Используя методические рекомендации, изучить устройство флуориметра. Ответить на вопросы, сделать вывод. Ответить на контрольные вопросы.
1. Какие спектрально-люминесцентные характеристики люминофора проводят при люминесцентном анализе?
2. Из каких основных узлов состоят люминесцентные приборы?
3. На какие категории делятся приборы, предназначенные для измерения флуоресценции?
4. Изобразить схему флуариметра.
5. С какой целью используются флуариметры?
6. Какова цель первичного и вторичного светофильтров?
7. Описать назначение и принцип действия лабораторного флуариметра.
Методические рекомендации
При проведении люминесцентного анализа необходимо измерять всевозможные спектрально-люминесцентные характеристики люминофора: интенсивность люминесценции, спектр возбуждения, спектры люминесценции. С этой целью используют различные люминесцентные приборы. Каждый такой прибор включает в себя шесть основных узлов:
– источник возбуждающего света;
– селектор частоты возбуждающего света и частоты люминесценции;
– кюветное отделение, предназначенное для размещения кюветы с измеряемым образцом (стандартным образцом или пробой);
Приборы, предназначенные для измерения флуоресценции, можно разделить на три категории: – флуориметры, флуоресцентные приставки к спектрофотометрам и спектрофлуориметры. Схема простейшего флуориметра приведена на рисунке 2.
Во флуориметрах селекция частот возбуждающего света и света флуоресценции осуществляется с помощью светофильтров. Флуориметры применяют для проведения серийных анализов, где снижение селективности не является большим недостатком, а высокая чувствительность, напротив, представляет собой важное достоинство.
1 − источник УФ излучения; 2 − первичный светофильтр;
При измерении флуоресценции с помощью флуориметров существенное значение имеет правильный выбор светофильтров, необходимых для разделения света, возбуждающего флуоресценцию (первичный светофильтр), и света флуоресценции (вторичный светофильтр). Первичный светофильтр должен пропускать свет в области поглощения определяемого вещества и не должен пропускать свет в области, отвечающей флуоресценции вещества. Вторичный светофильтр должен пропускать флуоресценцию, но возбуждающий свет должен им полностью поглощаться. Источниками возбуждающего света во флуориметрах обычно служат ртутные лампы низкого давления. С целью получения практически сплошного спектра излучения внутренние стенки этих ламп часто покрывают люминофором.
