2 ЗЕРТТЕУ МАТЕРИАЛДАРЫ МЕН ӘДІСТЕРІ

2 ЗЕРТТЕУ МАТЕРИАЛДАРЫ МЕН Ә ДІСТЕРІ

2. 1 Зерттеу материалдары

Зерттеу материалдары ретінде популяциялық генетика зертханасының генетикалық банкінде сақ талғ ан Қ азақ станның қ азіргі заманғ ы тұ рғ ындарының биоматериалдарын (перифериялық қ ан мен буккальды эпителий ү лгілері) пайдаланды (2018 жылғ ы желтоқ сандағ ы есеп бойынша 627 адам). Биоматериал 2014-2017 жж. аралығ ында Қ азақ стан Республикасының ә ртү рлі ө ң ірлеріне экспедициялық сапарлар кезінде қ азақ ұ лтының ө кілдерінен ерікті тү рде ақ паратты келісім алу арқ ылы жиналды. Еріктілердің этникалық жә не рулық сə йкестігі жеке толтырылғ ан сауалнамамен тү сіндірілді. Сауалнамалар ө ң деліп компьютерлік қ орғ а енгізілді.

Сонымен қ атар, біздің зерттеуімізде салыстырмалы талдау ү шін, Family Tree DNA (АҚ Ш) деректер қ орынан қ азақ тар туралы жә не Е. Ә шірбеков жә не басқ алары қ азақ популяциясына жү ргізген зерттеу жұ мыстарының нә тижелері қ олданылды.

2. 2 Зертеу ә дістері

2. 2. 1 Қ ан ү лгілерінен геномды ДНҚ молекуласын бө ліп алу

Геномдық ДНҚ молекуласы (арнайы ЭДТА реагенті бар пробиркадағ ы) мұ здатылғ ан (-20°С) перифериялық қ ан ү лгілерінен бө ліп алды. Ол ү шін GeneJET Genomic DNA Purification Kit деп аталатын коммерциялық арнайы жиынтық қ олданылды (ThermoScientific, АҚ Ш). ДНҚ молекуласын бө ліп алу шығ арушы компанияның нұ сқ аулығ ы арқ ылы жү зеге асырылды. Бө лінген жә не тазартылғ ан ДНҚ ү лгілері келесі ретте -20°С температурада арнайы мұ здатқ ышқ а сақ тауғ а қ ойылды.

2. 2. 2 ДНҚ ү лгілерінің концентрациясын сандық жә нecaпaлық бaғ aлау

Барлық бө лініп алынғ ан ДНҚ ү лгілерінің концентрациясы жә не сапалық бағ алауы арнайы ДНҚ -фотометрдің (Biofotometer Plus, Eppendorf, Германия) жә не агарозды электрофорездік талдау арқ ылы жү зеге асырылды. ДНҚ -фотометрлік талдау ү шін ДНҚ молекуласының cyлы epітіндіcінің aдсорбцияcының ө лшемі 3 толқ ын ұ зындығ ын пайдалана отырып: 260 нм, 280 нм жә не 320 нм анық талды. ДНҚ молекуласы (D) қ ұ paмының тазалығ ын (PНҚ немece белоктан) кoэффициeнт apқ ылы: K=D₂₆₀/D₂₈₀eceптелді. Taза ДНҚ молекуласы ү шін K=1, 8 нeмeceoдaн тө мeн. Cyepітіндісіндeгі ДНҚ молекуласының кoнцентpaцияcы келесі формула бойынша анық талды:

C= (D₂₆₀– D₃₂₀) х 50 х K_{ерітінді} (мкг/мл)

D₂₆₀–260 нм тoлқ ын ұ зындығ ындa сің ірyкoэффициeнті;

D₃₂₀–320 нм тoлқ ын ұ зындығ ындa сің ірyкoэффициeнті;

К_{ерітінді}_–eрітy кoэффициeнті.

ДНҚ мoлекyлacының бө лініп алу сапасы 0, 7% агарозды гельде (50В, 299 мА, 1 сағ ат) электрофорез ә дісімен бромды этидий реагентімен бояудан кейін, ультракү лгін сә улесі кө мегімен анық талды. Бө лінген ДНҚ молекуласын анық тау Quantum ST5(Vilber Lоurmаt, Франция)гель-қ ұ жаттау қ oң дыpғ ысы apқ ылы жү зеге асырылды.

⇐ Предыдущая 2 3 4 5 678 9 10 11 Следующая ⇒