Холодная стерилизация

Знать:

- сущность определения «стерилизация»

- методы стерилизации

- виды стерилизации, их особенности, диапазон применения . - , эталоны качества стерилизации

Уметь:

- подготовить посуду к стерилизации чашки Петри, пробирки, пипетки, колбы, флаконы к стерилизации

- провести стерилизацию суховоздушным способом.

Стерилизация — освобождение различных объектов от всех форм жизни (полное обеспложивание). В микробиологической практике стерилизации подвергают: инструменты, посуду, питательные среды, бумагу, вату, спецодежду. Стерилизуемый объект должен быть подготовлен к стерилизации. Например посуда должна быть чистой, обезжиренной.

Методы стерилизации:

1. Тепловая (использование температурного фактора)

2. Холодная (ионизирующее радиация, УФЛ, газовая стерилизация, фильтрование). Тепловая стерилизация, ее виды.

1. Фламбирование — прокаливание на огне (спиртовки) — дает эффект полного обеспложивания (от вегетативных и споровых форм). Стерилизуем мелкий инструментарий (пинцеты, ножниц, металлические шпатели), бак.петли, стекла препаратов, иглы. Помнить! Режущие поверхности инструментов (ножницы, скальпели) тупятся, поэтому часто пользоваться этим видом стерилизации в данном случае нельзя.

2. Кипячение — стерилизация неполная: возможно сохранение на стерильном объекте термостойких. споровых форм, вирусов. Стерилизуем: шприцы, иглы, мелкий инструментарий, предметные и покровные стекла, резиновые изделия. Стерилизацию проводят в стерилизаторах. Перед стерилизацией в стерилизатор налить дистиллированную воду с 1-2% бикарбоната натрия, уложить стерилизуемый материал — шприцы в разобранном виде, в иглы вставить мандрены, режущие поверхности инструментов обернуть марлей. Закрыть крышку стерилизатора, включить электроканал. Время стерилизации засекаем с момента закипания воды в стерилизаторе ИЙ) выход пара наружу. Стерилизуем не менее 30 минут.

3. Стерилизация паром под давлением — универсальный вид, дающий полное обеспложивание. Стерилизуем в автоклавах (горизонтальных, вертикальных). На стерилизуемый объект действуем двумя физическими факторами: температура, пар под давлением, между которыми есть зависимость:

Давление в стерилизационной камере (по манометру на корпусе автоклава)	Температура в стерилизационной камере
0 атм.	100С
0,2 атм.	105C
0,5 атм	112С
1 атм	120С
1,5 атм	127С
2 атм	134С

Составные части автоклава:

- стерилизационная камера

- манометр

- предохранительный клапан

- воронка для воды

- кран для выпуска воды

- кран для выпуска пара

Стерилизуемый материал помещают в биксы, пеналы, затем в стерилизационную камеру, которая плотно закрывается массивной крышкой, накладываемой на резиновую прокладку и завинчивающейся «барашками». Стерилизовать автоклавированием можно различные объекты при различных режимах:

- простые питательные среды, перевязочный материал, физраствор стерилизуют при 1 атм. 20-30 минут.

- среды с углеводами —0,5 атм, 15-20 минут

- обеззараживание инфицированного материала n 1,5 — 2 атм. - 20-25 минут и т. д.

Контроль за уровнем температуры в стерилизационной камере, т. е. за правильностью показаний манометра осуществляется о помощью различных веществ, имеющих определенные точки плавления: антипирин 113C, резорцин и сера 119С, бензойная кислота 120C. Эти вещества смешивают с малым количеством красителя (фуксина или метилленовой сини) и запаивают в стеклянные трубочки, которые помещают в вертикальном положении между стерилизуемым материалом. Если температура достаточна, вещество плавится и окрасится в цвет красителя. Для контроля качества стерилизации используют бульонные культуры — вегетативные или споровые, в зависимости от режима работы автоклава. Культуры помещают в биксы, пеналы вместе со стерильным материалом. После стерилизации вскрывают один бикс, извлекают пробирку, помещая затем в термостат при 37C на 24-48 часов. Отсутствие роста свидетельствует о правильной работе прибора.

