Что делать. Метод

Что делать. Метод

1. Собрать клетки слизистой поверхности щек. Для этого нужно пожевать щеки в течение хотя бы 30 секунд, набрать в рот 3 мл чистой воды, прополоскать рот и выплюнуть все содержимое в пробирку. Чем дольше жуешь щеки, тем больше клеток соберешь, тем больше ДНК в итоге выделится. Жевать щеки до крови не имеет смысла, так как в клетках крови, эритроцитах, нет ДНК.

2. Долить к полученному раствору с клетками 5–10 мл буферного раствора для лизиса, помешать аккуратно в течение двух минут.

Буферный раствор разрушит клеточные мембраны и мембраны ядер клеток. Таким образом нити ДНК окажутся свободно плавающими в водном растворе. Однако в этом же растворе будет плавать все содержимое клеток: ДНК, РНК, полисахариды, липиды, сложные полимерные соединения… Кроме того, в водном растворе клеточные ферменты начнут постепенно разрушать ДНК. Поэтому ее нужно как можно скорее отделить от других клеточных компонентов.

3. Добавить чайную ложку раствора протеиназы (мезима). После этого пробирку следует поместить на 10 минут в контейнер, в котором поддерживается температура +37° — в банку с подогретой водой. Эстетам подойдет и собственная подмышка.

4. Прибавить охлажденный этиловый спирт из расчета 1:1, при этом пробирку держать строго под углом 45°, не допуская смешивания водной и спиртовой фазы и сохраняя раздел фаз. На этом этапе лучше дать пробирке постоять в течение нескольких минут на столе.

Из всех клеточных компонентов только ДНК быстро и эффективно выпадает в осадок в среде спирта, образуя видимые глазу белые нити. Все остальные компоненты остаются в водной фазе.

5. Белые нити молекул ДНК с пузырьками воздуха, запутавшимися между нитями, начнут образовываться на границе раздела фаз, постепенно двигаясь вверх по пробирке. Если ДНК было много, она сформирует небольшой клубок и всплывет на поверхность, если ДНК было мало, можно слегка потрясти пробирку и подождать еще несколько минут.

6. Для того чтобы ДНК долго хранилась, ее нужно аккуратно отобрать с помощью пипетки вместе с небольшим количеством спирта. ДНК можно поместить в пробирку и хранить в холодильнике при температуре +4°. В спиртовом растворе осадок ДНК стабилен в течение многих лет.

Подверстка

⇐ Предыдущая 123 Следующая ⇒