Вопросы к экзамену по теме «Бактериальная экспрессия рекомбинантных белков»

1. Поставлена задача получить реко мбинантный белок с молекулярной массой 30 кДа. Известно, что в структуре этого белка есть 2 дисульфидные связи, и он не подвергается в клетке посттрансляционным модификациям. Какую систему (или системы) для его экспрессии стоит выбрать и почему?

2. Поставлена задача получить реко мбинантный белок с молекулярной массой 80 кДа. Известно, что в структуре этого белка нет дисульфидных связей, однако, в клетке он подвергается O-гликозилированию. Какую экспрессионную систему стоит выбрать и почему?

3. При анализе экспрессии методом белкового электрофореза целевой белок обнаруживался не только в пробах после индукции, но и в пробах до индукции ( в меньшем количестве). С чем это может быть связано?

4. Как можно изменить условия экспрессии целевого белка, который в стандартных условиях экспрессии ( 3 часа, 37° С) получается в нерастворимой форме ( в виде телец включения))?

5. Исходно к КДНК целевого белка была пристроена pelB-последовательность для экспорта в периплазматическое пространство. Детекция целевого белка в пробах после индукции методом Вестерн-блоттинга показала наличие двух полос с близкой молекулярной массой.

6. Какие существуют способы увеличения выхода экспрессии целевого белка?

7. Какие бывают экспрессионные штаммы, и как выбрать подходящий ( рассмотрите разные ситуации)?

8. Если целевой белок получается в нерастворимой форме ( оптимизация условий экспрессии ничего не дала), существуют ли способы «возврата» его нативной структуры?

9. Какие существуют способы лизиса бактериальных клеток в случае pLysS, pLysE и неpLys –штаммов.