4. Суховоздушная стерилизация: использование сухого горячего воздуха. Проводится в суховоздушных стерилизаторах, используя два режима: 180С 60 минут и 160C 150 минут. Указанные режимы рекомендованы для изделий из металла, стекла, силиконовой резины. Стерилизация полная. Стерилизуемые объекты заворачивают в бумагу (лабораторную посуду), или помещают в бумажные мешочки. (Бумага влагопроточная, для упаковки продукции марки &). Срок сохранения стерильности трое суток.

5. Стерилизация текучим паром в автоклаве или аппарате Коха — дробная стерилизация. Стерилизуют объекты, не выдерживающие высоких температур (меньше 100С). Например, среды с углеводами, желатином, молоком. Стерилизуют материал при 100С в течение 30-60 минут три дня подряд. При данной температуре погибают вегетативные формы бактерий. Оставшиеся споры прорастают в вегетативные формы в промежутках между повторными прогреваниями и уничтожаются при последующих прогревах. Стерилизуют в автоклаве при не завинченной крышке стерилизационной камеры и открытом выпускном кране.

6. Стерилизация и свертывание Коха — дробная, полная. Свертыватель Коха — плоский металлический ящик с двойными стенками, покрытый теплоизоляционным материалом. В пространство между стенками через специальное отверстие наливают воду. Свертыватель Коха используют для свертывания сывороточных и яичных сред. Пробирки со средами укладывают на дно свертывателя в наклонном положении. Закрывают аппарат крышкой, включают нагрев. Работает на двух режимах: - при температуре 90С 60 минут однократно, при температуре 80-85С 60 минут три дня подряд.

7. Тиндализация — дробная стерилизация при 56-58C в течение часа 5-6 дней подряд на водяной бане и в специальных приборах с терморегуляторами. Стерилизуют белковые жидкие среды, сыворотку, витамины.

8. Пастеризация — стерилизация при 65-70С в течение 1 часа. Стерилизация неполная, уничтожающая .вегетативные формы. Пастеризуют соки, вина, пиво, молоко и другие продукты.

Холодная стерилизация

1. Стерилизация ионизирующим излучением. Проводится у-лучами в у-установке (источник радиоактивности изотоп кобальта 60). Стерилизуют пластмассовую посуду, лабораторную посуду, шприцы одноразового использования, лекарственные вещества.

2. Стерилизация УФЛ — источник УФЛ — ртутно-кварцевые лампы. УФЛ вызывают гибель вегетативных клеток и спор. Стерилизуют воздух в ЛПУ, боксы в микробиологических лабораториях, посуду. Используют бактерицидные лампы (БУВ-15, БУВ-30) с длинной волны УФЛ 260-300 мкм.

3. Газовая стерилизация проводится окисью этилена, или смесью окиси этилена и бромистого этила в газовом стерилизаторе. Стерилизуют пластмассовую посуду, инструментарий, кетгут.

4. Фильтрование проводится с помощью бактериальных фильтров из различных пористых материалов. Стерилизация неполная, так как в фильтре могут оказаться вирусы, которые проходят через поры бактериальных фильтров. Стерилизуют питательные среды, содержащие белок, сыворотку, витамины, а также отделяют бактерии от вирусов, фагов, экзотоксинов.

Фильтры:

1. Зеутца-диски из смеси асбеста с целлюлозой. Толщина 3-5 мм, диаметр 35-140 мм. Бывают марки «Ф» - фильтрующие, задерживающие взвешенные вещества и «СФ» - стерилизующие, задерживающие бактерий.

2. Мембранные — из нитроцеллюлозы, диски белого цвета диаметром 35 мм, толщиной 0,1 мм. В зависимости от диаметра пор их обозначают № 1, 2, 3, 4, 5. Для стерилизации фильтр №1 — 0,35 мкм.

3. Фильтры-свечи: Шамберлана - полый цилиндр с дном, изготовленный из каолина с примесью песка и кварца. Стандартизируют их по размерам пор: L1...L2...L3 и т. д. Беркефельда — из инфузорной земли. По величине пор их обозначают «V» - 3-4 мкм, «N» - 4-7 мкм, «W» - 8-12 мкм.