средами. Для сохранения спермы вне организма требуются условия, которые тормозили бы расходование внутренних энергетических запасов в спермиях, сохраняли бы их оплодотворяющую способность и не вызывали гибель.

Среды для разбавления спермы должны иметь определенные физико-химические свойства и такую концентрацию составных веществ (компонентов), при которой осмотическое давление было бы наиболее благоприятным для жизнеспособности спермиев того или иного вида животных. Поэтому следует применять качественные компоненты, точно отвешивать вещества в соответствии с рецептом разбавителя и готовить его на дистиллированной воде, чтобы получить необходимое осмотическое давление среды.

При составлении рецептов разбавителей надо учитывать, что спермин сохраняют жизнеспособность только в определенных пределах кислотности (концентрации водородных ионов). Избыточная кислотность и чрезмерная щелочность, как указывалось, убивают спермиев. Следовательно, в разбавители спермы могут входить слабые кислоты и щелочи в незначительных количествах. Разбавители не должны содержать солей многовалентных металлов (свинца, олова и др.), а также различных ядовитых и пахучих веществ, губительно действующих на спермиев. Для приготовления сред нужно брать химически чистые компоненты. Кроме того, они должны быть вполне доброкачественными, отвечающими соответствующему ГОСТу.

В разбавители вводят сахара (неэлектролиты): глюкозу или лактозу и др., которые служат спермиям энергетическим материалом для гликолиза (фруктолиза) и процессов дыхания. Сахара можно заменять гликоколом (аминоуксусной кислотой), медом.

Разбавитель должен устранять или ослаблять температурный шок (холодовый удар) спермиев. Для этого в состав разбавителей введен желток куриного яйца, содержащий лецитин и повышающий устойчивость спермиев к резкому охлаждению, а при замораживании — глицерин.

В сперме барана или быка при хранении образуется молочная кислота; желток куриного яйца, вводимый в разбавитель, имеет реакцию более кислую, чем сперма (рН 6,2). Естественная буферная способность спермы не может полностью нейтрализовать молочную кислоту и кислотность желтка куриного яйца. Поэтому в состав разбавителей спермы быка и барана нужно вводить лимонно-кислый натрий (цитрат), являющийся буфером и имеющий несколько щелочную реакцию (рН 7,8 — 8,0); он нейтрализует излишнюю кислотность.

В целях понижения содержания в сперме ионов кальция и магния в состав некоторых синтетических сред для разбавления спермы, например хряка, вводят двунатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (синонимы ЭДТА, хелатон-3, трилон-Б), которая, связывая ионы кальция и магния, тормозит активность ферментов протеаз, аденозинтрифосфотаз и понижает обмен веществ в спермиях, сохраняемых при комнатной температуре. Вследствие этого спермин более продолжительное время сохраняют свою живучесть.

Для предупреждения развития микроорганизмов в сохраняемой сперме в разбавители добавляют антибиотики и сульфаниламидные препараты (стрептомицин, пенициллин и стрептоцид или спермосан-3) в дозах, указанных в действущих инструкциях по искусственному осеменению (санация спермы).

Среды, применяемые для разбавления спермы, должны быть стерильными.

В.К. Милованов (1962) предложил различать три класса синтетических сред или разбавителей спермы в зависимости от их состава и назначения:

класс А— экстендоры (от лат. экстендо — увеличивать, расширять). Это сахаросолевые растворы, применяемые для разбавления спермы с целью увеличения ее объема, но без охлаждения, хранения и транспортировки (глюкозо-фосфатные, глюкозные и др.);

класс Б— протекторы (защитные среды). Представляют собой те же экстендоры, но с добавлением к ним желтка куриного яйца, глицерина или других веществ, предохраняющих спермин от холодового удара и кристаллизации при замораживании;

класс В— имплементоры (оснащенные), то же экстендоры или протекторы, но к ним добавлены специальные вещества, воздействующие на органы размножения самок при осеменении, например ферменты (муциназа), нейротропные (прозерин, карбахолин), гормональные (окситоцин, питуитрин) и другие вещества. Муциназа, например, разжижает связь в шейке матки и способствует таким образом продвижению спермиев. Гормональные и нейротропные препараты вызывают усиление сокращения матки.

Рецептура синтетических сред для разбавления спермы весьма разнообразна как в количественном, так и в качественном отношении: она зависит от вида животного и способа хранения разбавленной спермы вне организма.

