Тема: Строение и свойства белков.

Тема: Строение и свойства белков.

Занятие № 4

Дата: _________

Блок информации ( по указанию преподавателя):

Лабораторная работа.

Качественная реакция на пептидную связь. Количественное определение белка.

Цель работы:изучить свойства белков, обусловленные их строением. Сущность работы:провести опыты, подтверждающие наличие пептидной связи, определить содержание белка в исследуемом растворе.

Реактивы: растворов яичного белка, 1%-ный раствор сульфата меди(II),

10%-ный раствор щелочи.

1. Биуретовая реакция на пептидную связь:

В четыре пробирки помещают по 1 мл растворов яичного белка. В каждую пробирку добавляют по 1 мл раствора гидроксида натрия (c(NaOH) = 1 моль/л). По стенке пробирки по 2 мл раствора сульфата меди(II). Наблюдают появление красно-фиолетовой окраски.

2. Количественное определение белка в растворе:

В основе метода лежит биуретовая реакция ! Для построения калибровочного графика из раствора белка с точно известной массовой долей (ω = 1,00%) готовят четыре раствора методом последовательного разведения. В пять пробирок помещают по 1,00 мл растворов белка: в четыре пробирки – растворы для построения калибровочного графика, в пятую пробирку – исследуемый раствор. Содержимое пробирок перемешивают стеклянными палочками и оставляют на 20 минут при комнатной температуре. Измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре ПЭ – 5300 В. Стандартный раствор готовят смешиванием 1,00 мл дистиллированной воды, 1,00 мл раствора гидроксида натрия и 0,10 мл раствора сульфата меди(II). Длина волны светофильтра – 540 нм. Записывают результаты измерений.

!!!( эту часть работы делать не надо, в таблице представлены данные для построения калибровочного графика).В чистую пробирку помещают 2мл исследуемого раствора , добавляют по 2,00 мл раствора гидроксида натрия и 0,20 мл раствора сульфата меди(II). Содержимое пробирок перемешивают стеклянной палочкой и оставляют на 15 минут при комнатной температуре. Измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре ПЭ – 5300 В. Длина волны светофильтра –

540 нм. Строят калибровочный график D = f (ω, %) (на миллиметровой бумаге) по готовым данным из таблицы и определяют массовую долю белка в исследуемом растворе. Делают вывод о содержание белка в исследуемом растворе.

Массовая доля белка ω, %	1,000	0,75	0,5	0,25	Испытуемый раствор
Оптическая плотность, D	1.1	0,8	0.5	0,2

Калибровочный график D = f ( ω, %) :

Вывод:

Домашнее задание.

1. Приведите фрагменты простых и сложных белков:

__________________________ ____________________________

простой сложный

2. Приведите примеры глобулярных и фибриллярных белков:

_________________________________________________________________________

глобулярные

_______________________________________________________

фибриллярные

3. Какие факторы влияют на денатурацию белка? Какие явления называют необратимой денатурацией?

______________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

_______________________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________

4. Приведите две резонансные формы пептидной связи в белках:

____________________ _______________________

Кето-форма енольная форма

5. За счет чего стабилизируются вторичная и третичная структуры белка?

_____________________________________________________________________________________

6. Напишите цепь гептапептида, состоящего из последовательности аминокислот: серин, валин, тирозин, глутаминовая кислота, валин, аланин, гистидин. Укажите N- и С- концевые остатки. Назовите данный гептапептид.

_______________________________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________