Методика № 4. приготовления разбавлений образцов при проведении иммуноферментного анализа

Методика № 4

приготовления разбавлений образцов при проведении иммуноферментного анализа

1. Замороженный исходный образец в эппендорфе (см. Методику10) вынуть из морозильника, убедиться в соответствии маркировки и разморозить при комнатной температуре.

2. Размороженный образец аккуратно перемешать, переворачивая эппендорф вверх дном.

3. Согласно методикам проведения ИФА рассчитать необходимое количество образца данной начальной концентрации. Если необходима дальнейшая раститровка то объем рассчитывается согласно таблице п.6.

4. Для того, чтобы получить нужную концентрацию в необходимом объеме воспользуйтесь формулами 1 и 2:

V_k

----- x C_k = V _{исходного образца}(1)

C_i

V_k – V_{исходного образца}= V _{разбавителя}(2),

где C_i – концентрация белка в исходном образце;

C_k – концентрация белка, которую необходимо получить

V_k – объем необходимой концентрации белка

V _{исходного образца}- объем исходного образца

V _{разбавителя} – объем разбавителя

Примечание! Пример расчета см. ниже.

5. В зависимости от необходимого начального объема используйте либо пробирку на 10 мл, либо новый эппендорф. (Для каждого нового образца использовать чистую посуду). В выбранную емкость прилить рассчитанный объем разбавителя, а затем добавьте необходимый объем исходного образца. Аккуратно 5 раз пробулькать при помощи автоматической пипетки при этом механически помешивая носиком пипетки по окружности сосуда. Начальное разведение приготовлено.

6. Для раститровки воспользуйтесь таблицей. При титровании