Приготовление разбавителей (общие положения). Вся посуда для приготовления разбавителя, а также стеклянные палочки, пипетки, термометр для измерения температуры в разбавителе должны быть чистыми и простерилизованными. Мензурки и банки с разбавителем и разбавленной спермой закрывают стерильными крышками или полиэтиленовыми салфетками.

Синтетические среды готовят на прокипяченной дистиллированной воде. Глюкозу, лактозу и другие вещества используют чистые, без загрязнения, с нормальной влажностью по ГОСТу. Куриные яйца применяют доброкачественные и только из хозяйств, благополучных по инфекциям птиц.

Готовят разбавители непосредственно перед получением спермы от производителей с таким расчетом, чтобы от времени приготовления до момента использования прошло не более 3—4 ч. В стерильный сосуд (колбу) с чашки весов, предварительно протертой тампоном, смоченным 90%-ным спиртом, высыпают точно отвешенные в соответствии с рецептом глюкозу и другие вещества (кроме желтка, глицерина и антибиотиков), входящие в состав разбавителя, вливают необходимое количество дистиллированной воды и размешивают покачиванием колбы до полного растворения. Если нет растворимого стрептоцида, а имеется слаборастворимый, то его первым нужно отвесить и всыпать в колбу, залив небольшим количеством горячей дистиллированной воды. Затем среду стерилизуют в течение 5—10 мин в водяной бане и охлаждают до 35—40°С.

Куриные яйца, из которых берут желток, обрабатывают следующим образом: тщательно моют щеткой, протирают спиртовым (96%-ным) тампоном, раскалывают пополам, сливают белок в банку, а желток осторожно перекладывают на стерильный листок фильтровальной бумаги. Держа его в левой руке, перекатывают желток на бумаге, чтобы остатки белка впитались в бумагу. Стерильным скальпелем прокалывают сбоку пленку желтка и сливают его в стерильную мензурку; левой рукой держат за края фильтровальную бумагу с желтком; а пальцами правой руки поглаживают фильтр снаружи к месту прокола. На фильтре остается только тонкая пленка.

Желток куриного яйца, антибиотики или спермосан-3 и глицерин добавляют в среду, когда ее температура будет не выше 40°С.

Для приготовления молочного разбавителя берут свежевыдоенное молоко от коровы или кобылы, процеживают через чистую марлю в стеклянную или эмалированную посуду и подогревают до кипения; снова процеживают через стерильную марлю и охлаждают до 30—35°С. К.Л. Левин рекомендует подогревать коровье молоко до 94°С. Затем в молоко добавляют желток куриного яйца, антибиотики и также стрептоцид в тех же количествах, что и в синтетические среды. Если сперму, разбавленную молоком, не собираются хранить (при температуре 2—4°С), то желток можно не добавлять. При нагревании, чтобы молоко не выпаривалось, посуду следует накрыть. Можно также использовать сухое полужирное молоко (10 г на 100 мл дистиллированной воды; кипятят до растворения сухого молока).

Характеристика двух физиологических типов спермы

Методика оценки качества спермы

по абсолютной выживаемости спермиев

Показатель подвижности (активности движения) спермиев имеет большое значение при первоначальной оценке полученной спермы. Сперма, в которой отсутствуют спермин с активными поступательными движениями, непригодна для оплодотворения. Тем не менее хорошая подвижность спермиев в только что полученной сперме еще не дает достаточного основания для надежной оценки оплодотворяющей способности, так как движение спермиев может быстро прекратиться.

Решающий показатель в оценке оплодотворяющей способности спермы производителя — продолжительность выживаемости спермиев. Чем дольше спермин в пробирке сохраняют способность двигаться, тем больше вероятность оплодотворения самки такой спермой. Выживаемость спермиев характеризует их устойчивость к внешним воздействиям. Эта устойчивость зависит от нормальности протекания спермиогенеза и степени зрелости спермиев. При плохом уходе, кормлении и содержании самца, чрезмерной половой нагрузке и т. д. выживаемость спермиев ухудшается, и самки, осемененные такой спермой, не оплодотворяются. Выживаемость спермиев снижается также при резком охлаждении спермы, при попадании в нее воды, медикаментов, грязи.

Материалы и оборудование:сперма, синтетические среды (разбавители), пробирки емкостью 2—4 и 7—8 мл или флаконы из-под пенициллина, термос, лед, микропипетки, пипетки мерные на 1—2 и 5—10 м, штативы, стеклянные палочки, микроскопы, мешочек из непромокаемой пленки, термостаты для микроскопа, 3%-ный раствор лимоннокислого натрия.

Ход работы.Сперму быка или барана, разбавленную в 8, 16 и 32 раза синтетической средой, наливают в небольшом количестве (0,5—1 мл) в чистые пробирки емкостью 2—4 мл или в пенициллиновые флаконы.

Сперму жеребцов разбавляют в 4 раза (1:3) лактозо-хелато-цитратно-желчной средой и наливают по 4 мл в пробирки емкостью 7—8 мл. Сперму хряков и кроликов также разбавляют в 4 раза одним из разбавителей спермы. Пробирки (флаконы) закрывают пробками (корковыми или ватными) и выдерживают при комнатной температуре: пробирки с разбавленной спермой барана и быка 45—50 мин, а жеребца и хряка — 15—20 мин. Опускать пробирки в холодную воду нельзя. Затем пробирки помещают в специальный круглый штатив, который ставят на дно термоса для постепенного охлаждения спермы до 0°С. Подвижность спермиев контролируют ежедневно, пока окончательно не прекратится движение всех спермиев. Активность движения спермиев из охлажденной спермы оценивают обязательно при температуре 40°С, причем нагревают до такой температуры только исследуемую каплю, а не всю пробирку со спермой. Для этого из термоса вынимают штатив с пробирками и, чтобы пробирки не согрелись, помещают их в холодную воду с плавающими кусочками льда. Сперму быка или барана размешивают покачиванием пробирки, затем чистой стеклянной палочкой быстро наносят небольшую каплю на предметное стекло, рядом с ней наносят большую каплю 3%-ного раствора лимоннокислого натрия. Обе капли накрывают покровным стеклом, предметное стекло помещают на столик микроскопа, находящегося в термостате. Для нагревания предметного стекла со спермой можно также применять и нагревательный столик.

При нагревании спермин начинают двигаться не сразу, поэтому наблюдение ведут 1—2 мин, пока спермин не проявят наибольшую активность. Оценивают подвижность в месте слияния капли спермы с разбавителем. Каплю спермы жеребца или хряка из пробирки можно контролировать под микроскопом без дополнительного разбавления раствором лимоннокислого натрия.

Даты, часы просмотра и оценки подвижности в баллах записывают в специальные бланки. На основании этих записей устанавливают продолжительность выживаемости спермиев в часах (или сутках) и показатель выживаемости, представляющий сумму произведений средних оценок на время, в течение которого спермин сохраняли способность к движению.

Продолжительность выживаемости спермиев определяется количеством часов от начала наблюдения до момента установления колебательного движения или полной неподвижности всех спермиев, за вычетом половины времени между последним и предпоследним наблюдением. Этот вычет делается потому, что действительное время, когда прекратилось поступательное движение спермиев, неизвестно.

Для вычисления показателя выживаемости сначала складывают баллы двух смежных оценок и сумму делят пополам, чтобы получить средние оценки подвижности спермиев для каждого промежутка между просмотрами. Полученные средние оценки перемножают на часы (t) между просмотрами. Все эти произведения складывают, что и дает показатель выживаемости спермиев, или так называемый абсолютный показатель выживаемости (S) (табл.1).

Учет выживаемости спермиев

Время

просмотра

Время между просмотрами, ч

Сперма, разбавленная в ...раз

число

часы

подвижность спермиев, баллов

средняя оценка за данный промежуток

произведение средней опенки на время

Март
	—	—

	8,5
	7,5
и т.д.
Всего		. . .( )

Хорошая сперма барана и быка, разбавленная в 16 или 32 раза, должна иметь показатель выживаемости не ниже 1400, что во времени выражается 8—9 сут. В очень

хорошей сперме с высокой оплодотворяющей способностью показатель выживаемости иногда достигает 4000. После 3—4 сут хранения подвижность спермиев в сперме быков и баранов должна быть не менее 7 баллов.

Хорошая сперма жеребца должна иметь показатель выживаемости не менее 450, а в часах — не менее 150. Хорошая сперма хряка — показатель выживаемости не менее 900 и оценка по подвижности спермиев не ниже 6 баллов через 3 сут.

Литература

1. Акушерство, гинекология и искусственное осеменение сельскохозяйственных животных/Н.Н. Михайлов, Г.В. Паршутин, Н.Е. Козло и др. – Под редакцией Н.Н. Михайлова. – М.: Агропромиздат, 1990 г.

2. Лебедев М.И., Зеленевский Н.В. Практикум по анатомии сельскохозяйственных животных. СПб.: Агропромиздат, 1995 г.

3. Студентов А.П.Акушерство, гинекология и биотехника размножения. М.: Колосс, 2004 г.